在食品分析中，無論是殘留分析還是成分分析，HPLC 也已成為不可或缺的。流動相脫氣是HPLC 系統(tǒng)能得到可靠數(shù)據(jù)的一個很有效的措施。下面分析一下，高效液相色譜脫氣的必要性，并總結(jié)歸納了脫氣常用的方法。
一、脫氣的必要性
流動相脫氣是HPLC 系統(tǒng)能得到可靠數(shù)據(jù)的一個很有效的措施。HPLC 泵在輸送液體時要產(chǎn)生很大的力量，由于氣體的壓縮比與液體相比大的多，因而當(dāng)氣泡存在時，我們發(fā)現(xiàn)瞬間的流速降低和系統(tǒng)壓力下降。如果這個氣泡足夠大，液相泵將不能輸送任何溶劑，而且如果壓力低于預(yù)先設(shè)定的壓力低限，泵將停止工作。當(dāng)一個氣泡通過輸液泵時，由于系統(tǒng)壓力大，氣泡通常會溶解在流動相溶液中，隨流動相通過柱子。但是到達(dá)檢測器流通池時系統(tǒng)壓力又恢復(fù)到了大氣壓，因而氣泡可能在檢測器流通池中又顯現(xiàn)，在色譜圖上會出現(xiàn)不規(guī)律的毛刺。
二、脫氣方法
1、吹氦脫氣法。
利用氦氣在液體中溶解度比空氣低的特性，在0.1MPa 壓力下，以約60 mL/min 流速通入流動相儲液容器中10～15min，可以很有效地從流動相中排除溶解的空氣，能排除接近80%的氧氣。采用一個高效分布式噴射流裝置，一體積的氦氣可從流動相中將等體積的幾乎全部氣體排除。這意味著1L 氦氣通過1L 流動相就可完成排氣這個工作。這種脫氣方法雖然好，但氦氣價格較高，很少使用。
2、加熱回流法。
此法的脫氣效果較好。在操作時要注意冷凝塔的冷卻效率，否則溶劑會丟失，混合流動相的比例會有變化。
3、抽真空脫氣法。
此法可使用真空泵，降壓至0.05～0.07MPa ，即可除去溶解的氣體。但是由于真空脫氣會使混合溶劑組成發(fā)生變化，從而影響到實驗的重現(xiàn)性，因此多用于單溶劑體系的簡單分析。
4、超聲波脫氣法。
將欲脫氣的流動相置于超聲波清洗機(jī)中，用超聲波震蕩10～20min。此法的脫氣效果最差。
液相色譜儀分析中柱平衡慢的常見原因是組分在舊的或新的流動相中對柱吸附強(qiáng)度差異較大。要進(jìn)行一種特殊的分析，或者從一種方法改為另一種方法，需要很長時間平衡?？煽紤]采用專用柱用于特殊的方法，不用時將柱拆下來，注滿適當(dāng)?shù)娜軇┗蛄鲃酉?，密封保管，不再做其它的分析。 ?、胺改良劑 胺改良劑如三乙胺，通常加在反相或離子對流動相中，以減少樣品中破性組分的拖尾。常用1mmol/L~10mmol/L的濃度，平衡時間較長。如果一開始就用高濃度的胺，可使柱很快達(dá)到平衡?！ ?、離子對試劑 季胺類離子對試劑，如四丁基銨離子（TBA）沖掉比較慢。用50~100倍柱體積的流動相通過柱后，酸性組分的保留仍然變化?？梢缘霓k法用中間洗液：含100mmol/L~200mmol/L緩沖液或鹽的甲醇-水。顯然，要最后去掉痕量的TBA，需用強(qiáng)流動相，加緩沖液是為了競爭在酸性硅酸基質(zhì)上的TBA，產(chǎn)生離子交換作用?！ 姆聪嘀舷慈ラL鏈陰離子對試劑，非常慢，想要完全除去是不可能的，甚至用100%的甲醇也不行。分析陽離子溶質(zhì)其保留一直不斷漂移，一定要用長鏈離子對時，可以選用專用柱。 3、硅膠柱 用硅膠柱作正相分離，常發(fā)生保留突然改變，或增加或減少。其原因是流動相改變時相應(yīng)的改變了水的含量，使硅膠柱的含水量變化。用水脫活，硅膠柱保留時間會減少很多?！ ?、四氫呋喃作流動相 在反相流動相中，加四氫呋喃（THF）不會影響到柱平衡。THF的性質(zhì)類似于甲醇或乙腈，但對某些種類的樣品也有偶然例外，如分離水溶性的維生素，從含THF變成無THF的流動相，約需半天時間才能使柱平衡，這也證實該效應(yīng)對其它類別的樣品的影響。
449717568
