高效液相色譜儀色譜柱在色譜分析系統(tǒng)中主要起著分離檢測物質(zhì)的作用，如同色譜系統(tǒng)的心臟，同時也是易損耗品。什么情況下會導致液相色譜柱柱效降低甚至“失效”。
1、篩板堵塞
色譜柱入口篩板堵塞是常見的問題之一，會導致柱壓升高、色譜峰拖尾、塔板數(shù)降低等問題。通常分析樣品中微粒雜質(zhì)最右可能堵塞色譜柱入口，因此分析時，需要先過濾或者離心，乳濁或渾濁樣品應以0.25?m濾膜處理，也可用針頭過濾器過濾。進樣器與泵密封墊的磨損也會帶入微粒，在進樣閥與色譜柱之間使用0.25?m或0.45?m的在線過濾器，通常可以避免這類問題
2、強保留樣品組分
強吸附性的樣品組分吸附在柱頭填料上，能嚴重地影響色譜柱壽命。像生物組織或體液的提取物、天然產(chǎn)物等復雜樣品，極易造成柱頭的污染。相對較純的樣品，一般不會出現(xiàn)這一問題。色譜柱應用中，色譜峰嚴重拖尾或分裂往往是強保留污染物在柱頭吸附的體現(xiàn)。
3、色譜柱裝填不良
裝填不良的色譜柱，在短時間應用后，填充床的壓縮通常使柱頭處產(chǎn)生塌陷，導致柱效突然降低。色譜柱的初始評價指標，如塔板數(shù)、不對稱因子等往往不能很好地表征色譜柱床層的穩(wěn)定性，這種情緒只能在實際應用中發(fā)現(xiàn)。
4、壓力因素
液相色譜儀色譜柱使用過程中的驟然壓力波動、機械撞擊或溫度驟然變化都會對色譜柱床層產(chǎn)生影響，導致峰形變差和柱效降低。進樣過程中，進樣閥轉動太慢可引起壓力波動，使色譜柱床產(chǎn)生裂隙，在柱切換時也存在同樣的問題。使用填充良好的色譜柱，在較低柱壓下操作，可大大減少由壓力波動造成的色譜柱損壞。
有些色譜柱廠家建議在使用液相色譜柱時加入保護柱，保護柱是收集、阻斷來自進樣器的機械和化學雜質(zhì)，以保護和延長分析柱的使用壽命。
柱子的再生
色譜柱屬于色譜分析的常用消耗品，它是有壽命的；但它壽命的長短與我們的樣品處理程度、有無加保護柱以及清洗是否恰當和徹底緊密相關！當柱子在使用一段時間以后，它的柱壓可能升高，柱效可能降低，這時如果我們對柱子進行再生，它的壽命也許會得到一定的延長。
柱子使用
1、首先要確認您所要分析的樣品流動相的pH范圍是否在您的柱子的pH范圍之內(nèi)，以免損壞柱子硅膠！
2、接下來就是用你做樣品的流動相去平衡柱子，如果您的流動相中含有緩沖鹽溶液，在平衡柱子之前務必要先用5％的甲醇(乙腈)/水去過渡10倍柱體積(150x4.6mm柱子約為30ml，250x4.6mm柱子約為45ml；下同)以上，再用帶鹽的流動相去平衡柱子足夠的時間(直到基線非常平穩(wěn)為止)，之后方可進樣分析。
3、無論您分析何種樣品，都會由于各種原因樣品中總有部分雜質(zhì)，因此建議您在進樣前在柱子前端加接保護柱以保護您那昂貴的分析柱，或者用0.2um或 0.45um針頭過濾器過濾樣品后方進樣分析！
高效液固色譜儀是利用樣品各組分在固定相和流動相中吸附－解吸作用的差異，使各組分在作相對運動的兩相中反復多次受到吸附－解吸作用而達到相互分離?！ ≈饕愋停骸 ∫汗涛缴V 1.1分離原理液固色譜是基于各組分吸附能力的差異進行混合物分離的，其固定相是固體吸附劑?！ ?.2固定相；吸附色譜固定相可以分為極性和非極性兩大類?！ ?.3流動相；流動相要求： 1.3.1選用的溶劑應當與固定相互不相溶，并能保持色譜柱的穩(wěn)定性 1.3.2選用的溶劑應有高純度，以防所含微量雜質(zhì)在柱中積累，引起柱性能的改變?！ ?.3.3選用的溶劑性能應與所使用的檢測器相匹配，如果使用紫外吸收檢測器，就不能選用在檢測波長下有紫外吸收的溶劑；若使用示差折光檢測器，就不能用梯度洗脫?！ ?.3.4選用的溶劑應對樣品有足夠的溶解能力，以提高測定的靈敏度?！ ?.3.5選用的溶劑應具有低的黏度和適當?shù)偷姆悬c?！ ?.3.6應盡量避免使用具有顯著毒性的溶劑，以保證工作人員的安全 1.4應用：液固色譜是以表面吸附性能力為依據(jù)的，所以它常用于分離極性不同低的化合物，也能分離那些具有相同極性基團，但數(shù)量不同的樣品?！ ∫阂悍峙渖V 1.1分離原理；分配色譜法的原理與液液萃取相同，都是分配定律?！ ?.2固定相；分配色譜固定相由兩部分組成，一部分是惰性載體，另一部分是涂漬在惰性載體上的固定液?！ ?.3流動相；分內(nèi)色譜中，要求流動相盡可能不與固定液互溶 1.4應用；既能分離極性化合物，又能分離非極性化合物。由于不同極性鍵合固定相的出現(xiàn)，分離的選擇性可得到很好的控制?！ ℃I合相色譜 1.1分離原理 1.1.1正鍵合相色譜分離遠離：使用的是極性鍵和固定性，溶質(zhì)在此類固定相上的分離機理屬于分配色譜?！ ?.1.2反鍵合相色譜分離原理：使用的是極性較小的鍵合固定相，其分離機理可用疏溶劑作用理論來解釋。 1.2固定相；按極性大小可分為非極性、弱極性、極性化學鍵合固定相三種?！ ?.3流動相 1.3.1正鍵合相色譜中，采用和反相液液分配色譜相似的流動相，流動相的主體成分為己烷或庚烷?！ ?.3.2反相鍵合相色譜中，流動相采用和反相液液分配色譜相似的流動相，主題為水。 1.4應用 1.4.1正鍵合相色譜法的應用：多用于分離各類極性化合物如染料、炸藥、多巴胺、氨基酸等； 1.4.2反鍵合相色譜法的應用：由于操作簡單，穩(wěn)定性和重復性好，該方法已成為一種通用型液相色譜分析方法。在生物化學、醫(yī)藥研究、食品分析和環(huán)境污染分析等多個領域有了很大的應用和發(fā)展?！ ∧z色譜 凝膠色譜又稱分子排阻色譜，它是按照分子尺寸大小順序進行分離的一種色譜方法。凝膠色譜法的固定相凝膠是一種多孔性的聚合材料，有一定的形狀和穩(wěn)定性。根據(jù)所用流動相的不同，凝膠色譜法可以分為兩類：即用水溶劑做流動相的凝膠過濾色譜法（GFC）與用有機溶劑如四氫呋喃做流動相的凝膠滲透色譜法（GPC）。
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