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氣相色譜柱的選擇方法 色譜柱操作規(guī)程

時(shí)間:2020-06-20    來(lái)源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
【導(dǎo)讀】氣相色譜柱的分離效果主要取決于其固定相,柱長(zhǎng)度,柱內(nèi)徑,液膜厚度這幾個(gè)因素,從原理上講,這幾個(gè)因素相同的柱子,其分離效果是完全一樣的。1)柱長(zhǎng)度的選擇分



    氣相色譜柱的分離效果主要取決于其固定相,柱長(zhǎng)度,柱內(nèi)徑,液膜厚度這幾個(gè)因素,從原理上講,這幾個(gè)因素相同的柱子,其分離效果是完全一樣的。
    1)柱長(zhǎng)度的選擇
    分辨率與柱長(zhǎng)的平方根成正比。在其他條件不變的情況下,為取得加倍的分辨率需有4倍的柱長(zhǎng)。較短的柱子適于較簡(jiǎn)單的樣品,尤其是由那些在結(jié)構(gòu)、極性和揮發(fā)性上相差較大的組分組成的樣品。
    一般來(lái)說(shuō):
    15m的短柱用于快速分離較簡(jiǎn)單的樣品,也適于掃描分析;
    30m的色譜柱是常用的柱長(zhǎng),大多數(shù)分析在此長(zhǎng)度的柱子上完成;
    50m、60m或更長(zhǎng)的色譜柱用于分離比較復(fù)雜的樣品。
    應(yīng)該注意,柱長(zhǎng)增加分析時(shí)間也增加。
    2)柱內(nèi)徑的選擇
    柱徑直接影響柱子的效率、保留特性和樣品容量。小口徑柱比大口徑柱有更高柱效,但柱容量更小。
    0.25mm:具有較高的柱效,柱容量較低。分離復(fù)雜樣品較好。
    0.32mm:柱效稍低于0.25mm的色譜柱,但柱容量約高60%。
    0.53mm:具有類似于填充柱的柱容量,可用于分流進(jìn)樣,也可用于不分流進(jìn)樣,當(dāng)柱容量是主要考慮因素時(shí)(如痕量分析),選擇大口徑毛細(xì)管柱較為合適。
    3)液膜厚度的選擇
    液膜厚度影響柱子的保留特性和柱容量。厚度增加,保留也增加。
    0.1~0.2m:薄液膜厚度的毛細(xì)管柱比厚液膜的毛細(xì)管柱洗脫組分快,所需柱溫度低,且高溫下柱流失較小,適用高沸點(diǎn)的化合物的分析。
    0.25~0.5m:常用的液膜厚度。
    厚液膜:對(duì)分析低沸點(diǎn)的化合物較為有利。
    4)固定相的選擇
    不同的固定相對(duì)不同的分析物的影響不同,根據(jù)相似相溶原理,性質(zhì)越相近,固定相對(duì)其的流動(dòng)阻力越大,其保留時(shí)間越長(zhǎng).色譜柱就是通過(guò)這個(gè)原理將不同性質(zhì)的混合物相互分開的。





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【導(dǎo)讀】如何選擇蘭化所氣相色譜柱,我們可以從以下四個(gè)方面入手。1、固定相的選擇當(dāng)面對(duì)一個(gè)未知物時(shí),先試用現(xiàn)有GC柱,如果該柱分離不理想,根據(jù)你對(duì)樣品的了解,基本



    如何選擇蘭化所氣相色譜柱,我們可以從以下四個(gè)方面入手。

    1、固定相的選擇

    當(dāng)面對(duì)一個(gè)未知物時(shí),先試用現(xiàn)有GC柱,如果該柱分離不理想,根據(jù)你對(duì)樣品的了解,基本原則是分析物與固定相有相似化學(xué)性質(zhì)時(shí)才會(huì)相互作用。這說(shuō)明對(duì)樣品越了解,越容易找到合適的固定相。

    非極性分子——通常僅由C和H組成并且無(wú)偶極矩,直聯(lián)(正烷)是常見(jiàn)的非極性化合物的例子。

    極性分子——主要由C和H組成同時(shí)也有其他原子,如:N、O、P、S或鹵素。樣品包括有醇類、胺類、硫醇類、酮類、有機(jī)鹵化物等。

    可極化物質(zhì)——主要由C和H組成同時(shí)包含不飽和鍵。通常有:炔和芳香族化合物。

    如果你的樣品是具有相似的化學(xué)性質(zhì)的非極性組分的混合物,比如大多數(shù)石油餾分中的烴,你可以試用OV-1毛細(xì)管色譜柱,它按沸點(diǎn)順序分離。如果你懷疑有芳族化合物,試著用有苯基的SE-52或SE-54柱。極性或可極化組分樣品能夠在中極性和/或可極化固定相色譜柱上進(jìn)行分析,如有苯基或類似基團(tuán)固定相,比如OV-17或OV-225柱。如果需要更高極性,可以選用聚乙二醇(PEG)固定相,即通常所說(shuō)的WAX固定相。

    2、長(zhǎng)度選擇

    一般情況,15m柱用于快速篩選簡(jiǎn)單混合物或分子量極高的化合物。30m柱是比較普遍的柱長(zhǎng)。超長(zhǎng)柱(50、60或100m、150m)用于非常復(fù)雜的樣品。

    柱長(zhǎng)度在柱性能上不是一個(gè)重要參數(shù),例如:加倍柱長(zhǎng),恒溫分析時(shí)間則加倍但峰分辨率僅增大約40%。如果分析只是比較好但不是特別好時(shí),有比增加柱長(zhǎng)度更好的辦法來(lái)改進(jìn)分析結(jié)果,如考慮更薄的膜,優(yōu)化載氣流量或用程序升溫等。

    分析活性極強(qiáng)的組分是一種特殊情況。如果樣品與柱材質(zhì)接觸,那么峰會(huì)嚴(yán)重拖尾。較厚的膜、相對(duì)短的柱可以由于較少的柱材和較厚的固定液體掩蓋其表面以屏蔽活性表面,從而減少相互作用的機(jī)會(huì)。

    3、內(nèi)徑選擇

    增加直徑意味著需要更多的固定相,即使厚度不增加,也有較大的樣品容量。同時(shí)也意味著降低了分離能力且流失較大。小口徑柱為復(fù)雜樣品提供了所需的分離,但通常因?yàn)橹萘康托枰至鬟M(jìn)樣。如果分離度的降低能夠接受的話,大口徑柱可以避免這一點(diǎn)。當(dāng)樣品容量是主要的考慮因素時(shí),如:氣體、強(qiáng)揮發(fā)性樣品、吹掃和捕集或頂空進(jìn)樣,大內(nèi)徑甚至PLOT柱可能比較合適。

    同時(shí)色譜柱內(nèi)徑的選擇中要考慮儀器的限制和要求。填充柱的進(jìn)樣口可以使用大口徑毛細(xì)管柱(0.53mm內(nèi)徑),而小口徑柱就不一定能夠被連接在儀器上使用。毛細(xì)管柱的進(jìn)樣口一般可以用于所有內(nèi)徑范圍的毛細(xì)管柱。(0.1mm、0.25mm、0.32mm、0.53mm)直接聯(lián)用的GC/MSD和MSD需要小口徑柱,因?yàn)?font>真空泵不能處理大口徑柱的大流量。查明你的整個(gè)系統(tǒng)看看你適合那些柱內(nèi)徑的色譜柱。

    4、膜厚選擇

    薄膜比厚膜洗脫組分快、峰分離好、溫度低。

    一般而言,蘭化所氣相色譜柱的膜厚為0.25到0.5μm。對(duì)于流出達(dá)300℃的大多數(shù)樣品(包括蠟、甘油三脂、甾族化合物等)能夠很好的分析。對(duì)于更高的洗脫溫度,可以用0.1μm的液膜。而厚液膜對(duì)于低沸點(diǎn)化合物有利,對(duì)于流出溫度在100℃~200℃之間的物質(zhì),用1~1.5μm的液膜效果較好。超厚膜(3~5μm)用于分析氣體、溶劑和可吹掃出來(lái)的物質(zhì),以增加樣品組分與固定相的相互作用。另一個(gè)選擇厚膜的原因是當(dāng)用大口徑柱時(shí)保持分離度和保留時(shí)間。由于這個(gè)原因,大口徑柱都只有厚膜。厚膜的流失較大,溫度極限必須隨膜厚度增加而下降。

    綜上所述,我們選擇蘭化所氣相色譜柱時(shí),可以從固定相、長(zhǎng)度、內(nèi)徑以及膜厚4個(gè)方面來(lái)考慮。





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怎么操作能夠延長(zhǎng)色譜柱使用壽命

    一、去除樣品和流動(dòng)相中的固體顆粒

    樣品和流動(dòng)相中含有的固體顆粒物質(zhì)會(huì)堵塞色譜柱篩板,篩板被堵住不僅會(huì)引起柱壓的升高,而且也會(huì)引起柱效下降,因?yàn)楹Y板的堵塞會(huì)引起液流不均,導(dǎo)致色譜峰型拖尾、變寬,從而使柱效下降。

    二、流動(dòng)相的pH應(yīng)在使用的范圍內(nèi)

    由于填料中存在Si-C和Si-O鍵,流動(dòng)相超過(guò)其pH范圍將會(huì)導(dǎo)致硅膠基質(zhì)流失和鍵合相碳鏈斷裂,使柱效下降,使用壽命變短。由于流動(dòng)相的pH控制不當(dāng)而對(duì)色譜柱造成的損害,通常很難使色譜柱恢復(fù),因此必須認(rèn)真對(duì)待,嚴(yán)格控制流動(dòng)相的pH值。

    三、使用保護(hù)柱或在線過(guò)濾器

    樣品和流動(dòng)相經(jīng)過(guò)濾后并不能完全消除固體顆粒物質(zhì),因?yàn)楸玫哪p、密封圈和管路的老化也會(huì)產(chǎn)生固體顆粒物質(zhì),這些固體顆粒被流動(dòng)相帶入色譜柱,堵塞篩板,導(dǎo)致柱壓升高、柱效下降。保護(hù)柱和在線過(guò)濾器上都有篩板,其孔徑與色譜柱孔徑相同,因此可以阻止固體顆粒物質(zhì)到達(dá)色譜柱,有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大比例,因此,除對(duì)樣品和流動(dòng)相進(jìn)行過(guò)濾外,建議您在色譜柱進(jìn)樣端加上保護(hù)柱或在線過(guò)濾器。

    如果確認(rèn)色譜柱柱壓升高是由于進(jìn)樣端篩板被堵引起的,可選擇以下方式進(jìn)行補(bǔ)救:

    1、先在色譜柱前加上保護(hù)柱或在線過(guò)濾器,然后用甲醇、水=20/80ml/min反向沖色譜柱180min。

    2、先在色譜柱進(jìn)樣端加上保護(hù)柱或在線過(guò)濾器,然后反向使用。

    四、正確使用緩沖鹽

    緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機(jī)溶劑,因此緩沖鹽使用不當(dāng)會(huì)使其析出,堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙,使填料板結(jié),柱壓上升;同時(shí)阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展,使色譜柱的保留能力下降,柱效降低。緩沖鹽析出后,去除非常困難,因此,正確的使用緩沖鹽對(duì)延長(zhǎng)色譜柱使用壽命非常重要。

    正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出,因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結(jié)為一句話:使用前要過(guò)濾,使用后要沖洗。具體方法如下:

    1、等度條件:使用緩沖鹽前和使用后需用過(guò)渡流動(dòng)相以1.0ml/min流速?zèng)_洗60min;使用后去除緩沖鹽的另一個(gè)方法是用過(guò)渡流動(dòng)相以0.2ml/min流速?zèng)_洗色譜柱過(guò)夜。

    2、梯度條件:用含有緩沖鹽的流動(dòng)相跑梯度之前,用與初始流動(dòng)相組成相同的過(guò)渡流動(dòng)相以1.0ml/min流速?zèng)_洗60min,再用該過(guò)渡流動(dòng)相以1.0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動(dòng)相的梯度設(shè)定應(yīng)盡量平緩,以避免梯度過(guò)程中緩沖鹽析出。

    注意:過(guò)渡流動(dòng)相是指有機(jī)相和水相的組成與分析流動(dòng)相相同,區(qū)別只是過(guò)渡流動(dòng)相不含緩沖鹽。

    3、緩沖鹽析出的補(bǔ)救方法:

    1)方案1:用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗色譜柱120min

    2)方案2:用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱過(guò)夜。

    五、防止強(qiáng)保留物質(zhì)在色譜柱上存留

    強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積,對(duì)樣品中的化合物產(chǎn)生額外的保留行為,不僅引起峰型變寬、拖尾,使柱效下降,同時(shí)也會(huì)引起保留時(shí)間的變化,累積到一定程度時(shí)還會(huì)導(dǎo)致柱壓升高。由于強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物對(duì)色譜分離的影響是一個(gè)累積效應(yīng),需要一定的時(shí)間才會(huì)體現(xiàn)出來(lái),但對(duì)許多藥品特別是復(fù)雜樣品而言,很難判斷其是否是含有強(qiáng)保留物質(zhì),因此要防止強(qiáng)保留物質(zhì)的累積,需要在每天的日常維護(hù)清洗色譜柱。

    清洗方法:

    1、未使用緩沖鹽:每天分析完成后,先用上述方法除去緩沖鹽。

    2、使用過(guò)緩沖鹽:分析完成后,先用上述方法除去緩沖鹽。

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色譜柱 怎么操作能夠延長(zhǎng)色譜柱使用壽命_色譜柱

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