高效液相色譜儀的衍生化技術(shù)衍是指將用通常檢測方法不能直接檢測或檢測靈敏度比較低的物質(zhì)與某種試劑（即衍生化試劑）反應(yīng)，使之生成易于檢測的化合物的過程。按衍生化方法可分為柱前衍生化和柱后衍生化。
一、柱前衍生化：
柱前衍生化是指將被測物轉(zhuǎn)變成可檢測的衍生物后，再通過色譜柱分離。這種衍生化可以是在線衍生化，即將被測物和衍生化試劑分別通過兩個輸液泵送到混合器里混合并使之立即反應(yīng)完成，隨之進入色譜柱；也可以先將被測物和衍生化試劑反應(yīng)，再將衍生物作為樣品進樣；也可以在流動相中加入衍生化試劑，進樣后，讓被測物與流動相直接發(fā)生衍生化反應(yīng)。
二、柱后衍生化：
柱后衍生化是指先將被測物分離，再將從色譜柱流出的溶液與衍生化試劑在線混合，生成可檢測的衍生物，然后導(dǎo)入檢測器。按生成衍生物的類型可分為紫外可見光衍生化、熒光衍生化、拉曼衍生化和電化學(xué)衍生化等。
1、紫外可光見衍生化：
?。?）紫外衍生化是指將紫外吸收弱或無紫外吸收的有機化合物與帶有紫外吸收基團的衍生化試劑反應(yīng)，使之生成可以用紫外檢測的化合物。如胺類化合物容易與鹵代烴、羰基、酰基類衍生試劑反應(yīng)。
（2）可見光衍生化有兩個主要的應(yīng)用：一是用于過渡金屬離子的檢測，將過渡金屬離子與顯色劑反應(yīng)，生成有色的配合物、螯合物或離子締合物后用可見光檢測；二是用于有機離子的檢測，在流動相中加入被測離子的反離子，使之形成有色的離子對化合物后，分離檢測。
2、熒光衍生化：
熒光衍生化是指將被測物與熒光衍生化試劑反應(yīng)后生成具有熒光的物質(zhì)進行檢測。有的熒光衍生化試劑本身沒有熒光，而其衍生物卻有很強的熒光。衍生化技術(shù)不僅使高效液相色譜儀分析體系復(fù)雜化，而且需要消耗時間，增加分析成本，有的衍生化反應(yīng)還需要控制嚴(yán)格的反應(yīng)條件。因此，只有在找不到方便而靈敏的檢測方法或為了提高分離檢測的選擇性時，才考慮用衍生化技術(shù)。
液相色譜儀利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異，對混合物進行先分離，而后分析鑒定的儀器。一般問題主要有以下幾種；
氣泡溢出
流動相內(nèi)有氣泡，關(guān)閉泵，打開泄壓閥，打開purg鍵，清洗脫氣，氣泡不斷從過濾器冒出，進入流動相，無論打開purge鍵幾次，都無法清除不斷產(chǎn)生的氣泡。原因過濾器長期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi),過濾器內(nèi)部由于霉菌的生長繁殖，形成菌團，阻塞了過濾器，緩沖液難以流暢地通過過濾器，空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過濾器進入流動相。處理過濾器浸泡于5%硝酸溶液中，超聲清洗幾分鐘即可；亦可將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小時，輕輕震蕩幾次，再將過濾器用純水清洗幾次，打開泄壓閥，打開purge鍵清洗脫氣，如仍有氣泡不斷從過濾器冒出，繼續(xù)將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中，如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出，說明過濾器內(nèi)部的霉菌菌團已被硝酸破壞，流動相可以流暢地通過過濾器。打開泄壓閥，打開泵，流速調(diào)至1.0～3.0ml/min，純水沖洗過濾器1小時左右。即可將過濾器清洗干凈。關(guān)閉泄壓閥，純甲醇沖洗半小時即可。
柱壓高
?、啪彌_液鹽分如（乙酸銨等）沉積于柱內(nèi)；
?、茦悠肺廴境练e。
處理對于第一種情況先用40～50℃的純水，低速正向沖洗柱子，待柱壓逐漸下降后，相應(yīng)提高流速沖洗，柱壓大幅度下降后，用常溫純水沖洗，之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘；對于第二種情況，由樣品的沉積引起污染的C18柱，和純水反向沖洗柱子，換成甲醇沖洗，接著用甲醇+異丙醇（4+6）沖洗柱子，再用換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。
無指示
?、疟?font color="#0268CA">密封墊圈磨損；
⑵大量氣泡進入泵體。
處理對于第一種情況，更換密封墊圈；對于第二種情況，在泵作用的同時，用一個50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。
不穩(wěn)定
原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物，使得兩者不能密封。處理工作中注意觀察流動相的量，保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底，避免吸入空氣，流動相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物，拆下單向閥，放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。
峰分叉
?、?font color="#0268CA">色譜柱被污染；
?、浦^填料塌陷。
處理對于第一種情況，先用純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇+異丙醇（4+6）沖洗柱子（沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定），再換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳，則考慮第二種情況。對于第二種情況，擰開柱頭，檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分（污染的填料），裝入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊，再填平，滴甲醇，再壓緊反復(fù)幾次，直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈，擦凈柱外壁的填料，擰緊柱頭，用純甲醇沖洗30分鐘以上。
重復(fù)性差
?、胚M樣閥漏液；
?、萍訕俞槻坏轿?；
⑶液量不足。
處理對于第一種情況更換進樣閥墊圈；對于第二種情況保證加樣針插到底，注射樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從LOAD狀態(tài)轉(zhuǎn)換到INJECT狀態(tài)，以保證進樣量的準(zhǔn)確。日常工作中，液相色譜儀的保養(yǎng)非常重要，注意不要讓空氣進入輸液系統(tǒng)和高壓泵中，儲液器內(nèi)的溶液如長時間未用應(yīng)清洗儲液器并更換溶液，每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈，防止無機鹽析出或沉積；樣品的前處理也很重要，任何樣品都要盡可能地去除雜質(zhì)，完全溶解，盡量減少對色譜柱的污染，以延長色譜柱的使用壽命，同時避免注射過濃的樣品溶液，以免殘留液在進樣閥內(nèi)析出固體引起堵塞；色譜柱作好標(biāo)記，用于不同分析目的的色譜柱不要混用等。
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