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液相色譜儀使用中的注意事項 液相色譜操作規(guī)程

時間:2020-05-16    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
  【中國儀器網(wǎng) 使用手冊】液相色譜儀(HPLC)現(xiàn)已成為有機化學分析的重要手段之一。和其它分析儀器一樣,想要HPLC很好地為你工作、得到可靠的數(shù)據(jù),首先你要保養(yǎng)好它,使它處于一個良好的待機狀態(tài),這樣你操作它進行分析時就可以比較順利地獲得理想的結果。而且良好規(guī)范的操作習慣可以延長儀器使用壽命。筆者將從液相色譜儀使用中的幾個注意事項進行討論,給新從事HPLC分析的工作者一點操作建議,希望能對大家進行正確的操作儀器起到幫助。
 
  基本操作
 
  1). 嚴格過濾色譜純流動相,根據(jù)需要選擇不同的濾膜。
 
  2). 對抽濾后的流動相進行超聲脫氣20~30分鐘。
 
  3). 打開色譜工作站,連接好流動相管道,連接檢測系統(tǒng)。
 
  4).有一段時間沒用,或者換了新的流動相,需要先沖洗泵和進樣閥。沖洗泵,直接在泵的出水口,用針頭抽取。沖洗進樣閥,沖洗時速度不要超過10ml/min。
 
  5). 調節(jié)流量,初次使用新的流動相,可以先試一下壓力,流速越大,壓力越大,一般不要超過2000psi。選用合適的流速。
 
  6). 設定不同樣品的檢測器分析參數(shù)。
 
  7). 等基線走穩(wěn)即可進樣分析,分析樣品時對樣品的前處理非常重要。
 
  8).關機時,先關檢測器,泵不要關掉,應改用流動相沖洗泵,不同的流動相沖洗時間不同,一般沖洗30min,若是緩沖鹽作流動相應先用水沖洗30min,再用純甲醇沖洗。
 
  9). 然后關液相泵。
 
  10). 需要把進樣閥沖洗干凈,另把注射器等工具清理整潔。
 
  注意事項
 
  一、加裝保護柱
 
  保護柱的作用是過濾掉來自流動相和樣品的化學“拉圾”同時也可以有效除去流動相和樣品中的不溶物。盡管現(xiàn)在的色譜儀在流動相吸入口、進樣閥后部以及在色譜柱的兩端都裝有1、2μm等不同孔徑的濾器,但濾器只能除去不溶性顆粒而不能除去化學污然,因此,加裝保護柱是必要的,特別是在分析中藥、中成藥等復雜混合物和生物樣品時更是保護分析柱必不可少的措施。
 
  二、過濾流動相和樣品
 
  流動相通常由水或緩沖溶液與有機溶劑混合而成,原則上,所有經(jīng)過色譜柱的流動相均應過濾,但在實際操作上應視具體情況而有所區(qū)別:當有機溶劑用色譜純級,水用石英亞沸水或其它超純水時,在能確保水和有機溶劑的質量且沒有受到污染時,過濾并無更多實際意義。
 
  三、凈化樣品
 
  當樣品中含有對色譜柱有損害的化學成分,如產(chǎn)生*性吸附的蛋白質、糖等有機分子和強吸附性物質,以及可能對柱填料產(chǎn)生破壞作用的基團離子。在進樣前應盡可能對樣品進行分離提純以除去多余雜質組分。
 
  四、避免過高的柱壓
 
  雖然液相色譜柱能耐受的壓力可達6000 p si (磅/平方英寸) ,但過高及過大的壓力變化均會縮短色譜柱的壽命,避免的方法是
 
  (1)柱壓過高時,盡可能采用較小的流速,以不超過柱zui大允許壓力的一半為宜。
 
  ( 2)當流速較大時,應采取流速梯度的辦法使流速分步到位。
 
  (3)使用手動進樣閥時,進樣閥的切換要盡可能的快。否則超過20%的壓力沖擊會很快使柱報廢。當使用多柱聯(lián)用時,柱切換要避免在高壓下進行。
 
  五、正確及時的沖洗
 
  開始試驗前,應了解柱中當前是何種溶劑。對于新色譜柱,如無特殊說明均為評價報告中所用流動相。柱中當前溶劑一定要與分析樣品所用流動相互溶,如不能混溶,要用與二者均能相互混溶的第三種溶劑過渡。

制備液相色譜故障排查及解決方案

  制備液相色譜中,有三個可以觀察到的狀態(tài):柱壓、檢測器基線、譜圖。通過觀察和記錄這三個狀態(tài)可以監(jiān)測儀器是否正常。若某個狀態(tài)出現(xiàn)異常,故障排查和解決方案如下。

  1、柱壓波動

  1)吸液管路進氣泡

 ?、偃軇┎蛔?,吸濾頭吸入空氣,添加溶劑并排氣泡。

  ②吸濾頭臟了或堵塞,用異丙醇(或5%稀硝酸)清洗。

  ③溶劑中有氣泡(尤其兩種以上溶劑混合),超聲(或抽濾)脫氣。

  2)泵流量不穩(wěn)

 ?、?font color="#0268CA">單向閥堵塞,大流速purge,若不能解決,則需拆下單向閥(異丙醇)超聲清洗清洗或更換單向閥。

 ?、谥芊馊δp,更換密封圈。

 ?、郾妙^污染,柱塞桿往復活動受阻,清洗泵頭。

  3)柱床塌陷,維修或更換色譜柱。

  4)流動相混合后吸放熱導致溫度變化,以致柱壓波動,如乙腈和水混合吸熱,甲醇和水混合放熱。若影響實驗結果,則增加柱溫箱或流動相預混。

  2、柱壓升高或超壓。

  逐段排查堵塞的位置:

  1)先拆下色譜柱,接上兩通運行,若是色譜柱堵塞:

 ?、龠M樣后樣品析出,用合適的溶劑反沖色譜柱。

  ②緩沖鹽析出,用大比例水相的流動相沖洗色譜柱。

 ?、蹤C械雜質堵塞篩板,異丙醇小流速反沖色譜柱。

 ?、苌V柱污染嚴重,需維修或充填。

  2)混合器堵塞,維修或更換。

  3)六通閥堵塞,將泵液管路接到連接色譜柱的閥口處,將閥扳至load狀態(tài),用易溶樣品的溶劑小流速沖洗。

  4)壓力傳感器故障,維修或更換。

  3、檢測器基線波動

  1)基線有規(guī)律波動,且幅度較大,則可能有氣泡持續(xù)進入流通池。排查氣泡來源并用異丙醇沖洗檢測器或色譜柱。

  2)基線小幅度規(guī)律波動,可能是檢測器燈能量不足(能量下降后,低波長下靈敏度先下降。

  3)基線漂移。

 ?、倭鲃酉嘣诖藱z測波長下有吸收。更換流動相或改變波長。

 ?、谏V柱或檢測池污染。以異丙醇沖洗色譜柱或檢測池,或將檢測池中透鏡玻片取出清洗。

  4、譜圖重現(xiàn)性差

  1)檢查方法設置,包括流速、梯度、波長。

  2)檢查流動相配置是否有誤,A、B兩相是否放反。

  3)檢查柱壓與之前是否有差異,若有變化,則前面1和2進行排查。

  4)進樣前色譜柱是否完全平衡好。

  5)樣品溶解方法。

標簽: 制備液相色譜
制備液相色譜 制備液相色譜故障排查及解決方案_制備液相色譜

關于液相色譜柱的選擇

    液相色譜柱,是一種用于液體色譜分析儀器的部件。那么我們該如何的去選擇液相色譜柱呢?

    下面我們就一起來看看吧。

    在選擇色譜柱之前,先多了解自己的樣品和雜質,他們的類型結構、極性、酸堿性、分子量大小等等,液相色譜柱決定最終分離效果,所以在選擇色譜柱時候有必要考慮清楚自己的需求。

    首先液相色譜柱目前來說分為正反相色譜柱,正相有SI等,反相有C18等。正相主要分離極性物質,反相主要分離非極性物質,氨基柱等主要分離二者之間的。

    明確了色譜柱大概功能之后,確認下自己樣品信息,基本就有點眉目了,方向對了,剩下的事情就是細節(jié)了如:鍵合相、粒徑、孔徑、碳載量等

    1.樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測,即要選擇承受100%純水且對極性化合物保留很好的色譜柱

    2.如果樣品極性太強,或酸性太強;可以選擇CN,NH2,或硅膠柱,HILIC(親水色譜),也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱(缺點是離子對試劑平衡時間長;

    對流動相pH要求比較精密,否則很難重復實驗,另外離子對試劑很難洗下來,基本上用了離子對的色譜柱就不能再用于其它實驗)

    3.若樣品是堿性的;可選擇高純硅膠柱(高純硅膠缺少金屬雜質,且硅膠端基封尾)或一些經(jīng)過修飾的C18柱(如極性嵌入技術或堿去活技術等);

    他們都會減少堿性化合物的拖尾,一般會選擇中性或偏堿的條件下做,因為這樣可增加堿性樣品的保留

    4.如果堿性化合物的極性太強,或堿性太強;可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測(優(yōu)點是方法開發(fā)簡單;

    缺點是目前實現(xiàn)這一技術的色譜柱品牌比較少,價格也高)或者選用HILIC色譜柱(硅膠柱在反相條件下使用;

    這也是很經(jīng)典的檢測堿性樣品的方法)選擇強離子交換柱(缺點是不能用來分析其它樣品,對流動相pH要求比較精密,否則很難重復實驗)也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱。

標簽: 液相色譜柱
液相色譜柱標簽: 關于液相色譜柱的選擇_液相色譜柱組合標題:

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