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安捷倫液相色譜儀的規(guī)范操作 液相色譜操作規(guī)程

時(shí)間:2020-05-16    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
  安捷倫液相色譜儀的規(guī)范操作
 
  1. 目的:明確安捷倫液相色譜儀的規(guī)范操作,確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。
 
  2. 范圍:適用于安捷倫液相色譜儀。
 
  3. 職責(zé):檢驗(yàn)人員對(duì)此負(fù)責(zé)。
 
  4. 操作規(guī)程:
 
  4.1 系統(tǒng)組成
 
  本系統(tǒng)由1個(gè)溶劑二元輸送泵(分主/A泵和副/B泵)、手動(dòng)進(jìn)樣閥、柱溫箱、檢測(cè)器、化學(xué)工作站和電腦等組成。
 
  4.2 準(zhǔn)備
 
  4.2.1使用前應(yīng)根據(jù)待檢樣品的檢驗(yàn)方法準(zhǔn)備所需的流動(dòng)相,用合適的0.45μm濾膜過濾,超聲脫氣20min。
 
  4.2.2 根據(jù)待檢樣品的需要更換合適的色譜柱(柱進(jìn)出口位置應(yīng)與流動(dòng)相流向一致)和定量環(huán)。
 
  4.2.3 配制樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液(也可在平衡系統(tǒng)時(shí)配制),用合適的0.45μm濾膜過濾。
 
  4.2.4 檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常
 
  4.1 將待測(cè)樣品按要求前處理,準(zhǔn)備HPLC 所需流動(dòng)相,檢查線路是否連接完好,廢液瓶是否夠用等。
 
  4.3開機(jī):
 
  4.3.1 打開計(jì)算機(jī),進(jìn)入中文Windows XP畫面,并運(yùn)行CAG Bootp Server程序。
 
  4.3.2 打開 1200 LC 各模塊電源。
 
  4.3.3 待各模塊自檢完成后,雙擊[Instrument 1 Online]圖標(biāo),化學(xué)工作站自動(dòng)與1200LC
 
  通訊,進(jìn)入的工作站畫面如下所示。
 
  4.3.4 從[視圖]菜單中選擇[方法和運(yùn)行控制]畫面, 點(diǎn)擊[視圖]菜單中的[顯示頂部 工具欄], [ 顯示狀態(tài)工具欄],[系統(tǒng)視圖],[樣品視圖],使其命令前有[√]標(biāo)志,來調(diào)用所需的界面。
 
  4.3.5 把流動(dòng)相放入溶劑瓶中。
 
  4.3.6 打開沖洗閥。
 
  4.3.7 點(diǎn)擊[泵]圖標(biāo),點(diǎn)擊[設(shè)置泵…]選項(xiàng),進(jìn)入泵編輯畫面。
 
  4.3.8 設(shè)流速:5ml/min,點(diǎn)擊[確定]。
 
  4.3.9 點(diǎn)擊[泵] 圖標(biāo),點(diǎn)擊[控制…]選項(xiàng),選中[啟動(dòng)],點(diǎn)擊[確定] ,則系統(tǒng)開始沖洗,直到管線內(nèi)(由溶劑瓶到泵入口)無氣泡為止,切換通道繼續(xù)沖洗,直到所有要用通道無氣泡為止。
 
  4.3.10 點(diǎn)擊[泵] 圖標(biāo),點(diǎn)擊[控制…]選項(xiàng),選中[關(guān)閉],點(diǎn)擊[確定]關(guān)泵, 關(guān)閉沖洗閥。
 
  4.3.11 點(diǎn)擊[泵]圖標(biāo),點(diǎn)擊 [設(shè)置泵…選項(xiàng)],設(shè)流速:1.0ml/min。
 
  4.3.12 點(diǎn)擊泵下面的瓶圖標(biāo),如下圖所示(以單元泵為例),輸入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積。 也可輸入停泵的體積,點(diǎn)擊[確定]。
 
  4.4 數(shù)據(jù)采集方法編輯
 
  4.4.1開始編輯完整方法:從[方法]菜單中選擇[編輯完整方法…] 項(xiàng),如下圖所示選中除[數(shù)據(jù)分析 ]外的三項(xiàng),點(diǎn)擊[確定],進(jìn)入下一畫面。 4.4.2方法信息
 
  4.4.2.1在[方法注釋]中加入方法的信息(如:測(cè)試方法)。 4.4.2.2 點(diǎn)擊 [確定], 進(jìn)入下一畫面。 4.4.3 泵參數(shù)設(shè)定
 
  4.4.3.1 在[流速]處輸入流量,如1ml/min,在[溶劑 B]處輸入80.0,(A=100-B) ,也可[插入 ]一行[時(shí)間表] ,編輯梯度。在[壓力限]處輸入柱子的zui大耐高壓,以保護(hù)柱子。
 
  4.4.3.2 點(diǎn)擊[確定],進(jìn)入下一畫面。
 
  4.4.4 柱溫箱參數(shù)設(shè)定
 
  4.4.4.1 在[溫度]下面的空白方框內(nèi)輸入所需溫度,如:40度。并選中它,點(diǎn)擊[更多>>] 鍵,如圖所示,選中[與左側(cè)相同],使柱溫箱的溫度左右一致。
 
  4.4.4.2 點(diǎn)擊[確定],進(jìn)入下一畫面。
 
  4.4.5 檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定:檢測(cè)波長(zhǎng):一般選擇zui大吸收處的波長(zhǎng)。樣品帶寬:一般選擇zui大吸收值一半處的整個(gè)寬度。參比波長(zhǎng):一般選擇在靠近樣品信號(hào)的無吸收或低吸收區(qū)域 。參比帶寬:至少要與樣品信號(hào)的帶寬相等,許多情況下用100nm作為缺省值。同時(shí)可以輸入采集光譜方式,步長(zhǎng),范圍,閾值。選中所用的燈。
 
  4.4.6 在[ 運(yùn)行時(shí)選項(xiàng)表 ]中選中[ 數(shù)據(jù)采集],點(diǎn)擊[確定]。
 
  4.4.7 點(diǎn)擊[方法]菜單,選中[方法另存為…],輸入一方法名,如[測(cè)試],點(diǎn)擊[確定]。
 
  4.4.8 從菜單 [視圖]中選中[在線信號(hào)],選中[信號(hào)窗口1],然后點(diǎn)擊[改變…] 鈕,將所要繪圖的信號(hào)移到右邊的框中,點(diǎn)擊[確定]。(如同時(shí)檢測(cè)二個(gè)信號(hào),則重復(fù)10,選中[信號(hào)窗口2]。
 
  單擊[改變]鍵,即可彈出右側(cè)的[編輯信號(hào)圖譜]窗口,進(jìn)而選擇所需的譜圖信號(hào)。 4.4.9 從[運(yùn)行控制]菜單中選擇[樣品信息]選項(xiàng),如下圖所示,輸入操作者名稱,如[安裝工程師];在[數(shù)據(jù)文件 ]中選擇[手動(dòng)]或[前綴/計(jì)數(shù)器]。區(qū)別: 手動(dòng)--每次做樣之前必須給出新名字,否則儀器會(huì)將上次的數(shù)據(jù)覆蓋掉。 Pr—在前綴/計(jì)數(shù)器----[前綴]框中輸入前綴,在[計(jì)數(shù)器]框中輸入計(jì)數(shù)器的起始位,儀器會(huì)自動(dòng)命名,如vwd數(shù)據(jù)0001,vwd數(shù)據(jù)0002……。
 
  4.4.10 點(diǎn)擊[確定] ,從[儀器] 菜單選擇[系統(tǒng)開啟]。
 
  4.4.11 等儀器準(zhǔn)備好,基線平穩(wěn),用試樣溶液清洗注射器,并排除氣泡后抽取適量。

高效液相色譜儀的脫氣的必要性

  在食品分析中,無論是殘留分析還是成分分析,HPLC 也已成為不可或缺的。流動(dòng)相脫氣是HPLC 系統(tǒng)能得到可靠數(shù)據(jù)的一個(gè)很有效的措施。下面分析一下,高效液相色譜脫氣的必要性,并總結(jié)歸納了脫氣常用的方法。

  一、脫氣的必要性

  流動(dòng)相脫氣是HPLC 系統(tǒng)能得到可靠數(shù)據(jù)的一個(gè)很有效的措施。HPLC 泵在輸送液體時(shí)要產(chǎn)生很大的力量,由于氣體的壓縮比與液體相比大的多,因而當(dāng)氣泡存在時(shí),我們發(fā)現(xiàn)瞬間的流速降低和系統(tǒng)壓力下降。如果這個(gè)氣泡足夠大,液相泵將不能輸送任何溶劑,而且如果壓力低于預(yù)先設(shè)定的壓力低限,泵將停止工作。當(dāng)一個(gè)氣泡通過輸液泵時(shí),由于系統(tǒng)壓力大,氣泡通常會(huì)溶解在流動(dòng)相溶液中,隨流動(dòng)相通過柱子。但是到達(dá)檢測(cè)器流通池時(shí)系統(tǒng)壓力又恢復(fù)到了大氣壓,因而氣泡可能在檢測(cè)器流通池中又顯現(xiàn),在色譜圖上會(huì)出現(xiàn)不規(guī)律的毛刺。

  二、脫氣方法

  1、吹氦脫氣法。

  利用氦氣在液體中溶解度比空氣低的特性,在0.1MPa 壓力下,以約60 mL/min 流速通入流動(dòng)相儲(chǔ)液容器中10~15min,可以很有效地從流動(dòng)相中排除溶解的空氣,能排除接近80%的氧氣。采用一個(gè)高效分布式噴射流裝置,一體積的氦氣可從流動(dòng)相中將等體積的幾乎全部氣體排除。這意味著1L 氦氣通過1L 流動(dòng)相就可完成排氣這個(gè)工作。這種脫氣方法雖然好,但氦氣價(jià)格較高,很少使用。

  2、加熱回流法。

  此法的脫氣效果較好。在操作時(shí)要注意冷凝塔的冷卻效率,否則溶劑會(huì)丟失,混合流動(dòng)相的比例會(huì)有變化。

  3、抽真空脫氣法。

  此法可使用真空泵,降壓至0.05~0.07MPa ,即可除去溶解的氣體。但是由于真空脫氣會(huì)使混合溶劑組成發(fā)生變化,從而影響到實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性,因此多用于單溶劑體系的簡(jiǎn)單分析。

  4、超聲波脫氣法。

  將欲脫氣的流動(dòng)相置于超聲波清洗機(jī)中,用超聲波震蕩10~20min。此法的脫氣效果最差。

標(biāo)簽: 高效液相色譜儀
高效液相色譜儀 高效液相色譜儀的脫氣的必要性_高效液相色譜儀

液相色譜柱常用的填料都有哪些

  在液相色譜分離系統(tǒng)中,色譜填料選擇的正確與否會(huì)直接影響到專業(yè)的液相色譜柱分離物質(zhì)效果的好壞。由于液相色譜填料具有相當(dāng)寬的選擇范圍,所以我們?cè)谫?gòu)買液相色譜柱之前有必要對(duì)不同液相色譜填料進(jìn)行一個(gè)簡(jiǎn)單的認(rèn)識(shí)和了解。

  第一、正相色譜硅膠基質(zhì)填料。

  正相色譜柱的固定相是由硅膠和其他具有極性官能團(tuán)組成的鍵合相填料。其物質(zhì)分離特點(diǎn)是極性較弱組合最先被色譜柱沖洗出來。而且正相色譜所使用的流動(dòng)相其極性要低于固定相,流動(dòng)相通常使用正乙烷和二氯甲烷等。

  第二、反相色譜硅膠基質(zhì)填料。

  反向色譜柱的填料是以硅膠材料為主要物質(zhì),并與極性相對(duì)較弱的官能團(tuán)組成的鍵合相。其物質(zhì)分離特點(diǎn)是極性較強(qiáng)組合最先被色譜柱沖洗出來,而極性弱的組分則會(huì)更強(qiáng)的保留在柱子上。反向色譜的流動(dòng)相的極性相對(duì)較強(qiáng),常配制有機(jī)緩沖液作為流動(dòng)相。目前較為常用的反相色譜填料有C4(B)、C8(MOS)以及C18(ODS)等。

  第三、聚合物填料。

  這種聚合物的填料一般是由聚甲基丙酸酯或者聚苯乙烯-二乙烯基苯組成。其特點(diǎn)是這種色譜柱的酸堿度適用范圍相對(duì)較廣,且疏水性很強(qiáng),但它的柱效相對(duì)于硅膠基質(zhì)的填料要低一些。一般將這種大孔的基質(zhì)填料用于蛋白質(zhì)的分離。

  第四、其他無機(jī)填料。

  如石墨化碳對(duì)于酸堿度和溫度沒用嚴(yán)格的限制范圍,一般可對(duì)一些幾何導(dǎo)構(gòu)體進(jìn)行分離。此外還有氧化鋁以及氧化鋯等無機(jī)填料的應(yīng)用。

  總而言之,如果我們能夠全面系統(tǒng)的了解一下液相色譜柱填料的分類及特點(diǎn),那么我們?cè)谶x擇購(gòu)買一流的色譜柱時(shí)就可以在一個(gè)相對(duì)較小的范圍內(nèi)順利找到自己所需要的產(chǎn)品。這樣我們就可以在節(jié)省選擇購(gòu)買時(shí)間的同時(shí),也能快速買到令自己滿意的色譜柱。

標(biāo)簽: 液相色譜柱
液相色譜柱 液相色譜柱常用的填料都有哪些_液相色譜柱

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