任何顆粒物進(jìn)進(jìn)液相色譜儀后都會在柱子進(jìn)口端被篩板擋住，zui后的結(jié)果是將柱子堵塞，表現(xiàn)出的特征是系統(tǒng)壓力增加并使色譜峰變形。因此，要采取各種預(yù)防 措施，包括操縱步驟和商品儀器自身的各種過濾設(shè)計(jì)，努力防止或減少顆粒物進(jìn)進(jìn)液相色譜儀中，從而延長儀器和色譜柱的使用壽命，并進(jìn)步數(shù)據(jù)的可靠性。
在液相色譜儀中，顆粒物的主要來源有三個(gè)途徑：活動相、被測樣品和儀器系統(tǒng)部件的磨損物。
1、被測樣品
使用針筒式過濾器不可能100%得到通過過濾器的被測樣品，總會或多或少的丟失。丟失來自這樣幾方面：過濾器濾膜的吸附、過濾器濾出的顆粒物上的吸附、針筒式濾膜過濾器與針筒連接處的滲漏等?！ ?br /> 2、活動相
無論是液相色譜儀HPLC級的水還是在實(shí)驗(yàn)室使用超純水凈化系統(tǒng)制備的水，zui后一步也是通過0.2μm微孔濾 膜。任何一種緩沖液中加進(jìn)了固體物，必然活動相過濾將。少量雜質(zhì)顆粒存在于活動相中必然成為殘?jiān)?br />
解決辦法：2. 1.活動相制備僅采用HPLC級液體時(shí)不需要過濾，反之所有活動相組成在使用前必須過濾。
2.2在連接儲液瓶和泵的輸液管的末端進(jìn)口采用下沉式過濾器（常見材質(zhì)有熔融玻璃砂芯濾板和微孔金屬的兩種）也是很重要的。這個(gè)過濾器的規(guī)格為≥10μm的微孔物質(zhì)，所以它不能取代活動相過濾步驟，但是它能除往系統(tǒng)中的塵土并保證儲液瓶、輸液管使用的可靠性。
2.3.推薦在HPLC系統(tǒng)中采用一個(gè)0.45 或0.5μm的在線多孔過濾器，接在自動進(jìn)樣器和柱子之間，即使已使用了保護(hù)柱。這個(gè)在線過濾器將成為擋板代替柱頭的濾板，而且如采用一個(gè)玻璃砂芯濾板， 既便宜，更換又方便（幾分鐘就可更換）。若采用在線過濾，液相色譜儀檢測每批樣品開始前記錄下壓力值，當(dāng)壓力上升一定值，例如25%或增加 500psi，應(yīng)該更換玻璃砂芯濾板了，更換以后沖洗幾分鐘系統(tǒng)將恢復(fù)到原來的壓力值。
3、儀器系統(tǒng)部件的磨損物
zui后，在液相色譜儀HPLC系統(tǒng)中顆粒物的另一個(gè)主要來源是輸液泵密封墊和進(jìn)樣閥旋轉(zhuǎn)軸的磨損。關(guān)于輸液泵密封墊的磨損更換有兩種不同建議。
3.1、在一般實(shí)驗(yàn)室中輸液泵密封墊通常使用壽命為六個(gè)月到一年，因此建議半年或一年更換這些密封墊。
3.2、原裝密封墊的密封效果，更換以后輕易引起活動相滲漏。所以，只要不漏液就不要輕易更換密封墊。
高效液相色譜儀的工作過程：
儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相) 內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對運(yùn)動時(shí)，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。以下是總結(jié)高效液相色譜儀的的應(yīng)用：
1、在食品分析中的應(yīng)用
食品營養(yǎng)成分分析：蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、色素、維生素、香料、有機(jī)酸（鄰苯二甲酸、檸檬酸、蘋果酸等）、有機(jī)胺、礦物質(zhì)等；
食品添加劑分析：甜味劑、防腐劑、著色劑（合成色素如檸檬黃、莧菜紅、靛藍(lán)、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)等）、抗氧化劑等；
食品污染物分析：霉菌毒素（黃曲霉毒素、黃桿菌毒素、大腸桿菌毒素等）、微量元素、多環(huán)芳烴等。
2、在環(huán)境分析中的應(yīng)用
多環(huán)芳烴（特別是稠環(huán)芳烴）、農(nóng)藥（如氨基甲酸脂類，反相色譜）殘留等。
3、在生命科學(xué)中的應(yīng)用
HPLC技術(shù)目前已成為生物化學(xué)家和醫(yī)學(xué)家在分子水平上研究生命科學(xué)、遺傳工程、臨床化學(xué)、分子生物學(xué)等必不可少的工具。其在生化領(lǐng)域的應(yīng)用主要集中于兩個(gè)方面：
低分子量物質(zhì)，如氨基酸、有機(jī)酸、有機(jī)胺、類固醇、卟啉、糖類、維生素等的分離和測定。
高分子量物質(zhì)，如多肽、核糖核酸、蛋白質(zhì)和酶（各種胰島素、激素、細(xì)胞色素、干擾素等）的純化、分離和測定。
4、在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用
體液中代謝物測定；藥代動力學(xué)研究；臨床藥物監(jiān)測：
合成藥物：抗生素、抗憂郁藥物（冬眠靈、氯丙咪嗪、安定、利眠寧、苯巴比妥等）、黃胺類藥等。
天然藥物生物堿（吲哚堿、顛茄堿、鴉片堿、強(qiáng)心甙）等
在器微型化過程中,尺寸的縮小不僅要考慮材料的性質(zhì)和制造上的可能,還要從原理上考慮尺寸縮小后所帶來的一系列問題。這些問題包括：
?。?）分離系統(tǒng)中被分配的分子個(gè)數(shù)是否大于106,因?yàn)橹挥写笥?06才能得到符合統(tǒng)計(jì)結(jié)果的數(shù)據(jù);
?。?）因分離通道尺寸縮小,自然提高了單位柱長的效率,但是總長度的減少可能使總分離效能遠(yuǎn)低于常規(guī);
（3）對于質(zhì)量敏感型檢測器,經(jīng)過分離柱后單位時(shí)間內(nèi)到達(dá)檢測器的分子個(gè)數(shù)是否滿足檢測原理所要求的最小數(shù)目;
?。?）對于濃度型檢測器,到達(dá)檢測池的分子數(shù)目是否能滿足符合統(tǒng)計(jì)規(guī)律的分子數(shù)目;
（5）檢測微區(qū)內(nèi)的外加能量密度是否超過被檢測分子所能承受的極限;
?。?）微量流動相的輸送與控制;
?。?）因材料尺寸的縮小,表面層氧化或腐蝕對器件功能的影響。最后,色譜儀器微型化所帶來的好處不僅僅是單位長度分離效率的提高,而是總分離能力的保持甚至提高;不僅僅是分離系統(tǒng)或某個(gè)部件的微型化,而是整體的微型化;不僅僅是質(zhì)量靈敏度的提高,而是濃度靈敏度的保持或提高;不僅僅是能量和物質(zhì)的低消耗,而是使用的方便和友好;不僅僅是整體尺寸的縮小,更重要的是整機(jī)的穩(wěn)定性和可靠性的提高!
下面分別討論上述7個(gè)問題。
（1）色譜分離的基本原理是有符合統(tǒng)計(jì)規(guī)律數(shù)目的分子群經(jīng)過不斷的兩相分配和分子碰撞,利用其分配系數(shù)的差異來達(dá)到分離的目的。這是一個(gè)宏觀參數(shù)。當(dāng)分子數(shù)目低于這個(gè)數(shù)目時(shí),就會偏離統(tǒng)計(jì)規(guī)律而出現(xiàn)所謂的漲落現(xiàn)象。分子數(shù)目越少,漲落現(xiàn)象越嚴(yán)重。當(dāng)分子數(shù)目低于103個(gè)時(shí),已沒有準(zhǔn)確的色譜保留規(guī)律,因此也就失去了宏觀意義下的分離規(guī)律。一般地,保證符合統(tǒng)計(jì)規(guī)律的分子數(shù)目是106個(gè)。
例如內(nèi)徑30μm的填充毛細(xì)管液相色譜（μ2HPLC）柱或毛細(xì)管電泳柱,若分別保持10萬/m和40萬/m的分離柱效,直接進(jìn)樣時(shí)不過載的進(jìn)樣量分別為40pL（1pL=10-12L）和115pL,分子總數(shù)分別是112×1012～112×1014和415×1010～415×1012。樣品中含量低至1～0.01μL/L（對μ2HPLC）或低至20～0.2μL/L（對CE）的組分就不能滿足106個(gè)分子的數(shù)目要求,分離過程中就會出現(xiàn)上述問題。所以,上述分離系統(tǒng)對濃度高于這個(gè)指標(biāo)的樣品分離時(shí)可以有重復(fù)的保留時(shí)間。如果考慮檢測方面的限制[參見下述的（3）和（4）>,痕量分析中用粗內(nèi)徑的填充色譜柱總是優(yōu)于微型色譜柱。
為了能進(jìn)行痕量分析,微型分離分析系統(tǒng)往往采用樣品預(yù)濃縮技術(shù)以補(bǔ)償濃度靈敏度的不足。但為此而發(fā)展的技術(shù)也同樣適用于常規(guī)分離分析系統(tǒng),同樣可以提高常規(guī)儀器的靈敏度,除非樣品量受到嚴(yán)格限制。
?。?）45年前的色譜柱理論已經(jīng)指出,毛細(xì)管開口柱的內(nèi)徑越小,或填充柱的填料粒度越小,色譜柱的分離效率就越高。毛細(xì)管電泳亦然,只是理論上有些不同,如有散熱問題和塞子流型的特點(diǎn)。微型化中普遍采用的細(xì)內(nèi)徑分離柱并不是微型儀器的專利,所能達(dá)到的高柱效也不是最近才認(rèn)識到的。如果在現(xiàn)有常規(guī)儀器中使用這種等效內(nèi)徑的色譜柱,再適當(dāng)改進(jìn)進(jìn)樣技術(shù)和檢測器,就會有與微型色譜或芯片電泳同樣的單位柱長的柱效,同時(shí)還可以有極高的總分離效能,因?yàn)槌Ｒ?guī)儀器中分離柱的長度很少受限,而高的分離效能才是真正有意義的。所以,微型色譜和芯片毛細(xì)管電泳用短分離柱而有快速分離的特點(diǎn),并不是它真正的優(yōu)點(diǎn),因?yàn)橛猛瑯映叽绲姆蛛x柱可以分別在常規(guī)色譜和毛細(xì)管電泳上實(shí)現(xiàn)同樣的效果。
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