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暗視場顯微鏡的原理及注意事項(xiàng) 顯微鏡操作規(guī)程

時(shí)間:2020-05-16    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
   【儀器網(wǎng) 使用手冊】暗視場顯微鏡:使用特殊的暗視場聚光鏡使照明光線偏移而不進(jìn)入物鏡,只有樣品的散射光進(jìn)入物鏡。
  
  注意事項(xiàng)
  
  1、制作暗視場光擋時(shí),若光擋直徑過小或光擋的中心位置不正,則不能全部擋掉直射光,視野不暗,樣品與背景的明暗反差不明顯;若光擋直徑過大,聚焦到樣品上的光線不足,使暗視野顯微鏡觀察到的樣品亮度不佳,影響觀察效果。
  
  2、使用暗視野顯微鏡時(shí),照明光源的照明強(qiáng)度要高,否則樣品的反射光強(qiáng)度不夠,影響觀察效果。
  
  3、若視場中樣品與背景明暗反差不強(qiáng)時(shí),可以上下調(diào)節(jié)聚光器的位置,使視場內(nèi)的反差提高。
  
  4、要求使用的載玻片和蓋玻片必須無劃痕且無灰塵,物鏡前透鏡也必須清潔無塵。載玻片與蓋玻片的厚度應(yīng)符合標(biāo)準(zhǔn)。載玻片太厚,聚光器的焦點(diǎn)將落在載玻片內(nèi),達(dá)不到被檢物體的平面上;使用油鏡頭時(shí),由于物鏡的工作距離很短,甚至無法調(diào)焦,從而看不到或看不清被檢物體。
  
  5、載玻片的厚度要適宜,照明光束經(jīng)暗視野顯微鏡聚光器后,產(chǎn)生空心照明光錐,即中心為暗區(qū)。而反射光的焦點(diǎn)在聚光器上透鏡表面之上,很短的距離。因此,載玻片的適宜厚度為0.8~1.2mm。
  
  6、物鏡的數(shù)值孔徑必須小于聚光器的數(shù)值孔徑,否則會因物鏡的孔徑角大于暗視野顯微鏡聚光器所形成的照明光束中心暗區(qū)的角度,致使部分照明光線射入物鏡,破壞或降低了暗視場的照明。
  
  7、暗視野顯微鏡鏡檢時(shí)室內(nèi)要暗,如果沒有這樣的條件,應(yīng)盡可能使用遮光裝置,以阻止目鏡周圍的光線射入。
  
  8、在進(jìn)行油鏡鏡檢時(shí),由于油內(nèi)的雜質(zhì)和氣泡的漫反射,會妨礙暗視野顯微鏡鏡檢效果,所以要求盡可能地除掉油內(nèi)的雜質(zhì)和氣泡。
  
  工作原理
  
  暗視場顯微鏡在構(gòu)造上應(yīng)用丁達(dá)爾現(xiàn)象(Tyndall phenomenon:當(dāng)聚光光束射入溶膠時(shí),從光束的側(cè)面可以看到一條發(fā)亮的光柱,在光的傳播過程中,光線照射到粒子時(shí),如粒子直徑略小于入射光波長,則發(fā)生光的散射,每個(gè)微粒就成為一個(gè)發(fā)光點(diǎn),從側(cè)面可以看到一條光柱。),裝配了一類特殊聚光器——暗視場聚光器,使入射光束,從聚光器斜向照明被檢樣品。由于照明光線與顯微鏡光軸形成較大的角度通過物場,或因聚光器的特殊構(gòu)造,照明光線在聚光器頂透鏡或蓋片的上表面發(fā)生全反射,致使照明光線不能入射物鏡之內(nèi)。但是,樣品被照明并發(fā)出反射光。鏡檢時(shí),因不能直接觀察到照明光線,與光軸垂直的平面視場暗黑,在深暗的背景上能清晰地看到由散射光和反射光形成的明亮的物體影像,物像與背景造成很大的反差。視場內(nèi)的樣品,被斜射光線照明,可從樣品各種結(jié)構(gòu)表面散射和反射光線,看到許多細(xì)胞器的明亮輪廓,諸如細(xì)胞核、線粒體、液泡以及某些內(nèi)含物等。如果是正在分裂的細(xì)胞,其各類紡錘絲和染色體亦可窺見。
  
  暗視場顯微鏡是利用樣品的散射光和反射光進(jìn)行觀察,所以只能看到物體的存在與運(yùn)動而不能辨清其微細(xì)結(jié)構(gòu)。暗視場顯微鏡的檢測能力,取決于入射光的強(qiáng)度和視場的反差,后者又隨微粒及其背景的折射率差別的加大而增加。
  
  暗視場顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡的區(qū)別,主要在于聚光器的不同,致使照明方法有別。確切地說,稱暗視場顯微鏡為暗視場照明更為貼切。暗視場照明是斜向照明的一種,這種照明法能提高對微小物體的分辨能力,對大小在0.004μm以上的微小粒子,盡管看不清楚其結(jié)構(gòu),亦可清晰地分辨其存在和運(yùn)動。

關(guān)于電子顯微鏡的放大倍率說明

    人類認(rèn)識自然界大部分信息來自眼睛,在對周圍世界的認(rèn)識中,總是希望看到細(xì)微的細(xì)節(jié)。眾多微觀世界的結(jié)構(gòu)需要能夠分辨,并達(dá)到人裸眼分辨的狀態(tài),才能夠正常觀察。由于正常人眼在25cm明視狀態(tài)下,能夠分辨的距離是0.2mm,因此可以使用放大鏡將物體放大來觀察物體的細(xì)節(jié)。例如,用10倍的放大鏡可以將兩個(gè)質(zhì)點(diǎn)間的距離放大10倍,肉眼即可以分辨出0.02mm之間的兩點(diǎn),使物體看得更清晰。但放大鏡的倍數(shù)有限,不能達(dá)到更高的分辨率。因此,分辨本領(lǐng)和放大倍率成為電子顯微鏡要的兩大基本問題。此文重點(diǎn)已放大倍率為主題,展開詳細(xì)介紹:    放大倍率也是顯微鏡性能的一種指標(biāo)。電子顯微鏡不僅需要有較佳的分辨本領(lǐng),還需要有合理的放大倍率。只有通過合理地放大,人眼才能依靠電子顯微鏡的較佳分辨本領(lǐng)區(qū)分精細(xì)的物體和結(jié)構(gòu)。    放大鏡是凸透鏡,其形狀為中間厚,邊緣薄。光線在均勻的各向同性介質(zhì)中,兩點(diǎn)之間以直線傳播,當(dāng)通過不同密度介質(zhì)的透明物體時(shí),則發(fā)生折射現(xiàn)象,使光線向中間匯聚。折射、聚焦是放大鏡的基本原理。當(dāng)用放大鏡觀察物體時(shí),眼睛在放大鏡上面,物體放在放大鏡下面。物體的光線穿過時(shí),發(fā)生折射,使光線向中間匯聚,進(jìn)入人眼。物體在人眼視網(wǎng)膜上所成像的大小與物體對眼所張的角成正比。視角愈大,像也愈大,愈能分辨物體的細(xì)節(jié)。

    放大鏡工作原理

    光學(xué)顯微鏡的物鏡,目鏡及聚光鏡等部件均由單個(gè)和多個(gè)透鏡組成。儀器總放大倍率是儀器各透鏡放大率的乘積,以光鏡為例:

    放大倍率

    式中,ML為總放大倍率,MO為物鏡放大倍率,Me為目鏡放大率。用油浸物鏡時(shí),光鏡總放大倍率為:

    放大倍率

    如果增大Mo或透鏡數(shù)目,總放大倍率ML尚可增大,結(jié)果像雖然增大,但卻是模糊不清的。這種無意義的放大,稱空放大,確切地說就是超過有效放大率的放大稱為空放大。    有效放大率由式得出:

    有效放大率

    分辨本領(lǐng)為2埃的電鏡有效放大率:

    有效放大率

    即100萬倍,比光鏡大1000倍。        根據(jù)以上式中可以得出,有效放大率由分辨本領(lǐng)所決定,而分辨本領(lǐng)又是儀器儀表基礎(chǔ)的性能指標(biāo),若低于有效放大率則儀器沒有完全發(fā)揮其性能。若高于放大倍率就成無意義的放大了。

標(biāo)簽: 電子顯微鏡
電子顯微鏡 關(guān)于電子顯微鏡的放大倍率說明_電子顯微鏡

光學(xué)顯微鏡的使用要點(diǎn)

  一、正確安裝

  使用前,首先要把顯微鏡的目鏡和物鏡安裝上去。目鏡的安裝極為簡單,主要的問題在于物鏡的安裝,由于物鏡鏡頭較貴重,萬一學(xué)生安裝時(shí)螺紋沒合好,易摔到地上,造成鏡頭損壞,所以為了保險(xiǎn)起見,強(qiáng)調(diào)學(xué)生安裝物鏡時(shí)用左手食指合中指托住物鏡,然后用右手將物鏡裝上去,這樣即使沒安裝好,也不會摔到地上。

  二、正確對光

  對光是使用顯微鏡時(shí)很重要的一步,有些學(xué)生在對光時(shí),隨便轉(zhuǎn)一個(gè)物鏡對著通光孔,而不是按要求一定用低倍鏡對光。轉(zhuǎn)動反光鏡時(shí)喜歡用一只手,往往將反光鏡扳了下來。所以教師在指導(dǎo)學(xué)生時(shí),一定要強(qiáng)調(diào)用低倍鏡對光,當(dāng)光線較強(qiáng)時(shí)用小光圈,平面鏡,而光線較弱時(shí)則用大光圈,凹面鏡,反光鏡要用雙手轉(zhuǎn)動,當(dāng)看到均勻光亮的圓形視野為止。光對好后不要隨便的移動顯微鏡,以免光線不能準(zhǔn)確的通過反光鏡進(jìn)入通光孔。

  三、正確使用準(zhǔn)焦螺旋

  使用準(zhǔn)焦螺旋調(diào)節(jié)焦距,找到物象可以說是顯微鏡使用中重要的一步,也是學(xué)生感覺較為困難的一步。學(xué)生在操作中極易出現(xiàn)以下錯(cuò)誤:一是在高倍鏡下直接調(diào)焦;二是不管鏡筒上升或下降,眼睛始終在目鏡中看視野;三是不了解物距的臨界值,物距調(diào)到2~3厘米時(shí)還在往上調(diào),而且轉(zhuǎn)動準(zhǔn)焦螺旋的速度很快。前兩種錯(cuò)誤結(jié)果往往造成物鏡鏡頭抵觸到裝片,損傷裝片或鏡頭,而第三種錯(cuò)誤則是學(xué)生使用顯微鏡時(shí)常見的一種現(xiàn)象。針對以上錯(cuò)誤,教師一定要向?qū)W生強(qiáng)調(diào),調(diào)節(jié)焦距一定要在低倍鏡下調(diào),先轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋,使鏡筒慢慢下降,物鏡靠近載玻片,但注意不要讓物鏡碰到載玻片,在這個(gè)過程中眼睛要從側(cè)面看物鏡,然后用左眼朝目鏡內(nèi)注視,并慢慢反向調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋,使鏡筒緩緩上升,直到看到物像為止,同時(shí)向?qū)W生說明一般顯微鏡的物距在1厘米左右,所以如果物距已遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過1厘米,但仍未看到物象,那可能是標(biāo)本未在視野內(nèi)或轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋過快,此時(shí)應(yīng)調(diào)整裝片位置,然后再重復(fù)上述步驟,當(dāng)視野中出現(xiàn)模糊的物象時(shí),就要換用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋調(diào)節(jié),只有這樣,才能縮小尋找范圍,提高找到物象的速度。

  四、物鏡轉(zhuǎn)換

  使用低倍鏡后換用高倍鏡,學(xué)生往往喜歡用手指直接推轉(zhuǎn)物鏡,認(rèn)為這樣比較省力,但這樣容易使物鏡的光軸發(fā)生偏斜,原因是轉(zhuǎn)換器的材料質(zhì)地較軟,精度較高,螺紋受力不均勻很容易松脫。一旦螺紋破壞,整個(gè)轉(zhuǎn)換器就會報(bào)廢。教師應(yīng)指導(dǎo)學(xué)生手握轉(zhuǎn)換器的下層轉(zhuǎn)動扳轉(zhuǎn)換物鏡。

  五、光學(xué)玻璃清洗

  光學(xué)玻璃用于的鏡頭、棱鏡、鏡片等。在制造和使用中容易沾上油污、水濕性污物、指紋等,影響成像及透光率。清洗光學(xué)玻璃,應(yīng)根據(jù)污垢的特點(diǎn)、不同結(jié)構(gòu),選用不同的清洗劑,使用不同的清洗工具,選用不同的清洗方法。清洗鍍有增透膜的鏡頭,如照相機(jī)、幻燈機(jī)、顯微鏡的鏡頭,可用20%左右的酒精和80%左右的乙醚配置清洗劑進(jìn)行清洗。清洗時(shí)應(yīng)用軟毛刷或棉球沾有少量清洗劑,從鏡頭中心向外做圓運(yùn)動。切忌把這類鏡頭浸泡在清洗劑中清洗,清洗鏡頭時(shí)不要用力擦拭,否則會損傷增透膜,損壞鏡頭。

  清洗棱鏡、平面鏡的方法,可依照清洗鏡頭的方法進(jìn)行。

  使用上述清洗劑也能清洗光學(xué)玻璃上的油脂性霧、水濕性霧和油水混合性霧,其清洗方法和清洗鏡頭的方法相似。

  光學(xué)玻璃表面發(fā)霉,是一種常見現(xiàn)象。當(dāng)光學(xué)玻璃生霉后,光線在其表面發(fā)生散射,使成像模糊不清,嚴(yán)重者將使儀器報(bào)廢。光學(xué)玻璃生霉的原因多是因其表面附有微生物孢子,在溫度、濕度適宜,又有所需“營養(yǎng)物”時(shí),便會快速生長,形成霉斑。對光學(xué)玻璃做好防霉防污尤為重要,一旦產(chǎn)生霉斑應(yīng)立即清洗。

標(biāo)簽: 光學(xué)顯微鏡
光學(xué)顯微鏡 光學(xué)顯微鏡的使用要點(diǎn)_光學(xué)顯微鏡

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