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通用型反相液相色譜柱特性和使用過程注意點 液相色譜工作原理

時間:2020-05-25    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
通用型反相液相色譜柱是一種常用的色譜柱產(chǎn)品,主要由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成,被廣泛用于多個領(lǐng)域中。在通用型反相液相色譜柱的使用中,保持色譜柱的柱效、容量和滲透特性,延長柱子的使用壽命非常重要。使用時間后就會出現(xiàn)柱壓升高、柱效降低、峰形畸變和分離度降低、保留時間改變等變化,如不采取措施,將會縮短色譜柱的使用壽命,影響工作效率,并造成一定的經(jīng)濟損失。

通用型反相液相色譜柱特性:
* 填料表面具有極性基團,適合于高水相流動相條件下的分離;
* 增強了對親水性、極性化合物的保留能力;
* 獨特的選擇性和優(yōu)異的分離度;
* 降低了堿性化合物與殘余硅羥基的相互作用,提高了色譜峰的對稱性;
* pH 范圍1.5 - 10.0,適合于分析酸、堿化合物。
 
通用型反相液相色譜柱在使用緩沖液的過程中還要注意以下幾點:
  a.避免使用鹽酸鹽,鹽酸鹽對鋼質(zhì)有腐蝕作用;
  b.緩沖液要現(xiàn)配現(xiàn)用,往往緩沖液是良好的菌類培養(yǎng)液,隔天或放置長時間實驗時會發(fā)生很多怪現(xiàn)象;
  c.使用緩沖液要及時掌握pH范圍,做到胸中有數(shù);
  d.清洗液路和柱子時,有溫控可加熱到30攝氏度易于沖洗;
  e.長時間用緩沖溶液要注意觀察接頭處有無析出,若有白色鹽類析出,定期用10%硝酸沖洗液路(拆下柱子,沖洗30mL10%硝酸溶液,再用5倍水沖洗)可以避免液路的堵塞;
  f.選擇緩沖液要用可靠的試劑,避免不純的鹽類造成不必要的麻煩;
  過渡流動相是指有機相和水相的組成與分析流動相相同,但是不含緩沖鹽的溶液。

液相色譜儀的原理及應(yīng)用

  液相色譜儀是指利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異,對混合物進行先分離,而后分析鑒定的儀器。液相色譜儀根據(jù)固定相是液體或是固體,又分為液-液色譜(LLC)及液-固色譜(LSC)?,F(xiàn)代液相色譜儀由高壓輸液泵、進樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測器、信號記錄系統(tǒng)等部分組成。與經(jīng)典液相柱色譜裝置比較,具有高效、快速、靈敏等特點。

  工作原理:

  系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對運動時,經(jīng)過反復多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來高效液相色譜儀主要有進樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),下面將分別敘述其各自的組成與特點。

  產(chǎn)品應(yīng)用:

  高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液,不受樣品揮發(fā)性的限制,流動相可選擇的范圍寬,固定相的種類繁多,因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。與試樣預處理技術(shù)相配合,HPLC所達到的高分辨率和高靈敏度,使分離和同時測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能,能夠分離復雜相體中的微量成分。隨著固定相的發(fā)展,有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離HPLC成為解決生化分析問題比較有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用,流出組分易收集等優(yōu)點,因而被廣泛應(yīng)用到生物化學、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機分析等各種領(lǐng)域。高效液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。液相色譜-質(zhì)譜連用技術(shù)受到普遍重視,如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳烴等;液相色譜-紅外光譜連用也發(fā)展很快如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類,海水中的不揮發(fā)烴類,使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展。

標簽: 液相色譜儀
液相色譜儀 液相色譜儀的原理及應(yīng)用_液相色譜儀

液相色譜儀相關(guān)知識

  液相色譜法是分析化學中發(fā)展較快、應(yīng)用廣泛的一種分析方法,特別是高效液相色譜儀已經(jīng)成為生命科學、材料科學、環(huán)境科學等方面必不可少的重要檢測方法。現(xiàn)代科學技術(shù)的發(fā)展使得分析對象越來越復雜,分析要求越來越高,液相色譜的強大功能使其成為新世紀中解決生命科學、材料科學、環(huán)境科學等復雜體系發(fā)現(xiàn)難題的比較有力的技術(shù)和方法。

  高效液相色譜儀是在經(jīng)典液相色譜的基礎(chǔ)上,引入氣相色譜的理論和技術(shù)而發(fā)展起來的。在高效液相色譜中,流動相與組分之間有一定的親和力,分離過程的實現(xiàn)是組分、流動相和固定相三者間相互作用的結(jié)果,分離不但取決于組分和固定相的性質(zhì),還與流動相的性質(zhì)密切相關(guān),一般情況下,高效液相色譜儀的分析可在室溫下進行,由于采用顆粒極細的固定相,柱內(nèi)壓降很大,加上流動相黏度高,因此必須采用高入口壓,以此來維持一定的流動相線速。高效液相色譜儀對于揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大的物質(zhì)特別有利,它在醫(yī)藥、生化等方面具有非常重要的作用。

  色譜柱的常見問題:

  1.色譜柱污染:

  目前,基層實驗室多采用反相色譜柱,要減少色譜柱的污染比較有效的辦法是要純化樣品。凡是樣品純化得越干凈,色譜柱的壽命就越長;反之,只有提取沒有純化的樣品,色譜柱柱效就會大幅下降。一般來說,要提取純化好的樣品,可以的方法是用流動相溶解樣品,這樣,一方面能減少色譜圖中的溶劑峰干擾,另一方面也能檢查樣品在流動相中的溶解性。如果樣品進樣后在流動相中沉淀,會堵塞進樣器和柱頭,甚至樣品分解,出現(xiàn)鬼峰。如果出現(xiàn)樣品與流動相不溶要設(shè)法改變?nèi)芙鈼l件,可更換樣品溶劑,或改進樣品純化處理的方法,或濾過去除不溶性物質(zhì)。

  2.色譜柱阻塞與對策

  如果配有保護柱,應(yīng)先去掉保護柱進行分析。如果色譜柱阻塞,可進行反沖洗。如果問題仍然存在,色譜柱可能被強保留的污染物損壞,建議使用恰當?shù)脑偕绦?。如果問題仍然存在,可能是進口阻塞,更換入口處的篩板或更換色譜柱。如果必要,亦可更換色譜柱。

  3.嚴格清場

  清洗的過程是延長色譜柱壽命的關(guān)鍵,每次分析工作結(jié)束時,要做好清場工作。如果流動相是緩沖鹽,先用5%甲醇水沖洗30 min以上;如果流動相是離子對,先用50%甲醇水沖洗30 min以上;如果流動相是酸性溶劑,先用純水沖洗30 min以上,流速0.5 mL#min-1,最后過度到用色譜甲醇沖洗色譜柱,目的是沖去吸附在柱上的強保留組分。如果用甲醇-水為流動相也應(yīng)這樣沖洗色譜柱,在一定程度上可恢復柱效。

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液相色譜儀 液相色譜儀相關(guān)知識_液相色譜儀

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