1、1934年,Moldavan使懸浮的紅細胞從一個毛細玻璃管中流過,每個通過的細胞可被一個光電裝置記錄下來。這就是流式細胞儀的雛形?! ?、1965年,Kamentsky用紫外吸收和可見光散射兩個參數(shù)同時測量未染色細胞,給出細胞中核酸的含量和細胞大小。奠定了多參數(shù)流式細胞測量的基礎。 3、1967年,Van Dilla和Los Alamos采用了層流流動室和氬激光器,開發(fā)出了液流束、照明光軸、檢測系統(tǒng)三者相互垂直的流式細胞儀。這成為目前各種流式細胞儀的基礎?! ?、1969年,F(xiàn)ulwyler利用靜電墨水噴射液滴偏轉(zhuǎn)技術,建立了流式細胞分選術。Ehrlich和Wheeless利用飛點掃描技術和縫掃描技術使零分辨率的流式細胞儀變成了低分辨率的流式細胞儀?! ?、20世紀70年代,隨著Kohler和Milstein成功提出了單克隆抗體技術和熒光標記技術,為特異研究和分析細胞奠定了良好的基礎?! ?、1973年,美國BD公司和美國斯坦福大學合作,研制開發(fā)并生產(chǎn)了世界上第一臺商用流式細胞儀FACS I?! ?、20世紀80年代,流式細胞儀的數(shù)據(jù)采集、存儲、顯示、分析日趨完善,隨著樣品制備方法的增加,新的熒光染料和細胞標記物的出現(xiàn),使流式細胞儀的應用范圍逐漸擴大?! ?、20世紀90年代,與之配套的標本制備儀和自動進樣器的問世,以及適合臨床應用的單克隆抗體的增加,使流式細胞儀逐漸從科研單位進入醫(yī)院的中心實驗室和檢驗科,成為現(xiàn)代化的臨床檢驗儀器的一部分。
1、DNA倍體分析 DNA分析是流式細胞儀最初且是現(xiàn)在應用廣泛檢測項目。由于惡性細胞DNA含量通常與正常細胞不同,存在異倍體細胞,所以現(xiàn)有很研究評價異倍體細胞與腫瘤惡性度及其預后的關系。DNA含量檢測還可提供細胞周期方面的信息,這在細胞生物學中運用很廣泛。特別地,它可表示出細胞毒性藥物對細胞作用過程。這些DNA檢測還可與細胞表面標志物標記同時進行,這樣在細胞混合培養(yǎng)中,可通常追蹤表達特異標志物的細胞顯示其生長周期情況。所有方法都是基于染料能與核酸起特異的化學反應并發(fā)射出熒光,常用的染料為PI,DAPI?! ≡谠擃I域Partec公司的 CyFlow PA是一枝獨秀?! ?、細胞生存能力實驗 使用Heochest 33342染料與DNA特異性結(jié)合,后因細胞活力不同染料的結(jié)合程度也各異,故可評估細胞的活性度?! ?、計數(shù)外周血中檢測網(wǎng)織紅細胞 使用TO染料能夠特異性地與RNA結(jié)合,結(jié)合系數(shù)高達3000,故具有很好的性價比。 4、外周血、骨髓采集物中CD34陽性干細胞計數(shù),臨床上用于骨髓移植前干細胞數(shù)理的測定。使用標準ISHAG方案,需要DNA或其他核染料占用FITC通道,PE標記CD34抗體,PE-CY5標記CD45抗體?! ?、交叉淋巴細胞、粒細胞毒實驗 檢測識別供體血清中免疫球蛋白與受體粒細胞之間是否存在反應有著重要臨床意義,因為這種反應會導致移植后發(fā)熱、移植后肺損傷及免疫性粒細胞缺乏癥。流式細胞儀可檢測全血樣本與血清孵育后粒細胞上結(jié)合的人免疫球蛋白。FITC標記人免疫球蛋白抗體、PE標記粒細胞表面標志物、PE-CY5標記HLA抗體?! ?、血小板自身抗體檢測 血小板自身抗體識別人血小板抗原,會引起各種臨床相關癥狀,如新生兒自免性血小板減少癥、輸血后紫癜、難治性血小板減少。流式細胞可快速準確地檢測血小板自身抗體。FITC標記抗人免疫球蛋白抗體、PE標記識別血小板抗體。 7、移植交叉配型 原細胞毒實驗,主要用于避免移植物超急性排拆反應。流式細胞儀用于監(jiān)測T或B細胞是否受到受體血清中免疫球蛋白攻擊,作為HLA配型前的預實驗。流式細胞儀因其高精確性已成為該領域內(nèi)的金標準。FITC標記抗人免疫球蛋白抗體、PE標記識別T細胞CD3或B細胞CD29抗體?! ?、檢測細胞經(jīng)抗原或細胞有絲分裂刺激后活化效應淋巴細胞早期活化指標CD69可用來檢測免疫治療效果。流式細胞使用三色分析可監(jiān)測淋巴細胞各亞群活化情況:FITC標記的CD3抗體、PE標記的CD8抗體、PE-CY5標記的CD69抗體?! ?、細胞增殖狀態(tài)檢測 核增殖抗PCNA、Ki67、BrdUrd用于衡量細胞增殖分裂狀況,在評估腫瘤預后有重要意義。為些標志物的檢測一般同細胞表面標志物同時檢測。FITC標記PCNA或Ki67或BrdUrd,PE或(并)PE-CY5標記細胞表面標志物?! ?0、染色體分析 流式細胞儀染色分析運用兩種特異性染料:Hoechest33258與核苷酸AT結(jié)合;Chromomycin A3與GC相結(jié)合。從而在雙參數(shù)坐標上根據(jù)染色體ATCG含量的不同識別各種染色體。平時進行的染色體分析耗時且需要操作者極具經(jīng)驗,而用流式細胞儀時可快速地識別出異常染色體,如加配分選系統(tǒng)可將這些異常染色體分選出來作進一步分析。
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