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正確的使用聚合物基質(zhì)色譜柱是極其重要的 色譜柱工作原理

時間:2020-05-25    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
  聚合物基質(zhì)色譜柱具有相當(dāng)強(qiáng)的硬度,有無孔和有孔兩種規(guī)格。該固定相中含有苯基官能團(tuán),可與待測物發(fā)生疏水相互作用。聚合物基質(zhì)色譜柱廣泛用于各種不同基質(zhì)中糖分子、糖醇和其他水溶性物質(zhì)的分離。Carbo-H可以用來分析有機(jī)酸及利巴韋林等物質(zhì),Carbo-Ca可以用來分離樹膠醛糖、阿糖醇等糖類。聚合物基質(zhì)色譜柱采用聚合物基質(zhì)填料,色譜柱化學(xué)穩(wěn)定性好,壽命長,分離效果隨時間變化小。能用堿性溶液進(jìn)行清洗再生。適用于蒸發(fā)光散射檢測器、電霧化檢測器以及LC/MS。
  正確的使用聚合物基質(zhì)色譜柱是極其重要的,并且對液相分析非常有幫助的。接下來的文章是一些使用、清洗和保存液相聚合物基質(zhì)色譜柱的指導(dǎo)。這些指導(dǎo)根據(jù)兩方面來分的,一方面是根據(jù)聚合物基質(zhì)色譜柱的基質(zhì)(硅膠,聚合物或者其他),另一方面是表面鍵和的化學(xué)固定相。
  聚合物基質(zhì)色譜柱采用純聚合物基材,因此具有的耐緘性(PH范圍2-13),適用于帶有芳香環(huán)以及不飽和化合物的分離/純化。 此類柱提供了廣范的溶劑的選擇,pH范圍可叢1-13。聚合物C18從親水的甲基丙烯酸酯鍵合C18官能團(tuán),利用親水的聚甲基丙烯酸酯載體鍵合ODS性能相似于硅膠鍵合ODS甲基丙烯酸酯在聚合前就用C18官能團(tuán)化,因此有較大的重現(xiàn)性沒有硅醇基和金屬雜質(zhì),有用的顆粒度為6,10,50μ在pH 1-13間穩(wěn)定。和所有的標(biāo)準(zhǔn)的反相溶劑都相容。
  聚合物基質(zhì)色譜柱在pH2~12范圍內(nèi)呈現(xiàn)出較高的化學(xué)穩(wěn)定性,使其可以在堿性條件下被使用。較寬的pH范圍還可以使用多堿性化合物在非帶電形式下得到分析,減少了二次相互作用發(fā)生進(jìn)而改善分析峰形。由于二次相互作用的降低,聚合物基質(zhì)色譜柱大大改善了對肽和蛋白質(zhì)的回收。

液相色譜柱的使用和注意事項

  色譜柱在使用前,可以進(jìn)行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是較佳條件),只有這樣,測得的結(jié)果才有可比性。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同?! ?、樣品的前處理;  a、可以使用流動相溶解樣品;  b、使用預(yù)處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì);  c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)?! ?、流動相的配制  液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點:  a、流動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長期留在柱中);  b、流動相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng);  c、流動相的黏度要盡量小,以便得到好的分離效果;降低柱壓降,延長泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度);  d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器,可以使用對紫外吸收較低的溶劑配制;  e、流動相沸點不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致實驗無法進(jìn)行;  f、在流動相配制好后,一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。  3、流動相流速的選擇  因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱,要追求較佳柱效,可以使用較佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳?! ‘?dāng)選用較佳流速時,分析時間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時,可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)?! ∽⒁猓骸 .含水流動相可以在實驗前配制,尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。可以加入疊氮化鈉,防止細(xì)菌生長;  b.流動相要求使用0.45μm濾膜過濾,除去微粒雜質(zhì);  c.使用HPLC級溶劑配制流動相,使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命,提高柱性能。

標(biāo)簽: 液相色譜柱
液相色譜柱 液相色譜柱的使用和注意事項_液相色譜柱

柱色譜和色譜柱一樣嗎?

  簡單的說色譜柱是一種硬件,而柱色譜則是一種技術(shù),柱色譜法,又稱層析法,是一種以分配平衡為機(jī)理的分配方法。

  柱色譜概念:

  柱色譜是在一根玻璃管或金屬管中進(jìn)行的色譜技術(shù),將吸附劑填充到管中而使之成為柱狀,這樣的管狀柱稱為吸附色譜柱。使用吸附色譜柱分離混合物的方法,稱為吸附柱色譜。這種方法可以用來分離大多數(shù)有機(jī)化合物,尤其適合于復(fù)雜的天然產(chǎn)物的分離。分離容量從幾毫克到百毫克級,所以,適用于分離和精制較大量的樣品。

  在吸附柱色譜中,吸附劑是固定相,洗脫劑是流動相,相當(dāng)于薄層色譜中的展開劑。吸附劑的基本原理與吸附薄層色譜相同,也是基于各組分與吸附劑間存在的吸附強(qiáng)弱差異,通過使之在柱色譜上反復(fù)進(jìn)行吸附、解吸、再吸附、再解吸的過程而完成的。所不同的是,在進(jìn)行柱色譜的過程中,混合樣品一般是加在色譜柱的頂端,流動相從色譜柱頂端流經(jīng)色譜柱,并不斷地從柱中流出。由于混合樣中的各組分與吸附劑的吸附作用強(qiáng)弱不同,因此各組分隨流動相在柱中的移動速度也不同,最終導(dǎo)致各組分按順序從色譜柱中流出。如果分步接收流出的洗脫液,便可達(dá)到混合物分離的目的。一般與吸附劑作用較弱的成分先流出,與吸附作用較強(qiáng)的成分后流出。

  色譜柱概念:

  裝填有固定相用以分離混合組分的柱管,多為金屬、PEEK或玻璃制作。有直管形、盤管形、U形管等形狀,色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類,液相色譜通常均采用填充柱,色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相,以及色譜柱的制備和操作條件。

  色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁、有機(jī)聚合物微球(包括離子交換樹脂)、多孔碳等,其粒度一般為3,5,7,10μm等,柱效理論值可達(dá)5-16萬/米。對于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效;對于同系物分析,只要500即可;對于較難分離物質(zhì)對則可采用高達(dá)2萬的柱子,因此一般10-30cm左右的柱長就能滿足復(fù)雜混合物分析的需要。

  柱效受柱內(nèi)外因素影響,為使色譜柱達(dá)到較佳效率,除柱外死體積要小外,還要有合理的柱結(jié)構(gòu)(盡可能減少填充床以外的死體積)及裝填技術(shù)。即使可以的裝填技術(shù),在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的,靠近管壁的部位比較疏松,易產(chǎn)生溝流,流速較快,影響沖洗劑的流形,使譜帶加寬,這就是管壁效應(yīng)。這種管壁區(qū)大約是從管壁向內(nèi)算起30倍粒徑的厚度。在一般的液相色譜系統(tǒng)中,柱外效應(yīng)對柱效的影響遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于管壁效應(yīng)。

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色譜柱 柱色譜和色譜柱一樣嗎?_色譜柱

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