紫外可見分光光度計(jì)來自于美國,產(chǎn)品包含光源,單色器,吸收池,檢測器和顯 示器等,它是一款對物質(zhì)進(jìn)行定性,定量以及結(jié)構(gòu)分析的儀器。這款儀器和人們常 用的可見光光度計(jì)有有很大的區(qū)別,除了波長范圍,使用光源都不一樣等,價(jià)格也 是后者要要貴一些;平時(shí)的使用和注意事項(xiàng)不一樣的,今天就先來學(xué)習(xí)一下紫外可見分光光度計(jì)使用方法: 1.試驗(yàn)中所用的量瓶、移液管均應(yīng)經(jīng)檢定校正、洗凈后使用。 2.使用的石英吸收池必須潔凈。用于盛裝樣品、參比及空內(nèi)溶液的吸收池,當(dāng)裝 入同一溶劑時(shí),在規(guī)定波長測定吸收池的透光率,如透光率相差在0.3%以下者可配 對使用,否則必須加以校正。 3.取吸收池時(shí),手指拿毛玻璃面的兩側(cè)。裝盛樣品溶液以池休積的4/5為度,使用 揮發(fā)性溶液吋應(yīng)加蓋,透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈,檢視應(yīng)無殘留溶劑。 為防止溶劑揮發(fā)后溶質(zhì)殘留在池子的透光面,可先用蘸有空白溶劑的擦鏡紙擦拭, 然后再用干擦鏡紙拭凈。吸收池放入樣品室時(shí)應(yīng)注意每次放入方向相同。使用后用 洗液及水沖洗干凈,晾干防塵保存,吸收池發(fā)現(xiàn)污染不易洗凈時(shí)可用硫酸發(fā)煙硝酸(3 :1V/V)混合液稍加浸泡后,洗凈備用。如用重鉻酸鉀清潔液清洗時(shí),吸收池不貧在 清潔液中長時(shí)間浸泡,否則清潔液中的重鉻酸鉀結(jié)晶會損壞吸收池的光學(xué)表面,并 應(yīng)充分甩水沖洗,以防重鉻酸鉀吸附于吸收池表面。 4.測定前應(yīng)先檢查所用的溶劑在測定供試品所用的波長附近是否符合要求,可用 lcm石英吸收池盛溶劑以空氣為空白(即參比光路中不放置任何物質(zhì))測定其吸收度 ,應(yīng)符合規(guī)定。 5.稱量應(yīng)按藥典規(guī)定要求。配制測定溶液時(shí)稀釋轉(zhuǎn)移次數(shù)應(yīng)盡可能少,轉(zhuǎn)移稀釋 時(shí)所取容積一般應(yīng)不少于5cm。含量測定供試品應(yīng)稱取2份,如為對照品比較法,對 照品一般也應(yīng)稱取2份。吸收系數(shù)檢查也應(yīng)稱取供試品2份,平行操作,每份結(jié)果對 平均值的偏差應(yīng)在±0.5%以內(nèi)。作鑒別或檢查可取樣品1份。 6.供試品測定溶液的濃度,除各該品種項(xiàng)下已有注明者外,供試品溶液的吸收度 以在0.3~0.7之間為宜,吸收度讀數(shù)在此范圍誤差較小,并應(yīng)結(jié)合所用儀器吸收度線 性范圍,配制合適的讀數(shù)濃度。 7.選用儀器的狹縫譜帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度,否則測得的吸收度值 會偏低,狹縫寬度的選擇應(yīng)以減小狹縫寬度吋供試品的吸收度不揮增加為準(zhǔn),對于 紫外測定的部分品種,可以使用2nm縫寬,但對某些品種如青霉素鉀及鈉的吸收度 檢查則需用lnm縫寬或更窄,否則其264nm的吸收度會偏低。 8.測定時(shí)除另有規(guī)定者外,應(yīng)在規(guī)定的吸收峰±2nm處,再測幾點(diǎn)的吸收度,以核 對供試品的吸收峰位置是否正確,并以吸收度最大的波長作為測定波長,除另有規(guī) 定外吸收度最大波長應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長±lnm以內(nèi),否則應(yīng)考慮試樣的同一 性、純度以及儀器波長的準(zhǔn)確度 9.除另有規(guī)定外,比色法所用的空內(nèi)系指用同休積的溶劑代替對照品或供試品溶 液,然后依次加入等量的相應(yīng)試劑,并用同樣方法處理。 10.當(dāng)吸收度和濃度關(guān)系不呈線性關(guān)系時(shí),應(yīng)取數(shù)份梯度量的對照濃度,用溶劑補(bǔ) 充至同一休積,顯色后測定各份溶液的吸收度,然后以吸收度與相應(yīng)的濃度繪制標(biāo) 準(zhǔn)曲線,再根據(jù)供試品的吸收度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出其含量。
超微量分光光度計(jì)是一類很重要的分析儀器,無論在物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)研究領(lǐng)域,還是在化工、醫(yī)藥、環(huán)境檢測、冶金等現(xiàn)代生產(chǎn)與管理部門,紫外可見分光光度計(jì)督有廣泛而重要的應(yīng)用。
主要結(jié)構(gòu): 各種型號的超微量分光光度計(jì)基本結(jié)構(gòu)都相同,由如下五種部分組成: 1)光源(鎢燈、鹵鎢燈,氫弧燈,氘燈、氙燈或激光光源); 2)單色器(濾光片、棱鏡、光柵、全息柵); 3)樣品吸收池; 4)檢測系統(tǒng)(光電池、光電管、光電倍增管); 5)信號指示系統(tǒng)(檢流計(jì)、微安表、數(shù)字電壓表、示波器、微處理機(jī)顯像管)。 光源-單色器-樣品吸收池-檢測系統(tǒng)-信號指示系統(tǒng)?! ?span style="COLOR: #ff0000">與傳統(tǒng)光度計(jì)的區(qū)別: 傳統(tǒng)分光光度計(jì): 樣品體積要求大,絕大部分要50μL以上 需使用比色皿 每次換樣品時(shí),比色杯需要清洗,工作繁重 光程一般為10mm,樣品需要稀釋,測量濃度范圍小 燈源一般由氘燈(紫外)和鎢燈(可見)組成,壽命短 需要預(yù)熱半個(gè)小時(shí)以上 顯示吸光度值,不顯示濃度值 儀器體積大,質(zhì)量重 超微量分光光度計(jì): 所需樣品體積小,僅需1~2μL 不需要比色皿,用移液槍直接將樣品滴加到檢測平臺上,測量時(shí)樣品自動形成液柱,檢測完成后只需用干凈的吸水紙將樣品從檢測平臺上擦拭干凈即可 具有1mm和0.2mm兩個(gè)光程(電機(jī)控制自動選擇光程),樣品無需稀釋,測量范圍可達(dá)到常規(guī)分光光度計(jì)的50倍 氙氣閃光燈為燈源,壽命長,性能穩(wěn)定 不需要預(yù)熱,可隨時(shí)檢測 顯示吸光度值的同時(shí),程序直接給出濃度值(核酸、蛋白和熒光染料) 體積小:相當(dāng)于一本字典大小,僅占16.5厘米實(shí)驗(yàn)室空間