色譜柱的安裝：
?。?）拆開柱包裝盒，確認(rèn)色譜柱的類型、 尺寸、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。
?。?）擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。
?。?）按柱管上標(biāo)示的流動(dòng)相流向，將色譜柱的入口端通過(guò)連接管與進(jìn)樣閥出口相連接(如條件允許，建議在柱前使用保護(hù)柱)；柱的出口與檢測(cè)器連接。連接管是外徑為1.57mm、內(nèi)徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán)。在接管時(shí)一定要設(shè)法降低柱外死體積。連接管通過(guò)空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底，然后順時(shí)針擰緊空心螺釘，直到擰不動(dòng)為止，再用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰1／4-1／2圈，切記不要用力過(guò)大。如色譜柱通過(guò)流動(dòng)相加壓后有漏液現(xiàn)象，請(qǐng)用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰1／4圈，直至不漏液為止。
色譜柱的儲(chǔ)存:
1．防止緩沖溶液和水溶液流動(dòng)相產(chǎn)生微生物，做到流動(dòng)相用多少配多少，或在水流動(dòng)相中加200ppm的疊氮鈉以抑制細(xì)菌成長(zhǎng)（一定當(dāng)心其毒性和潛在的爆炸性）；或在流動(dòng)相中加20%的有機(jī)改性劑，也可抑制微生物生長(zhǎng)，有機(jī)改性劑還有助于流動(dòng)相脫氣。
2．盡可能將色譜柱貯存于100%有機(jī)溶劑（乙晴比較好）中，避免在緩沖溶液中保存。
3．使用緩沖溶液后的色譜柱，應(yīng)用15～20倍柱體積的不含緩沖劑的同種水—有機(jī)溶劑流動(dòng)相沖洗色譜柱，后換成100%有機(jī)溶劑儲(chǔ)存。
4．避免用純凈水沖洗鍵合致密的C18柱。
5．將色譜柱的兩端用堵頭擰好，以免柱床填料干裂。
色譜柱是高效液相色譜的心臟，在高效液相色譜儀的使用中，保持色譜柱的柱效、容量和滲透性，延長(zhǎng)柱子的使用壽命非常重要。色譜柱壓升高一般是由于柱床內(nèi)產(chǎn)生了雜質(zhì)，造成流體阻力加大所致。淺析其原因，大致有以下幾方面：
流動(dòng)相的前處理
雜質(zhì)堵塞色譜柱進(jìn)口濾片，導(dǎo)致壓力升高。這往往是由于流動(dòng)相沒(méi)有過(guò)濾，或雖已過(guò)濾但過(guò)濾不徹底，使固體雜質(zhì)滯留于濾板上所造成的。
樣品的沉淀
當(dāng)溶解樣品的溶劑與流動(dòng)相不一致時(shí)，樣品進(jìn)入色譜柱，有時(shí)可能因溶解度降低而沉淀出來(lái)，造成壓力升高。
晶體的析出
使用含有緩沖液的流動(dòng)相時(shí)，緩沖液中的無(wú)機(jī)鹽可能會(huì)殘留在體系之中，它們會(huì)因在新流動(dòng)相中的溶解度降低而析出，造成流體阻力加大、壓力升高。
細(xì)菌或霉菌孳生
霉菌在流動(dòng)相中、管路中或柱子進(jìn)口處繁殖、生長(zhǎng)堵塞濾板，導(dǎo)致壓力升高。所以在使用磷酸鹽緩沖液時(shí)一般要現(xiàn)配現(xiàn)用。
溶質(zhì)吸附
當(dāng)溶質(zhì)在柱子上有較強(qiáng)的吸附，且所用的流動(dòng)相難以將它們洗脫時(shí)，累積的未洗脫溶質(zhì)也會(huì)造成阻力增大和壓力升高。
流動(dòng)相更換過(guò)度較快
當(dāng)改變流動(dòng)相體系時(shí)，不徹底的更換使不同性質(zhì)、互不混溶的流動(dòng)相存在于同一個(gè)體系之中，也會(huì)造成壓力升高。
壓力脈沖
運(yùn)行過(guò)程中，有時(shí)會(huì)產(chǎn)生系統(tǒng)內(nèi)壓力的突然升降。如此所形成的壓力脈沖會(huì)造成多孔填料的崩壞和柱床結(jié)構(gòu)的微小變化，填料微屑的長(zhǎng)期積累也可能會(huì)使柱床阻力增大，造成壓力升高。
色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對(duì)色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁、有機(jī)聚合物微球（包括離子交換樹脂）、多孔碳等，其粒度一般為3,5,7,10μm等，柱效理論值可達(dá)5~16萬(wàn)/米。對(duì)于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效；對(duì)于同系物分析，只要500即可；對(duì)于較難分離物質(zhì)對(duì)則可采用高達(dá)2萬(wàn)的柱子，因此一般10~30cm左右的柱長(zhǎng)就能滿足復(fù)雜混合物分析的需要。
在選擇色譜柱規(guī)格時(shí)應(yīng)考慮下列因素：
?、偕V柱內(nèi)徑：樣品的上樣要與色譜柱的交叉截面面積相對(duì)稱，要選擇色譜柱的內(nèi)徑要適合于樣品的上樣量。
?、谔盍系牧剑涸叫〉牧骄哂性礁叩闹?，但是價(jià)格更高，并且?guī)?lái)更高的柱壓，要求設(shè)備的硬件具備更高的壓力耐受性。在被測(cè)組分的色譜峰與其它色譜峰非?？拷鼤r(shí)，就需要更高的柱效，此時(shí)較小粒徑的色譜填料就顯得非常有用。相反，越大的粒徑則柱效越低，但價(jià)格也相對(duì)較低，同時(shí)對(duì)設(shè)備的要求也不高。
?、凵V柱長(zhǎng)度：越長(zhǎng)的色譜柱具有越高的柱效和更高的樣品承載量，但是柱壓將會(huì)更高，同時(shí)分離時(shí)間可能會(huì)更長(zhǎng)。
449717568
