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薄層色譜的操作方法簡介 薄層色譜操作規(guī)程

時間:2020-05-16    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
  【儀器網(wǎng) 使用手冊】薄層色譜掃描儀是可以對斑點進行掃描的分光光度計,通常用可見光或紫外光作光源,線性掃描或鋸齒掃描薄層板展開后的斑點,該斑點就吸收該組分特征波長的單色光,剩余的單色光經(jīng)透射或反射或發(fā)射熒光,由檢測器積分起來獲得這塊斑點面積的待測物質(zhì)含量。儀器適用于化工、醫(yī)藥、臨床、農(nóng)業(yè)、食品、毒理等領(lǐng)域的各種化合物的分離、精制、定性鑒別、雜質(zhì)檢查和含量測定。
 
  操作方法:
 
  1、薄層板制備:除另有規(guī)定外,將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合,去除表面的氣泡后倒入涂布器中,在玻板上平穩(wěn)地移動涂布器進行涂布(厚度為0.2~0.3mm)取下涂好薄層的玻板,置水平臺上于室溫下晾干,后在110℃烘30分鐘,即置有干燥劑的干燥箱中備用。
 
  2、點樣:除另有規(guī)定外,用點樣器點樣于薄層板上,一般為圓點,點樣基線距底邊2.0cm,樣點直徑及點間距離同紙色譜法,點間距離可視斑點擴散情況應以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。
 
  3、展開展開缸如需預先用展開劑飽和,可在缸中加入足夠量的展開劑,并在壁上貼二條與缸一樣高、寬的濾紙條,一端浸入展開劑中,密封缸頂?shù)纳w,使系統(tǒng)平衡或按正文規(guī)定操作。將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5-1.0cm密封缸蓋,待展開至規(guī)定距離取出薄層板,晾干后按各品種項下的規(guī)定檢測。
 
  4、如需用薄層掃描儀對色譜斑點作掃描檢出,或直接在薄層上對色譜斑點作掃描定量,則可用薄層掃描法。薄層掃描的方法,除規(guī)定外可根據(jù)各種薄層掃描儀的結(jié)構(gòu)特點及使用說明,
 
  結(jié)合具體情況,選擇吸收法或熒光法,用雙波長或單波長掃描。由于影響薄層掃描結(jié)果的因素很多,故應在保證供試品的斑點在一定濃度范圍內(nèi)呈線性的情況下,將供試品與對照品在同一塊薄層上展開后掃描,進行比較并計算定量,以減少誤差。各種供試品,只有得到分離度和重現(xiàn)性好的薄層色譜,才能獲得準確的結(jié)果。

薄層色譜儀的適用

    薄層色譜又叫薄板層析,是色譜法中的一種,是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實驗技術(shù),屬固—液吸附色譜;

    它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點,一方面適用于少量樣品(幾到幾微克,甚至0.01微克)的分離;另一方面在制作薄層板時,把吸附層加厚加大;

    因此,又可用來精制樣品,此法特別適用于揮發(fā)性較小或較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的質(zhì)。

    此外,薄層色譜法還可用來跟蹤有機反應及進行柱色譜之前的一種“預試”。

    薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板(10×3cm左右)上均勻的涂一層吸附劑或支持劑,帶干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細管滴加于離薄層板一端約1cm處的起點線上;

    涼干或吹干后置薄層板于盛有展開劑的展開槽內(nèi),浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離頂端約1cm附近時;

    將色譜板取出,干燥后噴以顯色劑,或在紫外燈下顯色。

    薄層色譜(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示,又稱薄層層析,屬于固-液吸附色譜。

    是近年來發(fā)展起來的一種微量、快速而簡單的色譜法,它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點。

    一方面適用于小量樣品(幾到幾十微克,甚至0.01μg)的分離;

    另一方面若在制作薄層板時,把吸附層加厚,將樣品點成一條線,則可分離多達500mg的樣品。

    因此又可用來精制樣品。故此法特別適用于揮發(fā)性較小或在較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物資。

    此外,在進行化學反應時,常利用薄層色譜觀察原料斑點的逐步消失來判斷反應是否完成。

標簽: 薄層色譜儀
薄層色譜儀標簽: 薄層色譜儀的適用_薄層色譜儀組合標題:

薄層色譜法在中藥復方制劑中的應用

  薄層色譜法又簡寫為TLC,常用于中藥成方制劑中有效成分的定性鑒別。由于該方法鑒別專屬性強,使用設(shè)備簡單,易于操作,故應用廣泛,在目前的藥品質(zhì)量標準定性鑒別中(如中國藥典和國家食品藥品監(jiān)督管理局標準),已大大地超過了顯微鑒別、理化鑒別和光譜鑒別。

  下面對薄層色譜法在中藥復方制劑中的應用做一些分析:

  一、醫(yī)院制劑由于其自身的特殊性,如只能在本院銷售,生產(chǎn)和檢驗設(shè)備簡陋,生產(chǎn)量小,劑型和品種相對較多,生產(chǎn)中常以水煎煮為主。故在選擇處方中的薄層定性藥材時,應以選擇水溶性成分為先。如芍藥苷、梔子苷、黃芪甲苷、龍膽苦苷、人參皂苷等苷類或綠原酸、阿魏酸等易溶于水的有機酸類成分。

  二、仔細分析處方。選擇方中薄層定性的藥材,應先選取以粉碎入藥的藥材。因為這部分藥材中的有效成分一般沒被破壞,特別是一些含有揮發(fā)性成分的藥材,如薄荷、香附、荊芥等,在薄層層析中以藥材作為對照品,很容易鑒別出來。

  三、對處方中含有多糖類或淀粉質(zhì)較多的藥材,如麥冬、北沙參、黨參等,可采取先酸解后用有機溶劑提取的方法。經(jīng)這樣處理后,薄層層析斑點一般都比較清晰,藥檢所復核時往往容易通過。

  四、在使用展開劑時,在同等條件下,應選擇無毒或毒性較小的有機溶劑。如選用環(huán)己烷而不選用正己烷,選用甲苯而不選用苯。以減少有機溶劑毒性對人體的侵害。

  五、對樣品的取樣量不宜太大。如果取樣量太大,點樣時往往因樣品的濃度太高而造成點樣困難,展開時斑點又不易分離而使薄層圖譜不清晰。

  六、對中藥復方制劑的液體劑型,提取分離方法應溶劑法,用適宜的有機溶劑提取。如是提取水溶性成分,應考慮對樣品進行脫脂處理。對酒劑、酊劑或搽劑中含有的樣品,應先在水浴上蒸去后再作下一步的處理。如液體劑型不宜用有機溶劑提取,也可采用先將藥液置水浴上蒸干(或加入適量硅藻土分散),再用有機溶劑提取的方法。

  七、對中藥復方制劑的固體劑型,提取分離方法可選用超聲提取法、回流提取法或溶劑提取法(應先將樣品加定量水溶解)等。超聲提取方法簡單,所需時間短,目前使用較多,應,但在使用過程中應注意一個問題,如提取時使用的有機溶劑是,超聲處理時間應控制在10~20min以內(nèi),超聲時容器不能密閉太緊,以免瓶塞沖出或全部揮發(fā),特別是在氣溫較高的夏天,尤其要注意。

  八、對中藥復方制劑的外用劑型,如軟膏劑、黑膏藥、貼膏一類,在樣品處理時,應首先考慮去掉賦形劑后再對樣品進行處理。如用凡士林制成的軟膏,可用有機溶劑除去凡士林。

  九、樣品經(jīng)薄層展開后,觀察層析情況,筆者認為應多選擇在日光下觀察為主。原因為大多數(shù)醫(yī)院制劑室未建立暗室,在紫外光燈下拍照有困難。

  十、對樣品中某些成分的提取分離,可先采取相類似的方法,然后再選用不同的定容溶液和展開劑,即可達到目的。如同時提取某些皂苷類、苷類、有機酸類等。

  十一、在中藥復方制劑中,往往藥味較多,化學成分較為復雜,給單一成分的分離造成一定困難。為了達到分離的目的,在具體操作中,可以考慮使用高速離心,柱層析、氧化鎂凈化、水或氨試液洗滌等多種操作方法。但在使用這些方法時,必須注意不能把應提取的有效成分棄掉了。

  十二、在用碘蒸氣或氨蒸氣對薄層板顯時,所加的量不宜過多,使用的容器必須密閉,操作人不得離開,必須等到薄層斑點顯度適宜時,才可取出。

標簽: 薄層色譜
薄層色譜 薄層色譜法在中藥復方制劑中的應用_薄層色譜

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