液相色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲(封頭)與柱填料等組成。
柱管:
多用不銹鋼制成,若果使用時(shí)柱壓不高于70 kg/cm2時(shí),也可采用厚壁玻璃或石英管,管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。用于柱填料的裝填。
壓帽:
即色譜柱兩端套合于柱管端外壁的塑性圓柱帽,中部有小孔,多為聚四氟乙烯制成,用于固定篩板。
密封環(huán):
位于接頭螺旋環(huán)內(nèi)壁的彈性環(huán),多為聚四氟乙烯制成,用于色譜柱兩端壓帽與柱外壁的密封。
色譜柱使用前注意事項(xiàng)。
色譜柱在使用前,最hao進(jìn)行柱的性能測(cè)試,并將結(jié)果保存起來(lái),作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。
在做柱性能測(cè)試時(shí)要按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測(cè)試所使用的條件是最jia條件),只有這樣,測(cè)得的結(jié)果才有可比性。
但要注意:
柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同。
1、樣品的前處理
a、最hao使用流動(dòng)相溶解樣品。
b、使用預(yù)處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
c、使用0.45μm或0.22?m的過(guò)濾膜過(guò)濾除去微粒雜質(zhì)。
2、流動(dòng)相的配制
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn):
a、流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中)。
b、流動(dòng)相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)
c、流動(dòng)相的黏度要盡量小,以便得到好的分離效果;降低柱壓降,延長(zhǎng)泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度)。
d、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器,最hao使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制。
e、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。
f、在流動(dòng)相配制好后,一定要進(jìn)行脫氣。
除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè),還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
3、流動(dòng)相流速的選擇
因柱效是柱中流動(dòng)相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。
對(duì)于一根特定的色譜柱,要追求最jia柱效,最hao使用最jia流速。
對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。
當(dāng)選用最jia流速時(shí),分析時(shí)間可能延長(zhǎng)。
可采用改變流動(dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí),可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。
注意:
a.含水流動(dòng)相最hao在實(shí)驗(yàn)前配制,尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動(dòng)相不要過(guò)夜。最hao加入die氮化鈉,防止細(xì)菌生長(zhǎng)。
b.流動(dòng)相要求使用0.45 μm或0.22m濾膜過(guò)濾,除去微粒雜質(zhì)。
c.使用HPLC級(jí)溶劑配制流動(dòng)相,使用合適的流動(dòng)相可延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命,提高柱性能。
1、首先檢查高效液相色譜儀的噪聲,如果噪聲大,會(huì)引起基線變粗,需要采取措施降低噪聲;如果基線粗是因?yàn)樵肼暣笠?,要解決這個(gè)問(wèn)題就要看你的檢測(cè)器和工作站的指標(biāo)以及壓力是否平穩(wěn),然后可以通過(guò)脫氣等一系列的方法降低噪聲。
2、調(diào)節(jié)你的電腦分辨率,如果分辨率太低,調(diào)節(jié)一下就會(huì)見(jiàn)效。
3、還可能是采樣頻率高。將檢測(cè)器的狹縫寬度設(shè)置得小一點(diǎn),可能很快就能解決問(wèn)題。
4、如果是工作站得坐標(biāo)太大,調(diào)節(jié)一下,將坐標(biāo)設(shè)置小點(diǎn)就可能解決問(wèn)題。
5、有可能是光源用久了,能量不足引起,這樣的話應(yīng)該調(diào)換光源。
6、電源的紋波太大,也會(huì)引起基線變粗,這個(gè)問(wèn)題很多科技工作者不大注意沒(méi),所以還應(yīng)該仔細(xì)檢查光源的電路。
7、光路通道有污染或流動(dòng)池污染。如果這樣,就要清洗光路通道中的光學(xué)組件,或者清洗流動(dòng)池。
8、可流動(dòng)相中有氣泡,應(yīng)認(rèn)真排氣。
9、如果確定不是色譜系統(tǒng)的原因,就可能是電源接地的問(wèn)題,將檢測(cè)器外殼、接收裝置外殼和電腦的外殼等用電線連起來(lái),認(rèn)真的接地。