通常可以通過擰緊或更換管路接頭來解決漏液的問題。但值得注意的是過份擰緊會(huì)導(dǎo)致金屬接頭的漏液和塑料接頭的磨損。如果通過稍微擰緊接頭不能解決漏液的問題,就必須將接頭取下,檢查是否損壞(例如,卡套損壞、密封表面有雜質(zhì));損壞的接頭應(yīng)該更換掉。
1. 接頭處漏液。
一般通過擰緊、清洗、更換等方法即可解決。
2. 泵漏液。
檢查單向閥、接頭是否松動(dòng),若松動(dòng)擰緊(不要太緊)即可;檢查混合器和泵的密封是否損壞;
3. 進(jìn)樣閥漏液。
檢查進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)子、密封口是否松動(dòng),若松動(dòng)則擰緊;檢查廢液管是否堵塞或產(chǎn)生虹吸現(xiàn)象,疏通或更換廢液管,保持廢液管高于廢液液面。
4. 色譜柱漏液。
尾端接頭松動(dòng),擰緊接頭;卡套內(nèi)有填料,拆下卡套,清洗卡套,重新安裝;篩板厚度不合適,更換合適的篩板。
5. 檢測(cè)器漏液。
檢查流通池墊片、窗口是否損壞,更換墊片或窗口;檢查流通池是否阻塞,更換或者重新安裝;檢查廢液管是否阻塞,更換廢液管。
液相色譜柱在使用前,可以進(jìn)行柱的性能測(cè)試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要留意: 液相色譜柱柱性能可能由于所使用的樣品、活動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測(cè)試所使用的條件是較佳條件),只有這樣,測(cè)得的結(jié)果才有可比性。
1、樣品的前處理:
a、可以使用活動(dòng)相溶解樣品。
b、使用予處理柱除往樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
c、使用0.45μm的過濾膜過濾除往微粒雜質(zhì)。
2、活動(dòng)相的配制:
液相色譜是樣品組分在柱填料與活動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,因此要求活動(dòng)相具備以下的特點(diǎn):
a、活動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長(zhǎng)時(shí)間保存在柱中)。
b、活動(dòng)相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。
c、活動(dòng)相的黏度要盡量小,以便在使用較長(zhǎng)的分析柱時(shí)能得到好的分離效果;同時(shí)降低柱壓降,延長(zhǎng)液體泵的使用壽命(可運(yùn)用進(jìn)步溫度的方法降低活動(dòng)相的黏度)。
d、活動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器,可以使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制。
e、活動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低,否則輕易產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。
f、在活動(dòng)相配制好后,一定要進(jìn)行脫氣。除往溶解在活動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè),還可以防止活動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
3、活動(dòng)相流速的選擇:
因柱效是柱中活動(dòng)相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對(duì)于一根特定的色譜柱,要追求較佳柱效,可以使用較佳流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。
首先從常規(guī)的幾個(gè)部件做個(gè)簡(jiǎn)單的分析。
(一)輸液泵應(yīng)具備如下性能:
?、賀SD(流量穩(wěn)定性)<0.3%;
②流量范圍寬,0.1~5.0ml/min內(nèi)連續(xù)可調(diào),有的實(shí)驗(yàn)則需要更大流量;
?、圯敵鰤阂话銘?yīng)能達(dá)到150~400kg/cm2,流量越大,最高壓力越低;
?、芤焊兹莘e小,有助于減少流動(dòng)相死體積,利于清洗。
⑤密封性能好,耐腐蝕。
(二)檢測(cè)器
?、僮贤鈾z測(cè)器,分為可變單波長(zhǎng)檢測(cè)器VWD和二極管陣列檢測(cè)器DAD,可以檢測(cè)有紫外吸收的物質(zhì)
②熒光檢測(cè)器,檢測(cè)有熒光的物質(zhì)
?、垡暡钫酃鈾z測(cè)器,通用型檢測(cè)器,但對(duì)環(huán)境要求極為苛刻,而且靈敏度低
?、蹺LSD,蒸發(fā)光散射檢測(cè)器
?、軲SD,質(zhì)譜檢測(cè)器
常用的是紫外檢測(cè),然后是MSD和ELSD
(三)色譜柱
要求柱效高、選擇性好,分析速度快等。目前市場(chǎng)上銷售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、有機(jī)聚合物微球(包括離子交換樹脂)、氧化鋁、多孔碳等,其粒度一般為3,5,7,10μm等,柱效理論值可達(dá)5~16萬/米。
一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效;同系物分析500即可;難分離物則可用2萬的柱子。
因此一般10~30cm左右的柱長(zhǎng)基本能滿足復(fù)雜混合物分析的需要。所以要根據(jù)自己實(shí)際情況來選擇合適的柱子。
柱效受柱內(nèi)外因素影響,為使色譜柱達(dá)到較佳效率,除柱外死體積要小外,還要有合理的柱結(jié)構(gòu)(盡可能減少填充床以外的死體積)及裝填技術(shù)。即使可以的裝填技術(shù),在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的,靠近管壁的部位比較疏松,易產(chǎn)生溝流,流速較快,影響沖洗劑的流形,使譜帶加寬,這就是管壁效應(yīng)。這種管壁區(qū)大約是從管壁向內(nèi)算起30倍粒徑的厚度。在一般的液相色譜系統(tǒng)中,柱外效應(yīng)對(duì)柱效的影響遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于管壁效應(yīng)。
此外,溫度在色譜分析中是個(gè)不容忽視的環(huán)境條件,環(huán)境溫度對(duì)溶劑的溶解能力、色譜柱的性能、流動(dòng)相的粘度都有影響。而且不同的檢測(cè)器對(duì)溫度的敏感度不一樣。保持恒定的溫度對(duì)實(shí)驗(yàn)而言是個(gè)絕對(duì)不容忽視的條件,因此也要留意注溫箱的選擇。以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
(四)進(jìn)樣器
進(jìn)樣裝置要求:密封性好,重復(fù)性好,死體積小,保證中心進(jìn)樣,進(jìn)樣時(shí)對(duì)色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小。而且進(jìn)樣方式多種多樣,可分為隔膜進(jìn)樣、停流進(jìn)樣、閥進(jìn)樣、自動(dòng)進(jìn)樣。自動(dòng)進(jìn)樣器則是市場(chǎng)發(fā)展的趨勢(shì)。
(五)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)
一般專業(yè)的液相色譜儀生產(chǎn)廠家都有自己配套的液相色譜儀控制軟件。但有不少液相色譜儀可以使用通用型的色譜數(shù)據(jù)工作站進(jìn)行數(shù)據(jù)計(jì)算處理。進(jìn)口軟件價(jià)格比較高,這個(gè)自己得根據(jù)資金選擇了。