超微量分光光度計如何保養(yǎng)
超微量分光光度計是精密光學儀器,出廠前經(jīng)過精細的裝配和調(diào)試,如果能對儀器進行恰當?shù)木S護和保養(yǎng),不僅能保證儀器的可靠性和穩(wěn)定性,也可以延長儀器使用壽命。
超微量分光光度計常用于定量溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的高吸收峰的吸收波長260 nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一,因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸,事先要選擇對應的系數(shù)。如:1OD 的吸光值分別相當于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算,從而得出相應的樣品濃度。
超微量分光光度計的工作原理是利用分光光度法對物質(zhì)進行定量定性分析的儀器,常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。無論在物理學、化學、生物學、醫(yī)學、材料學、環(huán)境科學等科學研究領(lǐng)域 ,還是在化工、醫(yī)藥、環(huán)境檢測、冶金等現(xiàn)代生產(chǎn)與管理部門 ,紫外可見分光光度計督有廣泛而重要的應用。
超微量分光光度計是精密光學儀器,正確安裝、使用和保養(yǎng)對保持儀器良好的性能和保證測試的準確度有重要作用。下面分享一些超微量分光光度計不可不知的保養(yǎng)常識。
(1)儀器工作環(huán)境的要求
分光光度計對工作環(huán)境的要求如下。
①儀器應安放在干燥的房間內(nèi),使用溫度為5~35℃.相對濕度不超過85%。
②儀器應放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上,且避免強烈的振動或持續(xù)的振動。
③室內(nèi)照明不宜太強,且應避免直射日光的照射。
④電扇不宜直接向儀器吹風,以防止光源燈因發(fā)光不穩(wěn)定而影響儀器的正常使用。
⑤盡量遠離高強度的磁場、電場及發(fā)生高頻波的電器設(shè)備。
⑥供給儀器的電源電壓為AC 220V±22V,頻率為50Hz±1Hz,并必須裝有良好的接地線。推薦使用功率為1000w以上的電子交流穩(wěn)壓器或交流恒壓穩(wěn)壓器,以加強儀器的抗干擾性能。
⑦避免在有硫化氫等腐蝕性氣體的場所使用。
(2)儀器的日常維護和保養(yǎng)
①光源。光源的壽命有限,為了延長光源使用壽命,在不使用儀器時不要開光源燈,應盡量減少開關(guān)次數(shù)。在短時問的工作間隔內(nèi)可以不關(guān)燈。剛關(guān)閉的光源燈不能立即重新開啟。儀器連續(xù)使用時間不應超過3h。若需長時間使用,hao間歇30min。如果光源燈亮度明顯減弱或不穩(wěn)定,應及時更換新燈。更換后要調(diào)節(jié)好燈絲位置,不要用手直接接觸窗口或燈泡,避免油污沾附。若不小心接觸過,要用無水乙醇擦拭。
②單色器。單色器是儀器的核心部分,裝在密封盒內(nèi),不能拆開。選擇波長應平衡地轉(zhuǎn)動,不可用力過猛。為防止色散元件受潮生霉,必須定期更換單色器盒干燥劑(硅膠)。若發(fā)現(xiàn)干燥劑變色,應立即更換。
③吸收池。必須正確使用吸收池,應特別注意保護吸收池的兩個光學面。
④檢測器。光電轉(zhuǎn)換元件不能長時間曝光,且應避免強光照射或受潮積塵。
⑤當儀器停止工作時,必須切斷電源。
⑥為了避免儀器積灰和沾污,在停止工作時,應蓋上防塵罩。
⑦儀器若暫時不用要定期通電,每次不少于20~30min,以保持整機呈干燥狀態(tài),并且維持電子元器件的性能。
超微量分光光度計是一類很重要的分析儀器 ,無論在物理學、化學、生物學、醫(yī)學、材料學、環(huán)境科學等科學研究領(lǐng)域 ,還是在化工、醫(yī)藥、環(huán)境檢測、冶金等現(xiàn)代生產(chǎn)與管理部門 ,紫外可見分光光度計督有廣泛而重要的應用。
超微量分光光度計主要結(jié)構(gòu)
各種型號的超微量分光光度計基本結(jié)構(gòu)都相同,由如下五種部分組成:
1)光源(鎢燈、鹵鎢燈,氫弧燈,氘燈、氙燈或激光光源);
2)單色器(濾光片、棱鏡、光柵、全息柵);
3)樣品吸收池;
4)檢測系統(tǒng)(光電池、光電管、光電倍增管);
5)信號指示系統(tǒng)(檢流計、微安表、數(shù)字電壓表、示波器、微處理機顯像管)。
光源-單色器-樣品吸收池-檢測系統(tǒng)-信號指示系統(tǒng)。
紫外可見分光光度計來自于美國,產(chǎn)品包含光源,單色器,吸收池,檢測器和顯 示器等,它是一款對物質(zhì)進行定性,定量以及結(jié)構(gòu)分析的儀器。這款儀器和人們常 用的可見光光度計有有很大的區(qū)別,除了波長范圍,使用光源都不一樣等,價格也 是后者要要貴一些;平時的使用和注意事項不一樣的,今天就先來學習一下紫外可見分光光度計使用方法: 1.試驗中所用的量瓶、移液管均應經(jīng)檢定校正、洗凈后使用。 2.使用的石英吸收池必須潔凈。用于盛裝樣品、參比及空內(nèi)溶液的吸收池,當裝 入同一溶劑時,在規(guī)定波長測定吸收池的透光率,如透光率相差在0.3%以下者可配 對使用,否則必須加以校正。 3.取吸收池時,手指拿毛玻璃面的兩側(cè)。裝盛樣品溶液以池休積的4/5為度,使用 揮發(fā)性溶液吋應加蓋,透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈,檢視應無殘留溶劑。 為防止溶劑揮發(fā)后溶質(zhì)殘留在池子的透光面,可先用蘸有空白溶劑的擦鏡紙擦拭, 然后再用干擦鏡紙拭凈。吸收池放入樣品室時應注意每次放入方向相同。使用后用 洗液及水沖洗干凈,晾干防塵保存,吸收池發(fā)現(xiàn)污染不易洗凈時可用硫酸發(fā)煙硝酸(3 :1V/V)混合液稍加浸泡后,洗凈備用。如用重鉻酸鉀清潔液清洗時,吸收池不貧在 清潔液中長時間浸泡,否則清潔液中的重鉻酸鉀結(jié)晶會損壞吸收池的光學表面,并 應充分甩水沖洗,以防重鉻酸鉀吸附于吸收池表面。 4.測定前應先檢查所用的溶劑在測定供試品所用的波長附近是否符合要求,可用 lcm石英吸收池盛溶劑以空氣為空白(即參比光路中不放置任何物質(zhì))測定其吸收度 ,應符合規(guī)定。 5.稱量應按藥典規(guī)定要求。配制測定溶液時稀釋轉(zhuǎn)移次數(shù)應盡可能少,轉(zhuǎn)移稀釋 時所取容積一般應不少于5cm。含量測定供試品應稱取2份,如為對照品比較法,對 照品一般也應稱取2份。吸收系數(shù)檢查也應稱取供試品2份,平行操作,每份結(jié)果對 平均值的偏差應在±0.5%以內(nèi)。作鑒別或檢查可取樣品1份。 6.供試品測定溶液的濃度,除各該品種項下已有注明者外,供試品溶液的吸收度 以在0.3~0.7之間為宜,吸收度讀數(shù)在此范圍誤差較小,并應結(jié)合所用儀器吸收度線 性范圍,配制合適的讀數(shù)濃度。 7.選用儀器的狹縫譜帶寬度應小于供試品吸收帶的半寬度,否則測得的吸收度值 會偏低,狹縫寬度的選擇應以減小狹縫寬度吋供試品的吸收度不揮增加為準,對于 紫外測定的部分品種,可以使用2nm縫寬,但對某些品種如青霉素鉀及鈉的吸收度 檢查則需用lnm縫寬或更窄,否則其264nm的吸收度會偏低。 8.測定時除另有規(guī)定者外,應在規(guī)定的吸收峰±2nm處,再測幾點的吸收度,以核 對供試品的吸收峰位置是否正確,并以吸收度最大的波長作為測定波長,除另有規(guī) 定外吸收度最大波長應在該品種項下規(guī)定的波長±lnm以內(nèi),否則應考慮試樣的同一 性、純度以及儀器波長的準確度 9.除另有規(guī)定外,比色法所用的空內(nèi)系指用同休積的溶劑代替對照品或供試品溶 液,然后依次加入等量的相應試劑,并用同樣方法處理。 10.當吸收度和濃度關(guān)系不呈線性關(guān)系時,應取數(shù)份梯度量的對照濃度,用溶劑補 充至同一休積,顯色后測定各份溶液的吸收度,然后以吸收度與相應的濃度繪制標 準曲線,再根據(jù)供試品的吸收度在標準曲線上求出其含量。