如何正確使用熒光分光光度計(jì)來進(jìn)行測(cè)試呢？以下為您詳述：
熒光分光光度計(jì)測(cè)試步驟
(一)樣品準(zhǔn)備
1.液體樣品根據(jù)用戶提供的技術(shù)指標(biāo)，檢查濃度范圍是否合適，如果需要稀釋，則要考慮所需溶劑類型和稀釋倍數(shù)。
2.固體樣品均勻粉末、片狀或具有光滑平面的塊狀樣品，均可直接測(cè)定。
(二)操作步驟
1.開機(jī)：接通電源，打開主機(jī)開關(guān)，點(diǎn)燃(打開)光源后，根據(jù)說明書要求啟動(dòng)計(jì)算機(jī)。
2.檢測(cè)前準(zhǔn)備：參照儀器說明書，在20天內(nèi)至少進(jìn)行一次激發(fā)校準(zhǔn)和發(fā)射校準(zhǔn)，檢測(cè)前儀器應(yīng)預(yù)熱。
3.工作條件的選擇：環(huán)境溫度應(yīng)在20℃±5℃;相對(duì)濕度不大于70%;電源穩(wěn)定，無磁場(chǎng)、電場(chǎng)干擾。根據(jù)樣品的特性及熒光強(qiáng)度，選擇合適的儀器工作條件(如狹縫、PM增益、響應(yīng)時(shí)間等)。
4.基本測(cè)定
(1)熒光激發(fā)光譜測(cè)定
設(shè)置儀器參數(shù)，掃描發(fā)射波長(zhǎng)，找到maxλem，以此為發(fā)射波長(zhǎng)，記錄發(fā)射強(qiáng)度作為激發(fā)波長(zhǎng)的函數(shù)，便得到激發(fā)光譜。
(2)熒光發(fā)射光譜測(cè)定
設(shè)置儀器參數(shù)，掃描激發(fā)波長(zhǎng)，找到maxλex，以此為激發(fā)波長(zhǎng)，記錄發(fā)射強(qiáng)度與發(fā)射波長(zhǎng)間的函數(shù)關(guān)系，便得到熒光發(fā)射光譜。
(3)差譜測(cè)定
設(shè)置儀器參數(shù)，選擇合適的工作方式，測(cè)定背景溶液的發(fā)射光譜并儲(chǔ)存起來，在一定的工作方式下，掃描樣品溶液的發(fā)射波長(zhǎng)，得到當(dāng)時(shí)的光度值和儲(chǔ)存的背景值之間的差示值，即差譜。
(4)峰面積積分
選擇適當(dāng)?shù)墓ぷ鞣绞?，?duì)樣品溶液進(jìn)行積分操作，即得到峰面積積分。
(5)熒光強(qiáng)度
選擇合適的測(cè)量參數(shù)，設(shè)置λex、λem，采用定點(diǎn)讀數(shù)或掃描方式，即可測(cè)得所選波長(zhǎng)處的熒光強(qiáng)度。
(6)定量測(cè)定
配制一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在一定的測(cè)定條件下，設(shè)置λex、λem，按照由稀至濃的次序，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度，繪制熒光強(qiáng)度—濃度的工作曲線，不改變儀器參數(shù)測(cè)定未知溶液的熒光強(qiáng)度，由工作曲線即可求出未知溶液的濃度。
(三)分析結(jié)果的表述
1.熒光激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及其他光譜由儀器控制電腦直接繪出。
2.峰面積積分、熒光強(qiáng)度由儀器控制電腦計(jì)算顯示。
3.定量測(cè)試：在相同的測(cè)定條件下，測(cè)定一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度，繪制出熒光強(qiáng)度-濃度的工作曲線。濃度未知的溶液的熒光強(qiáng)度測(cè)定后，由工作曲線求出該溶液的濃度。
熒光分光光度計(jì)使用注意事項(xiàng)
1.在實(shí)驗(yàn)開始前，應(yīng)提前打開儀器預(yù)熱，并配制好所需的溶液，對(duì)于已經(jīng)配制好的溶液，在不用時(shí)放在4℃冰箱中保存，放置時(shí)間超過一星期的溶液要重新配制。
2.實(shí)驗(yàn)所用的樣品池是四面透光的石英池，拿取的時(shí)候用手指掐住池體的上角部，不能接觸到四個(gè)面，清洗樣品池后應(yīng)用擦鏡紙對(duì)其四個(gè)面進(jìn)行輕輕擦拭。
3.在測(cè)試樣品時(shí)，注意熒光強(qiáng)度范圍的設(shè)定不要太高，以免測(cè)得的熒光強(qiáng)度超過儀器的測(cè)定上限。
4.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，要及時(shí)的清理臺(tái)面，處理廢液，清洗和放置好樣品池，將下次要用的溶液放回冰箱，并且按規(guī)定登記實(shí)驗(yàn)記錄，養(yǎng)成良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣。
分光光度計(jì)是一種利用分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器，能夠?qū)⒊煞謴?fù)雜的光線分解成光譜線，在各種科學(xué)實(shí)驗(yàn)以及實(shí)地測(cè)量中發(fā)揮著重要的作用。
分光光度計(jì)的保養(yǎng)方法
1.若大幅度改變測(cè)試波長(zhǎng)，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正“0”和“100%”點(diǎn)。然后再測(cè)量。
2.指針式儀器在未接通電源時(shí)，電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況，需進(jìn)行機(jī)械調(diào)零。
3.比色皿使用完畢后，請(qǐng)立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。
4.操作人員不應(yīng)輕易動(dòng)燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。
5.1900型等分光光度計(jì)，由于其光電接收裝置為光電倍增管，它本身的特點(diǎn)是放大倍數(shù)大，因而可以用于檢測(cè)微弱光電信號(hào)，而不能用來檢測(cè)強(qiáng)光。
否則容易產(chǎn)生信號(hào)漂移，靈敏度下降。針對(duì)其上述特點(diǎn)，在維修、使用此類儀器時(shí)應(yīng)注意不讓光電倍增管長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下；
因此在預(yù)熱時(shí)，應(yīng)打開比色皿蓋或使用擋光桿，避免長(zhǎng)時(shí)間照射使其性能漂移而導(dǎo)致工作不穩(wěn)。
6.放大器靈敏度換擋后，必須重新調(diào)零。
7.比色杯的配套性問題。比色杯必須配套使用，否則將使測(cè)試結(jié)果失去意義。在進(jìn)行每次測(cè)試前均應(yīng)進(jìn)行比較。
具體方法如下;分別向被測(cè)的兩只杯子里注入同樣的溶液，把儀器置于某一波長(zhǎng)處，石英比色杯;220nm、700nm裝蒸餾水，玻璃比色杯：
700nm處裝蒸餾水，將某一個(gè)池的透射比值調(diào)至100%，測(cè)量其他各池的透射比值，記錄其示值之差及通光方向；
如透射比之差在±0.5%的范圍內(nèi)則可以配套使用，若超出此范圍應(yīng)考慮其對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響。
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