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Waters2695液相色譜儀HPLC操作規(guī)程 液相色譜操作規(guī)程

時(shí)間：2020-05-16    來(lái)源：儀多多儀器網(wǎng)    作者：儀多多商城     
　　[目的]
 
　　規(guī)范Waters液相色譜系統(tǒng)的使用和維護(hù)。
 
　　[范圍]
 
　　本規(guī)程適用于Waters液相色譜系統(tǒng)的使用和維護(hù)。
 
　　[職責(zé)]
 
　　質(zhì)檢室儀器分析員負(fù)責(zé)Waters液相色譜系統(tǒng)的日常使用和維護(hù)。
 
　　[系統(tǒng)組成]
 
　　本系統(tǒng)由Waters 600E多溶劑輸送系統(tǒng)(有梯度控制器的高壓輸液泵)、Waters在線(xiàn)脫氣機(jī)、Rheodyne 7725i手動(dòng)進(jìn)樣閥、Waters 2487雙通道紫外檢測(cè)器、Millennium32色譜工作站/電腦等組成，另外還包括打印機(jī)、斷電保護(hù)器和通風(fēng)柜等輔助設(shè)備。
 
　　[開(kāi)機(jī)程序]
 
　　1. 狀態(tài)檢查：
 
　　1)檢查儀器外觀是否完好
 
　　2)檢查各種線(xiàn)纜連接是否穩(wěn)固，外表有無(wú)損傷痕跡
 
　　3)確認(rèn)環(huán)境溫度在15至35℃之間
 
　　4)相對(duì)濕度在20%至80%之間
 
　　3. 接線(xiàn)要求：
 
　　1)液相色譜主機(jī)電源
 
　　2)連接電腦主機(jī)和顯示器電源
 
　　4. 開(kāi)機(jī)步驟：
 
　　1)打開(kāi)電腦電源，進(jìn)入windows系統(tǒng)
 
　　2)打開(kāi)液相色譜電源，儀器開(kāi)始自檢(約5～6min)，待儀器操作面板上出現(xiàn)“Idle”字樣表示自檢成功，儀器進(jìn)入待命狀態(tài)。
 
　　[測(cè)試步驟]
 
　　1. 進(jìn)入軟件
 
　　1)雙擊電腦桌面上的Empower快捷圖標(biāo)，出現(xiàn)Empower登陸窗口。輸入用戶(hù)名與密碼，默認(rèn)賬號(hào)為“system”，密碼為“manager”，點(diǎn)擊“OK”進(jìn)入Empower工作站。
 
　　2)選擇“運(yùn)行樣品”界面，點(diǎn)擊“確定”,然后選擇待選定的操作項(xiàng)目以及色譜系統(tǒng)
 
　　2 編輯儀器方法和方法組
 
　　1)在“運(yùn)行樣品”界面中，監(jiān)視區(qū)單擊方法組編輯向?qū)А?br /> 
　　2)選擇新建按鈕，彈出儀器方法編輯器。
 
　　3)通用編輯頁(yè)面中，可設(shè)置單次輸送體積，查看脫氣選項(xiàng)，確認(rèn)設(shè)置正確，選擇等度或者梯度，總流量以及流動(dòng)相配比等選項(xiàng)。
 
　　4)單擊2475圖標(biāo)，彈出2475編輯界面，在波長(zhǎng)模式中選擇相應(yīng)的波長(zhǎng)模式，單波長(zhǎng)或者雙波長(zhǎng)，輸入所需的波長(zhǎng)，選擇相應(yīng)的采樣速率，一般為2點(diǎn)/秒。
 
　　5)點(diǎn)擊“文件”，選擇“另存為”，輸入儀器方法名稱(chēng)，點(diǎn)擊“保存”，退出。
 
　　6)在被選項(xiàng)中選擇所需的儀器方法名稱(chēng)，點(diǎn)擊“下一步”。
 
　　7)在下拉菜單中選擇所需的處理方法和報(bào)告方法(如果沒(méi)有合適的方法選擇"無(wú)處理"、"無(wú)報(bào)告")，點(diǎn)擊“下一步”。
 
　　8)輸入方法組名稱(chēng)，單擊"完成"。
 
　　3 運(yùn)行方法進(jìn)樣
 
　　1)在“運(yùn)行樣品”界面中，選擇相應(yīng)的儀器方法，點(diǎn)擊“監(jiān)視器”，在監(jiān)視窗口監(jiān)視基線(xiàn)至系統(tǒng)平衡，停止系統(tǒng)監(jiān)視狀態(tài)，點(diǎn)擊停止按鈕。單進(jìn)樣，點(diǎn)擊參數(shù)編輯快捷方式進(jìn)入定義單進(jìn)樣參數(shù)編輯界面，輸入樣品名、功能、方法組等參數(shù)。點(diǎn)擊“進(jìn)樣”。
 
　　2)建立樣品組和樣品組方法
 
　　選擇“樣品組”任務(wù)欄，進(jìn)入樣品列表，依次設(shè)置以下內(nèi)容：樣品瓶號(hào)、樣品名稱(chēng)、樣品類(lèi)型、進(jìn)樣次數(shù)、進(jìn)樣體積、運(yùn)行時(shí)間、方法組、、下一進(jìn)樣延遲時(shí)間等，點(diǎn)擊“運(yùn)行”，方法組開(kāi)始進(jìn)樣。
 
　　[更換溶劑]
 
　　1.打開(kāi)600E泵后，轉(zhuǎn)動(dòng)進(jìn)口集合管閥手柄(以下簡(jiǎn)稱(chēng)手柄)至RUN位置；
 
　　2 .將一塑料燒杯放在參照閥出口管下以收集分流的溶劑，向右打開(kāi)參照閥(斷開(kāi)柱和進(jìn)樣器)；
 
　　3. 按[Direct]鍵使其顯示直接控制屏幕，設(shè)流速為1ml/min(梯度配比閥在0ml/min時(shí)不工作)；
 
　　4. 選擇欲使用的某一溶劑通道，設(shè)其比例為100%，其它為0%；
 
　　5. 將輸液管從原有溶劑瓶中取出，放入一干凈的空瓶中；
 
　　6. 逆時(shí)鐘轉(zhuǎn)動(dòng)手柄至DRAW位置，用啟動(dòng)注射器從進(jìn)口集合管閥的接口抽出約2ml溶劑；
 
　　7. 再將輸液管放入新溶劑瓶?jī)?nèi)，繼續(xù)抽吸直到新溶劑出來(lái)并無(wú)氣泡為止；
 
　　8. 轉(zhuǎn)動(dòng)手柄至RUN位置，將啟動(dòng)注射器取下并排掉筒內(nèi)的溶劑。
 
　　9. 重復(fù)5.2.2.4.~5.2.2.8.直至所有即將使用的溶劑更換完畢。
 
　　[排氣泡]
 
　　1. 打開(kāi)參照閥，換流動(dòng)相為100%超純水，設(shè)流速為10ml/min(注意：確認(rèn)參照閥是打開(kāi)的，否則可能損壞安裝好的柱)；
 
　　2. 轉(zhuǎn)動(dòng)進(jìn)口集合管閥手柄至DRAW位置，用啟動(dòng)注射器抽出約10ml水；
 
　　3. 順時(shí)鐘轉(zhuǎn)動(dòng)手柄至INJ位置，緩慢用力使水通過(guò)泵頭從參照閥出口管排出(注意不要將氣泡注入泵中)；
 
　　4. 按[Stop flow]屏幕鍵停泵，關(guān)上參照閥。
 
　　5. 如按以上方法不能排盡氣泡，從柱入口處拆下泵出口管，用塑料管連接至塑料燒杯中，設(shè)流速為10ml/min，沖洗2~5min(或更長(zhǎng)時(shí)間)后停泵，重新接上柱。
 
　　[平衡系統(tǒng)（分兩種情況進(jìn)行）]
 
　　1. 等度模式
 
　　1.1. 每次以0.1ml/min的增量加大流速至1ml/min，以超純水沖洗系統(tǒng)10min。
 
　　1.2. 檢查管路連接、柱接口及泵頭處是否漏液，如漏液應(yīng)予以排除。
 
　　1.3. 觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動(dòng)應(yīng)在平均值的5~10%以?xún)?nèi)。如超出此范圍，可初步判斷為柱前管路仍有氣泡，重復(fù)5.2.3.下的步驟。
 
　　1.4. 壓力波動(dòng)平穩(wěn)后，換檢驗(yàn)方法規(guī)定的流動(dòng)相比例沖洗系統(tǒng)。在檢查基線(xiàn)穩(wěn)定性前，讓zui少5~6倍柱體積的流動(dòng)相通過(guò)系統(tǒng)。
 
　　1.5. 在QuickSet窗口下的Instrument Method檔內(nèi)選擇所需的儀器方法，按「Monitor」(此后泵由軟件控制)，觀察基線(xiàn)和壓力變化。如果沖洗至基線(xiàn)漂 移<10-3Au/min，噪聲為10-4Au數(shù)量級(jí)，且壓力平穩(wěn)時(shí)，可認(rèn)為系統(tǒng)已達(dá)到平衡狀態(tài)，可以進(jìn)樣。5.3.1.6. 按「Abort」圖標(biāo)(左上第五個(gè))，停止監(jiān)視基線(xiàn)。
 
　　2. 梯度模式
 
　　2.1. 按檢驗(yàn)方法規(guī)定的條件沖洗平衡系統(tǒng)，并注意壓力波動(dòng)變化和排氣泡。
 
　　2.2. 在進(jìn)樣前運(yùn)行1~2次空白梯度。
 
　　[進(jìn)樣]
 
　　1. 在QuickSet窗口內(nèi)左下部選〈Single〉標(biāo)簽，在Sample Name檔內(nèi)填寫(xiě)試樣名稱(chēng)；在Function檔內(nèi)選擇試樣類(lèi)型(標(biāo)準(zhǔn)選“Inject Standards”；樣品選“Inject Samples”)；在Method Set檔內(nèi)選擇所需的方法組；在Injection Volume檔內(nèi)輸入進(jìn)樣體積；在Run Time檔內(nèi)輸入記錄時(shí)間。
 
　　2. 用針頭濾器過(guò)濾試樣溶液(注射液可不必過(guò)濾)，用試樣溶液清洗注射器，并排除氣泡后抽取適量。如按部分裝液法，用微量注射器定容進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量應(yīng)不大于定量環(huán)體積的50%，并要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同；5.4.2.2. 如按完全裝液法，用定量環(huán)定容進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量應(yīng)不小于定量環(huán)體積的3倍(5~10倍準(zhǔn)確性更佳)。
 
　　3. 按〈Single〉標(biāo)簽內(nèi)右邊的進(jìn)樣(Inject)按鈕，等待窗口底部狀態(tài)檔內(nèi)顯示“Waiting”后，方可進(jìn)樣。
 
　　4. 將進(jìn)樣閥手柄轉(zhuǎn)動(dòng)至Load位置，將注射器針完全插入進(jìn)樣閥入口中，平穩(wěn)地注入試樣溶液，除另有規(guī)定外，讓注射器留在進(jìn)樣閥上，將進(jìn)樣閥手柄快速轉(zhuǎn)動(dòng)至Inject位置，系統(tǒng)將自動(dòng)運(yùn)行，采集數(shù)據(jù)并記錄圖譜。
 
　　5. 讓進(jìn)樣閥手柄保持在Inject位置，到下次進(jìn)樣前1~2min切換回Load位置，將注射器從進(jìn)樣閥中拔出。
 
　　6. 先用水再用試樣溶液清洗注射器后，按以上程序繼續(xù)進(jìn)樣，直至完成。
 
　　[數(shù)據(jù)處理（外標(biāo)法）和打印]
 
　　1. 右擊系統(tǒng)主界面下的『Browse Project』圖標(biāo)，選擇相應(yīng)的項(xiàng)目，按「OK」進(jìn)入Project窗口，選〈Channels〉標(biāo)簽。
 
　　2. 建立處理方法　選擇一個(gè)待積分的標(biāo)準(zhǔn)，右擊后選“Review”進(jìn)入Review窗口。按「Processing Method Wizard」圖標(biāo)(左邊*個(gè))進(jìn)入New Processing Method向?qū)Т翱?，按「OK」。
 
　　2.1. 劃入一個(gè)感興趣的zui窄的峰，按「Next>」；
 
　　2.2. 劃入一段包含噪聲的基線(xiàn)，按「Next>」；
 
　　2.3. 劃入一段要積分的區(qū)間，按「Next>」；
 
　　2.4. 根據(jù)情況選擇zui小峰面積和zui小峰高，按「Next>」、「Next>」；
 
　　2.5. 在Name檔內(nèi)輸入各組分峰的名稱(chēng)，按「Next>」、「Next>」；
 
　　2.6. 在Method Name檔內(nèi)填寫(xiě)方法名稱(chēng)，按「Finish」。退出Review窗口。
 
　　3. 修改標(biāo)準(zhǔn)　選中所有標(biāo)準(zhǔn)，右擊后選“Alter Sample”進(jìn)入Alter Sample窗口。
 
　　3.1. 在Sample Type檔內(nèi)將Unknown改成Standard；
 
　　3.2. 按「Amount」圖標(biāo)(左上第六個(gè))進(jìn)入Component Editor窗口；
 
　　3.3. 按「Copy from Process Method」圖標(biāo)(左上第五個(gè))，選擇剛建立的處理方法，按「Open」，在Value和Units檔內(nèi)分別輸入標(biāo)準(zhǔn)所含各組分的數(shù)值和單位，完成后按「OK」回到Alter Sample窗口；
 
　　3.4. 按「Save」圖標(biāo)存盤(pán)，退出Alter Sample窗口。
 
　　4. 積分　先選中所有標(biāo)準(zhǔn)，再選中所有未知樣品，右擊后選“Process”進(jìn)入Background Processing & Reporting窗口，選Use specified processing methods，在右邊檔內(nèi)選擇剛建立的處理方法，按「OK」。
 
　　5. 打印　在Project窗口下選〈Results〉標(biāo)簽。
 
　　5.1. 選中要打印的標(biāo)準(zhǔn)/樣品，右擊后選“Preview”進(jìn)入Open Report Method窗口，選合適的打印方法，按「OK」進(jìn)入Report Publisher (Preview)窗口，預(yù)覽打印的結(jié)果。按打印(Print)圖標(biāo)(左上第二個(gè))即可打印結(jié)果。
 
　　5.2. 按「Close」可進(jìn)入Report Publisher窗口對(duì)報(bào)告方法進(jìn)行修改，完成后按「Print」圖標(biāo)(右數(shù)第二個(gè))即可打印結(jié)果。
 
　　6. 數(shù)據(jù)處理完成后，關(guān)閉所有窗口，在主界面下按「Logout」退出系統(tǒng)，關(guān)閉Millennium32軟件，再依次關(guān)閉電腦主機(jī)、顯示器、打印機(jī)。
 
　　7. 清洗系統(tǒng)和關(guān)機(jī)
 
　　7.1. 數(shù)據(jù)采集完畢后，關(guān)閉檢測(cè)器，繼續(xù)以工作流動(dòng)相沖洗10min后，換水沖洗。
 
　　[關(guān)機(jī)程序]
 
　　1)關(guān)機(jī)前應(yīng)用適當(dāng)比例的有機(jī)相和水相沖洗柱子
 
　　2)關(guān)閉儀器電源
 
　　3)關(guān)閉電腦電源
 
　　[維護(hù)保養(yǎng)程序]
 
　　1)定期清潔，保障環(huán)境和儀器室內(nèi)衛(wèi)生條件，防塵。
 
　　2)使用完畢后用防塵布遮蓋儀器如連續(xù)3個(gè)月未使用儀器，將儀器通電1個(gè)小時(shí)后再關(guān)閉，除掉儀器內(nèi)部濕氣。
 
　?。圩⒁馐马?xiàng)］
 
　　1.使用儀器前必須仔細(xì)閱讀儀器使用說(shuō)明書(shū)。
 
　　2.按儀器使用要求準(zhǔn)備測(cè)試樣品，不得測(cè)試不符合要求的樣品。
 
　　3.小心操作，防止樣品污染和腐蝕儀器。
 
　　4.有機(jī)溶劑有害健康，各溶劑瓶口應(yīng)封嚴(yán)。
 
　　5.儀器使用后按操作程序，切斷電源，清理擦拭儀器，蓋上儀器罩。
 
　　6.在操作時(shí)發(fā)生故障應(yīng)停止使用，并及時(shí)通知管理人員。

液相色譜柱柱壓升高的原因

　　造成柱壓升高的原因很多。一般是由于柱床內(nèi)產(chǎn)生了異常的占位性物體，造成流體阻力加大所引起的。

　　1、流動(dòng)相過(guò)濾不良

　　因機(jī)械性雜質(zhì)堵塞進(jìn)口濾片，導(dǎo)致壓力升高。這往往是由于流動(dòng)相沒(méi)有過(guò)濾，或雖已過(guò)濾但濾膜孔徑過(guò)大或?yàn)V片損壞，使固體雜質(zhì)滯留于濾板上所造成的。濕度傳感器探頭,不銹鋼電熱管PT100傳感器,鑄鋁加熱器,加熱圈流體電磁閥

　　2、霉菌生長(zhǎng)

　　霉菌在流動(dòng)相中、管路中或柱子進(jìn)口處繁殖、生長(zhǎng)堵塞濾板，導(dǎo)致壓力升高。這種現(xiàn)象在夏季，尤其是使用磷酸鹽緩沖液為流動(dòng)相時(shí)更易發(fā)生。在夏季使用磷酸鹽緩沖液時(shí)一般要現(xiàn)配現(xiàn)用。即使保存在冰箱中，一般也不要超過(guò)兩天。否則，即使不堵塞濾板，也會(huì)因細(xì)菌或霉菌孳生產(chǎn)生代謝物而造成對(duì)樣品分析的干擾。

　　3、非特異性吸附

　　當(dāng)溶質(zhì)在柱子上有較強(qiáng)的非特異性吸附，且當(dāng)前所用的流動(dòng)相難以將它們洗脫時(shí)，累積的未洗脫溶質(zhì)也會(huì)造成阻力增大和壓力升高。

　　4、更換流動(dòng)相時(shí)置換不徹底

　　當(dāng)改換流動(dòng)相體系時(shí)，不徹底的更換使不同性質(zhì)、互不混溶的流動(dòng)相存在于一個(gè)體系之中，也會(huì)造成壓力升高。

　　5、鹽晶體的析出

　　使用緩沖液或添加有緩沖液的流動(dòng)相后，緩沖液中的無(wú)機(jī)鹽成份可能會(huì)殘留在體系之中。它們會(huì)因在新流動(dòng)相體系中的溶解度降低而析出，造成流體阻力加大、壓力升高。

　　6、樣品的沉淀

　　當(dāng)樣品所使用的溶劑與流動(dòng)相不一致時(shí)，樣品進(jìn)入柱中有時(shí)可能因溶解度降低而沉淀出來(lái)，造成壓力升高。

　　7、壓力脈沖

　　運(yùn)行過(guò)程中，有時(shí)會(huì)產(chǎn)生系統(tǒng)內(nèi)壓力的突然升降。例如，轉(zhuǎn)動(dòng)進(jìn)樣閥時(shí)動(dòng)作過(guò)緩，造成液流堵塞后再瞬間釋放;開(kāi)機(jī)瞬間壓差較高等。如此所形成的壓力脈沖會(huì)造成多孔填料的崩壞和柱床結(jié)構(gòu)的微小變化。填料微屑的長(zhǎng)期積累也可能會(huì)使柱床阻力增大。

標(biāo)簽: 液相色譜柱
液相色譜柱 液相色譜柱柱壓升高的原因_液相色譜柱

解決高效液相色譜儀峰面積差別大的問(wèn)題

　　高效液相色譜儀分析中進(jìn)樣基線(xiàn)很好，保留時(shí)間能鎖定，壓力也穩(wěn)定，但是峰面積差別很大，大概有2倍的差別，這種情況出現(xiàn)的原因可能是多方面的，建議采用以下方法解決：　　1、調(diào)換一根新色譜柱，如果情況一樣，則排除柱子的原因。　　2、將在線(xiàn)過(guò)濾器拆下，用超聲波清洗，如果結(jié)果一樣，說(shuō)明與在線(xiàn)過(guò)濾器無(wú)關(guān)。　　3、考慮是不是進(jìn)樣閥有問(wèn)題或者定量環(huán)堵。建議多進(jìn)幾針樣品，看是否有規(guī)律，如果沒(méi)有規(guī)律，應(yīng)檢查一下進(jìn)樣器的其他部位，如果是進(jìn)樣器系統(tǒng)出現(xiàn)問(wèn)題，應(yīng)盡快解決之?！　?、對(duì)進(jìn)樣器清洗一下，清洗干凈后先進(jìn)一針空白，再進(jìn)樣，看看結(jié)果如何，如果有明顯減少，那可能是進(jìn)樣器污染，有樣品殘留在進(jìn)樣閥體內(nèi)，在切換的過(guò)程中被流動(dòng)相帶入色譜柱?！　?、考慮樣品溶液是否均勻。建議同一個(gè)濃度連續(xù)進(jìn)樣5次，看一下結(jié)果如何變化，有沒(méi)有規(guī)律；如果是樣品溶液不均勻，可以再攪拌一下?！　?、考慮光源是不是正常?！　?、考慮濃度是否在線(xiàn)性范圍內(nèi)。有時(shí)候定量時(shí)濃度太高或太低都會(huì)產(chǎn)生較大的分析誤差?！　?、考慮取樣方式是否正確，每次取樣后是否對(duì)針頭外面的附著液進(jìn)行清除。　　9、高效液相色譜儀的計(jì)算機(jī)軟件編制可能存在問(wèn)題。對(duì)比可以適當(dāng)改變軟件。

標(biāo)簽: 高效液相色譜儀
高效液相色譜儀 解決高效液相色譜儀峰面積差別大的問(wèn)題_高效液相色譜儀

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