色譜柱在使用前，可以進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進(jìn)行（出廠測試所使用的條件是較佳條件），只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同?！ ?、樣品的前處理； a、可以使用流動相溶解樣品； b、使用預(yù)處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)； c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)?！ ?、流動相的配制 液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點： a、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中（或長期留在柱中）； b、流動相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)； c、流動相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低柱壓降，延長泵的使用壽命（可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度）； d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，可以使用對紫外吸收較低的溶劑配制； e、流動相沸點不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實驗無法進(jìn)行； f、在流動相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。 3、流動相流速的選擇 因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求較佳柱效，可以使用較佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml/min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳?！ ‘?dāng)選用較佳流速時，分析時間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時間（如使用反相柱時，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量）?！ ∽⒁猓骸 .含水流動相可以在實驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。可以加入疊氮化鈉，防止細(xì)菌生長； b.流動相要求使用0.45μm濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì)； c.使用HPLC級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能。
簡單的說色譜柱是一種硬件，而柱色譜則是一種技術(shù)，柱色譜法，又稱層析法，是一種以分配平衡為機(jī)理的分配方法。
柱色譜概念：
柱色譜是在一根玻璃管或金屬管中進(jìn)行的色譜技術(shù)，將吸附劑填充到管中而使之成為柱狀，這樣的管狀柱稱為吸附色譜柱。使用吸附色譜柱分離混合物的方法，稱為吸附柱色譜。這種方法可以用來分離大多數(shù)有機(jī)化合物，尤其適合于復(fù)雜的天然產(chǎn)物的分離。分離容量從幾毫克到百毫克級，所以，適用于分離和精制較大量的樣品。
在吸附柱色譜中，吸附劑是固定相，洗脫劑是流動相，相當(dāng)于薄層色譜中的展開劑。吸附劑的基本原理與吸附薄層色譜相同，也是基于各組分與吸附劑間存在的吸附強(qiáng)弱差異，通過使之在柱色譜上反復(fù)進(jìn)行吸附、解吸、再吸附、再解吸的過程而完成的。所不同的是，在進(jìn)行柱色譜的過程中，混合樣品一般是加在色譜柱的頂端，流動相從色譜柱頂端流經(jīng)色譜柱，并不斷地從柱中流出。由于混合樣中的各組分與吸附劑的吸附作用強(qiáng)弱不同，因此各組分隨流動相在柱中的移動速度也不同，最終導(dǎo)致各組分按順序從色譜柱中流出。如果分步接收流出的洗脫液，便可達(dá)到混合物分離的目的。一般與吸附劑作用較弱的成分先流出，與吸附作用較強(qiáng)的成分后流出。
色譜柱概念：
裝填有固定相用以分離混合組分的柱管，多為金屬、PEEK或玻璃制作。有直管形、盤管形、U形管等形狀，色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類，液相色譜通常均采用填充柱，色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相，以及色譜柱的制備和操作條件。
色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁、有機(jī)聚合物微球（包括離子交換樹脂）、多孔碳等，其粒度一般為3,5,7,10μm等，柱效理論值可達(dá)5-16萬/米。對于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效；對于同系物分析，只要500即可；對于較難分離物質(zhì)對則可采用高達(dá)2萬的柱子，因此一般10-30cm左右的柱長就能滿足復(fù)雜混合物分析的需要。
柱效受柱內(nèi)外因素影響，為使色譜柱達(dá)到較佳效率，除柱外死體積要小外，還要有合理的柱結(jié)構(gòu)（盡可能減少填充床以外的死體積）及裝填技術(shù)。即使可以的裝填技術(shù)，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的，靠近管壁的部位比較疏松，易產(chǎn)生溝流，流速較快，影響沖洗劑的流形，使譜帶加寬，這就是管壁效應(yīng)。這種管壁區(qū)大約是從管壁向內(nèi)算起30倍粒徑的厚度。在一般的液相色譜系統(tǒng)中，柱外效應(yīng)對柱效的影響遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于管壁效應(yīng)。
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