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SRT凝膠色譜柱的特點(diǎn)及操作注意事項(xiàng) 色譜柱操作規(guī)程

時(shí)間:2020-05-16    來(lái)源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
  【中國(guó)儀器網(wǎng) 使用手冊(cè)】凝膠色譜法又被稱為凝膠色譜技術(shù),是一種效果好并且操作簡(jiǎn)單的分離分析技術(shù)。SRT色譜柱在分析分離操作時(shí),并不需要有機(jī)溶劑,所以一般對(duì)高分子物質(zhì)有很高的分離效果。SRT凝膠色譜柱現(xiàn)今廣泛應(yīng)用于生物分子及水溶性聚合物的分離和檢測(cè),而該款色譜柱的制作工藝采用可控的化學(xué)修飾技術(shù),因此可以確保色譜柱與色譜柱之間有著可靠的重現(xiàn)性,并且SRT色譜柱設(shè)計(jì)的大孔體積可保證高的分離容量以及優(yōu)異的分辨率。
 
  以下便是羅列的SRT凝膠色譜柱的一些特點(diǎn):
 
  1.高柱容量、高分辨率
 
  SRT凝膠色譜柱其精心設(shè)計(jì)的大孔體積可保證高的分離容量以及優(yōu)異的分辨率。
 
  2.pH范圍寬 (pH范圍2-8.5)
 
  SRT凝膠色譜柱的pH范圍讓其能夠幫助分析分離各類物質(zhì)。
 
  3.使用壽命長(zhǎng)
 
  SRT凝膠色譜柱本身的SRT SEC鍵合固定相采用的是表面修飾技術(shù),通過(guò)在高純度具有良好機(jī)械穩(wěn)定性的硅膠基質(zhì)上,鍵合一層均勻的納米厚度中性親水薄膜而制備成的,因而有較長(zhǎng)的使用壽命。
 
  4.低鹽濃度洗脫,適合LC-MS分析
 
  LC-MS分析技術(shù)能夠以非常高的靈敏度同時(shí)測(cè)量多種復(fù)雜分析物。同時(shí)成功的LC-M分析具有高度靈敏度,具有可追溯性強(qiáng)和數(shù)據(jù)可靠的特性。因而低鹽濃度洗脫對(duì)分析效率來(lái)講有很大的幫助
 
  5.較低的非特異性吸附,對(duì)于生物樣品無(wú)強(qiáng)吸附,較高的蛋白回收率及活性回收率
 
  SRT凝膠色譜柱的填料采用化學(xué)鍵合技術(shù),表面親水涂層覆蓋,因此SRT凝膠色譜柱在使用時(shí)不僅具有較好的穩(wěn)定性,而且對(duì)蛋白等生物樣品的非特異性吸附作用也非常小。
 
  6.解決多維色譜分析應(yīng)用
 
  SRT凝膠色譜柱可以解決多維色譜分析應(yīng)用在實(shí)際操作中的問題。
 
  SRT凝膠色譜柱在使用時(shí)也有些操作需要注意,不然會(huì)影響到SRT凝膠色譜柱的使用效果。以下是SRT凝膠色譜柱的使用注意事項(xiàng):
 
  1.預(yù)先測(cè)量
 
  在SRT凝膠色譜柱安置好了之后,測(cè)量就開始了。所以在操作SRT凝膠色譜柱時(shí),在安置好后,應(yīng)避免溶液的進(jìn)樣或者過(guò)快的壓力增長(zhǎng),這些情況可能會(huì)導(dǎo)致SRT凝膠色譜柱柱效下降。
 
  2.防止流速的波動(dòng)
 
  SRT凝膠色譜柱很容易受到流速波動(dòng)的影響,所以需要使用沒有壓力波動(dòng)的泵,如果使用有壓力波動(dòng)的泵,那么就需要在泵的出口處連接一個(gè)脈沖節(jié)氣門以防波動(dòng),并且節(jié)氣門應(yīng)非常耐受腐蝕。

影響色譜柱性能因素

  色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對(duì)色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快等。

  一、物理因素:

  (1)硅膠純度:硅膠純度和殘留金屬離子濃度,硅膠的雜質(zhì)會(huì)影響化合物的峰形,硅膠表面的金屬含量高會(huì)影響堿性化合物的峰形,易發(fā)生拖尾。

  (2)色譜柱尺寸填料床的長(zhǎng)度和內(nèi)徑,增加色譜柱長(zhǎng)度,可以在一定程度上提高柱效,但也會(huì)升高壓力和導(dǎo)致峰展寬;寬柱徑,提高載樣量,但也會(huì)增加橫向擴(kuò)散,同樣會(huì)導(dǎo)致峰展寬。窄柱徑可以節(jié)約溶劑,可減少橫向擴(kuò)散,但壓力較大,對(duì)系統(tǒng)要求較高。

  (3)顆粒形狀及粒徑球形顆粒柱效高、重現(xiàn)性好、柱床結(jié)構(gòu)均勻,不規(guī)則形柱床結(jié)構(gòu)不均勻、流動(dòng)相線速度不均勻,容易譜帶展寬;平均顆粒直徑,粒徑越小,柱效越高,柱壓也越高。粒徑分布越廣則柱效越低,壓力越大。

  (4)顆粒表面積:顆粒外表面和內(nèi)部孔表面的總和,以m2/g表示,相對(duì)而言高表面積對(duì)樣品具有較強(qiáng)的保留能力,更大的柱容量和分離度。而低表面積能更快達(dá)到平衡狀態(tài),更適合梯度洗脫程序。

  (5)孔徑:顆粒的孔或腔的平均尺寸,范圍是80~300?,大孔徑的填料顆??梢匝娱L(zhǎng)大分子溶質(zhì)在填料表面的滯留時(shí)間,改善分離,所以大孔徑填料適合分離大分子化合物或者水動(dòng)力體積較大的分子。

  二、化學(xué)因素:

  (1)鍵合類型及鍵合相:鍵合相分子與基體單點(diǎn)相連為單體鍵合,這種鍵合方式可以提高傳質(zhì)速率,縮短柱平衡時(shí)間;聚合體鍵合為鍵合相分子與基體多點(diǎn)相連,這種鍵合方式可以增加色譜柱穩(wěn)定性,增加載樣量。而鍵合相不同會(huì)直接影響化合物的保留行為。

  (2)碳覆蓋率:高碳覆蓋率可以提高分辨率和重現(xiàn)性,但分析時(shí)間長(zhǎng)。

  (3)封端:硅膠鍵合相填料中有部分未封端的殘留硅羥基,如圖封端可以減輕待測(cè)組分與硅膠表面殘留的酸性硅羥基反應(yīng),改善保留和峰行,這對(duì)于堿性化合物尤其重要。而不同的封端技術(shù)也會(huì)直接影響色譜柱的效能。

標(biāo)簽: 色譜柱
色譜柱 影響色譜柱性能因素_色譜柱

色譜柱的使用注意事項(xiàng)及維護(hù)

  在日常分離分析工作中,色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要,色譜柱使用是否得當(dāng),直接影響色譜柱的壽命,稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過(guò)程中,需要注意下列問題,以維護(hù)色譜柱。

  (1)柱子在裝卸、更換時(shí),動(dòng)作要輕,接頭擰緊要適度。必須防止較強(qiáng)的機(jī)械振動(dòng),以免柱床產(chǎn)生空隙。

  (2)如果儀器用來(lái)做儀器分析 ,樣品種類有限,但分析次數(shù)多,則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱,這樣有助于延長(zhǎng)柱子的壽命。

  (3)避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料,因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行,在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過(guò)緩。

  (4)應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成,特別是反相色譜中,不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?,反之亦然?/p>

  (5)如使用柱溫控制裝置時(shí),應(yīng)注意在通人流動(dòng)相后才能升溫。

  (6)一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí),才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。

  (7)選擇使用適宜的流動(dòng)相,以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一個(gè)預(yù)柱,分析柱是鍵合硅膠時(shí),預(yù)柱為硅膠,可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”,避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。

  (8)避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內(nèi),需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一個(gè)保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。

  (9)經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱,清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí),對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過(guò)渡,每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右,即常規(guī)分析需要50-75mL。

  (10)保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對(duì)禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過(guò)夜或更長(zhǎng)時(shí)間。

  (11)色譜柱使用過(guò)程中,如果壓力升高,一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞,這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗;另一種可能是大分子進(jìn)人柱內(nèi),使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現(xiàn)塌陷,死體積增大。

  (12)在完成分離分析工作之后,不應(yīng)立即停機(jī),需及時(shí)對(duì)色譜分析系統(tǒng)進(jìn)行沖洗,一般0.5h以上,以除去色譜柱內(nèi)的雜質(zhì)

標(biāo)簽: 色譜柱
色譜柱 色譜柱的使用注意事項(xiàng)及維護(hù)_色譜柱

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