液相色譜儀是指利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異，對混合物進行先分離，而后分析鑒定的儀器。液相色譜儀根據(jù)固定相是液體或是固體，又分為液-液色譜(LLC）及液-固色譜(LSC）。現(xiàn)代液相色譜儀由高壓輸液泵、進樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測器、信號記錄系統(tǒng)等部分組成。與經(jīng)典液相柱色譜裝置比較，具有高效、快速、靈敏等特點。
工作原理：
系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對運動時，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來高效液相色譜儀主要有進樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，下面將分別敘述其各自的組成與特點。
產(chǎn)品應(yīng)用:
高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合，HPLC所達到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能，能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。隨著固定相的發(fā)展，有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離HPLC成為解決生化分析問題比較有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用，流出組分易收集等優(yōu)點，因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機分析等各種領(lǐng)域。高效液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。液相色譜-質(zhì)譜連用技術(shù)受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳烴等；液相色譜-紅外光譜連用也發(fā)展很快如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類，海水中的不揮發(fā)烴類，使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展。
液相色譜法是分析化學(xué)中發(fā)展較快、應(yīng)用廣泛的一種分析方法，特別是高效液相色譜儀已經(jīng)成為生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境科學(xué)等方面必不可少的重要檢測方法?，F(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展使得分析對象越來越復(fù)雜，分析要求越來越高，液相色譜的強大功能使其成為新世紀中解決生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境科學(xué)等復(fù)雜體系發(fā)現(xiàn)難題的比較有力的技術(shù)和方法。
高效液相色譜儀是在經(jīng)典液相色譜的基礎(chǔ)上，引入氣相色譜的理論和技術(shù)而發(fā)展起來的。在高效液相色譜中，流動相與組分之間有一定的親和力，分離過程的實現(xiàn)是組分、流動相和固定相三者間相互作用的結(jié)果，分離不但取決于組分和固定相的性質(zhì)，還與流動相的性質(zhì)密切相關(guān)，一般情況下，高效液相色譜儀的分析可在室溫下進行，由于采用顆粒極細的固定相，柱內(nèi)壓降很大，加上流動相黏度高，因此必須采用高入口壓，以此來維持一定的流動相線速。高效液相色譜儀對于揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大的物質(zhì)特別有利，它在醫(yī)藥、生化等方面具有非常重要的作用。
色譜柱的常見問題：
1.色譜柱污染：
目前,基層實驗室多采用反相色譜柱,要減少色譜柱的污染比較有效的辦法是要純化樣品。凡是樣品純化得越干凈,色譜柱的壽命就越長;反之,只有提取沒有純化的樣品,色譜柱柱效就會大幅下降。一般來說,要提取純化好的樣品,可以的方法是用流動相溶解樣品,這樣,一方面能減少色譜圖中的溶劑峰干擾,另一方面也能檢查樣品在流動相中的溶解性。如果樣品進樣后在流動相中沉淀,會堵塞進樣器和柱頭,甚至樣品分解,出現(xiàn)鬼峰。如果出現(xiàn)樣品與流動相不溶要設(shè)法改變?nèi)芙鈼l件,可更換樣品溶劑,或改進樣品純化處理的方法,或濾過去除不溶性物質(zhì)。
2.色譜柱阻塞與對策
如果配有保護柱,應(yīng)先去掉保護柱進行分析。如果色譜柱阻塞,可進行反沖洗。如果問題仍然存在,色譜柱可能被強保留的污染物損壞,建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦颉Ｈ绻麊栴}仍然存在,可能是進口阻塞,更換入口處的篩板或更換色譜柱。如果必要,亦可更換色譜柱。
3.嚴格清場
清洗的過程是延長色譜柱壽命的關(guān)鍵,每次分析工作結(jié)束時,要做好清場工作。如果流動相是緩沖鹽,先用5%甲醇水沖洗30 min以上；如果流動相是離子對,先用50%甲醇水沖洗30 min以上；如果流動相是酸性溶劑,先用純水沖洗30 min以上,流速0.5 mL#min-1,最后過度到用色譜甲醇沖洗色譜柱,目的是沖去吸附在柱上的強保留組分。如果用甲醇-水為流動相也應(yīng)這樣沖洗色譜柱,在一定程度上可恢復(fù)柱效。
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