制備液相色譜中,有三個可以觀察到的狀態(tài):柱壓、檢測器基線、譜圖。通過觀察和記錄這三個狀態(tài)可以監(jiān)測儀器是否正常。若某個狀態(tài)出現(xiàn)異常,故障排查和解決方案如下。
1、柱壓波動
1)吸液管路進氣泡
?、偃軇┎蛔?,吸濾頭吸入空氣,添加溶劑并排氣泡。
②吸濾頭臟了或堵塞,用異丙醇(或5%稀硝酸)清洗。
③溶劑中有氣泡(尤其兩種以上溶劑混合),超聲(或抽濾)脫氣。
2)泵流量不穩(wěn)
?、?font color="#0268CA">單向閥堵塞,大流速purge,若不能解決,則需拆下單向閥(異丙醇)超聲清洗清洗或更換單向閥。
?、谥芊馊δp,更換密封圈。
?、郾妙^污染,柱塞桿往復活動受阻,清洗泵頭。
3)柱床塌陷,維修或更換色譜柱。
4)流動相混合后吸放熱導致溫度變化,以致柱壓波動,如乙腈和水混合吸熱,甲醇和水混合放熱。若影響實驗結果,則增加柱溫箱或流動相預混。
2、柱壓升高或超壓。
逐段排查堵塞的位置:
1)先拆下色譜柱,接上兩通運行,若是色譜柱堵塞:
?、龠M樣后樣品析出,用合適的溶劑反沖色譜柱。
②緩沖鹽析出,用大比例水相的流動相沖洗色譜柱。
?、蹤C械雜質堵塞篩板,異丙醇小流速反沖色譜柱。
?、苌V柱污染嚴重,需維修或充填。
2)混合器堵塞,維修或更換。
3)六通閥堵塞,將泵液管路接到連接色譜柱的閥口處,將閥扳至load狀態(tài),用易溶樣品的溶劑小流速沖洗。
4)壓力傳感器故障,維修或更換。
3、檢測器基線波動
1)基線有規(guī)律波動,且幅度較大,則可能有氣泡持續(xù)進入流通池。排查氣泡來源并用異丙醇沖洗檢測器或色譜柱。
2)基線小幅度規(guī)律波動,可能是檢測器燈能量不足(能量下降后,低波長下靈敏度先下降。
3)基線漂移。
?、倭鲃酉嘣诖藱z測波長下有吸收。更換流動相或改變波長。
?、谏V柱或檢測池污染。以異丙醇沖洗色譜柱或檢測池,或將檢測池中透鏡玻片取出清洗。
4、譜圖重現(xiàn)性差
1)檢查方法設置,包括流速、梯度、波長。
2)檢查流動相配置是否有誤,A、B兩相是否放反。
3)檢查柱壓與之前是否有差異,若有變化,則前面1和2進行排查。
4)進樣前色譜柱是否完全平衡好。
5)樣品溶解方法。
液相色譜柱,是一種用于液體色譜分析儀器的部件。那么我們該如何的去選擇液相色譜柱呢?
下面我們就一起來看看吧。
在選擇色譜柱之前,先多了解自己的樣品和雜質,他們的類型結構、極性、酸堿性、分子量大小等等,液相色譜柱決定最終分離效果,所以在選擇色譜柱時候有必要考慮清楚自己的需求。
首先液相色譜柱目前來說分為正反相色譜柱,正相有SI等,反相有C18等。正相主要分離極性物質,反相主要分離非極性物質,氨基柱等主要分離二者之間的。
明確了色譜柱大概功能之后,確認下自己樣品信息,基本就有點眉目了,方向對了,剩下的事情就是細節(jié)了如:鍵合相、粒徑、孔徑、碳載量等
1.樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測,即要選擇承受100%純水且對極性化合物保留很好的色譜柱
2.如果樣品極性太強,或酸性太強;可以選擇CN,NH2,或硅膠柱,HILIC(親水色譜),也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱(缺點是離子對試劑平衡時間長;
對流動相pH要求比較精密,否則很難重復實驗,另外離子對試劑很難洗下來,基本上用了離子對的色譜柱就不能再用于其它實驗)
3.若樣品是堿性的;可選擇高純硅膠柱(高純硅膠缺少金屬雜質,且硅膠端基封尾)或一些經(jīng)過修飾的C18柱(如極性嵌入技術或堿去活技術等);
他們都會減少堿性化合物的拖尾,一般會選擇中性或偏堿的條件下做,因為這樣可增加堿性樣品的保留
4.如果堿性化合物的極性太強,或堿性太強;可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測(優(yōu)點是方法開發(fā)簡單;
缺點是目前實現(xiàn)這一技術的色譜柱品牌比較少,價格也高)或者選用HILIC色譜柱(硅膠柱在反相條件下使用;
這也是很經(jīng)典的檢測堿性樣品的方法)選擇強離子交換柱(缺點是不能用來分析其它樣品,對流動相pH要求比較精密,否則很難重復實驗)也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱。
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