Diol二醇基色譜柱有極強的化學穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性。因為沒有硅烷醇的作用,在對藥物胺類分析時有獨特的選擇性,且沒有拖尾現(xiàn)象。
Diol二醇基色譜柱活動相的配制:
液相色譜是樣品組分在柱填料與活動相之間質量交換而達到分離的目的,因此要求活動相具備以下的特點:
a、活動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保存在柱中)。
b、活動相具有一定惰性,與樣品不產生化學反應(特殊情況除外)。
c、活動相的黏度要盡量小,以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降,延長液體泵的使用壽命(可運用進步溫度的方法降低活動相的黏度)。
Diol二醇基色譜柱實際操縱中應留意以下幾點:
1、接頭要配套,用同一廠商的組接件;
2、接頭之間、柱壓帽螺母與密封卡磁之間無微粒,否則收緊時輕易咬死;
3、密封卡套與柱管一次性卡緊后再也不能松動,所以拆開柱頭再上緊時要小心,不能使卡套移動,原來柱真?zhèn)€不銹鋼濾片和墊片的厚度和強度也不能改變(改變這些附件的性能就促使卡套移動);
4、接頭等組接件不要擰得過緊,適當上緊后接上泵試驗,分步擰緊,直到不漏為止。還有非常重要的是柱硬件的損壞往往會造成不可挽回的損失。
色譜柱老化的目的:是徹底除去填充物中的殘留溶劑和某些揮發(fā)性的物質;另一方面是促進固定液均勻牢固地分布在擔體的表面上。而且新的氣相色譜柱必須老化?! ⊙b填好的色譜柱,連接于儀器上后,應先試壓,試漏,而后在恒定的溫度下用載氣吹洗數(shù)小時后承受分析,一般稱此為柱子的老化過程。老化的目的是把固定相的殘存溶劑,低沸點雜質,低分子量固定液等趕走,使記錄器基線平直,并在老化溫度下使固定液在擔體表面有一個再分布過程,從而涂得更加均勻牢固。裝填好的色譜柱,經過老化一段時間后,柱效及性能均穩(wěn)定了,這樣才可使用?! ±匣襟E: 1、打開氮氣、氫氣、空氣發(fā)生器的電源開關,輸出壓力穩(wěn)定在0.4Mpa左右?! ?、打開色譜儀氣體凈化器的氮氣開關,當色譜儀載氣B的柱前壓上升并穩(wěn)定大約5分鐘后,打開色譜儀的電源開關?! ?、設置各工作部溫度,柱箱初始溫度50℃,)進樣器和檢測器都是250℃。 4、待檢測器溫度升到100℃以上后,打開凈化器上的氫氣、空氣開關,色譜儀的氫氣穩(wěn)定在0.1Mpa,空氣壓力為0.15Mpa左右,觀察基線在氫火焰點著后的電壓值應高于點火之前?! ?、顯示屏左下方應有藍字顯示當前的電壓值和時間,待基線穩(wěn)定后進樣品并同時點擊“啟動”按鈕或按一下色譜儀旁邊的快捷按鈕,進行色譜數(shù)據分析。分析結束時,點擊“停止”按鈕,數(shù)據即自動保存。 6、首先關閉氫氣和空氣氣源,使氫火焰檢測器滅火。
聚合物基質色譜柱具有相當強的硬度,有無孔和有孔兩種規(guī)格。該固定相中含有苯基官能團,可與待測物發(fā)生疏水相互作用。
與硅膠基質的反相填料相比,PolyRP固定相的一個顯著優(yōu)點是可以在極端pH(1-14)條件下使用,盡管分離效率略有降低。它具有相當強的硬度,有無孔和有孔兩種規(guī)格。
該固定相中含有苯基官能團,可與待測物發(fā)生疏水相互作用。與硅膠基質的反相填料相比,PolyRP固定相的一個顯著優(yōu)點是可以在極端pH(1-14)條件下使用,盡管分離效率略有降低。
聚合物基質色譜柱的安裝:
a、拆開柱包裝盒,確認色譜柱的類型、尺寸、出廠日期以及柱內貯存的溶劑。
b、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。
c、按柱管上標示的流動相流向,將聚合物基質色譜柱的入口端通過連接管與進樣閥出口相連接(如條件允許,建議在柱前使用保護柱);柱的出口與檢測器連接。連接管是外徑為1.57mm、內徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管。
在接管時一定要設法降低柱外死體積。連接管通過空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底,然后順時針擰緊空心螺釘,直到擰不動為止,切記不要用力過大。如聚合物基質色譜柱通過流動相加壓后有漏液現(xiàn)象,請用扳手繼續(xù)順時針擰1/4圈,直至不漏液為止。
聚合物基質色譜柱主要基質的特點:
a.硅膠
硅膠是陶瓷性質的無機物基質,剛性大,不易變形。
化學性質較穩(wěn)定,但對于水溶液尤其堿性水溶液仍然是不穩(wěn)定的,即使表面經過良好的化學鍵合,覆蓋了固定液,還是要注意水、堿性溶液、酸性溶液對硅膠的溶解作用,基質或者說是柱床(packedbed)溶解對色譜柱的影響是致命的。
以聚合物基質色譜柱的填料構成了目前絕大多數(shù)的色譜柱填料。純硅膠填料適宜分離溶于有機溶劑的極性、弱極性的非強離解型的化合物,硅膠也可以做凝膠色譜但柱效較低。
聚合物基質色譜柱鍵合固定相的高壓液相填料,有其他填料無法比擬的高分離效能。
b.二氧化鋁
二氧化鋁和硅膠相似,但對水溶液、酸性堿性水溶液溶液更加不穩(wěn)定。所以,極少用作鍵合固定相的基質,也是適宜分離溶于有機溶劑的極性、弱極性的非強離解型的化合物,尤其是分離芳香族碳氫化合物。酸性易離解的化合物容易在二氧化鋁上形成死吸附。另外,氧化鋁分離幾何異構體能力優(yōu)于硅膠。
c.聚合物填料
聚合物基質色譜柱受壓會變形,壓力限度低但pH使用范圍寬。苯乙烯-二乙烯苯基質疏水性強,使用任何流動相,在整個pH范圍內穩(wěn)定,可以用強酸、強堿來清洗色譜柱。甲基丙烯酸酯基質比苯乙烯-二乙烯苯疏水性更強,但可以通過適當?shù)墓δ芑揎椬兂捎H水性的。
由于不耐壓、有溶脹性,所以聚合物填料適宜用于大分子像蛋白質或合成的高聚物,另外還可以制成分子排阻、離子交換柱。大孔樹脂實際上主體就是苯乙烯-二乙烯苯聚合物或類似的合成高聚物。
聚合物基質色譜柱廣泛用于各種不同基質中糖分子、糖醇和其他水溶性物質的分離??梢杂脕矸治鲇袡C酸及利巴韋林等物質,可以用來分離樹膠醛糖、阿糖醇等糖類。
下一篇:恒溫水浴的操作使用及注意事項