在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中經(jīng)常遇到的情況：
新的色譜柱，直接上分析條件來(lái)分析樣品，發(fā)現(xiàn)分離情況不穩(wěn)定。
新的色譜柱，使用中發(fā)現(xiàn)壓力突然升高。
新的色譜柱，發(fā)現(xiàn)分離度、保留時(shí)間發(fā)生了變化。
色譜柱使用不頻繁，一開(kāi)始分析樣品效果比較好，但是，在使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)柱效下降快、峰形異常的情況。
色譜峰形異常，基線(xiàn)不穩(wěn)。
當(dāng)發(fā)生以上情況，請(qǐng)仔細(xì)檢查，是否有某個(gè)操作疏忽了？
1)測(cè)試柱性能
通常情況下，我們建議用戶(hù)在拿到色譜柱后，第一件事情就是在一臺(tái)性能完好的儀器系統(tǒng)上，按照廠(chǎng)家說(shuō)明書(shū)對(duì)色譜柱進(jìn)行柱效測(cè)試。其實(shí)，對(duì)于一個(gè)合格的色譜分析工作者來(lái)說(shuō)，拿到一根新色譜柱，要開(kāi)始一個(gè)課題之前，都會(huì)這樣做，目的有二：一、了解色譜柱之前的情況并判斷色譜柱是否正常。二、將檢測(cè)結(jié)果小心保存，當(dāng)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)異常時(shí)，在檢測(cè)柱效進(jìn)行對(duì)比，來(lái)進(jìn)一步排查原因。
2)當(dāng)反相使用高濃度緩沖鹽時(shí)，注意過(guò)渡
在使用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑時(shí)，一定要注意應(yīng)先用10％左右的低濃度的有機(jī)相洗脫劑過(guò)渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出，造成系統(tǒng)堵塞。另外，在發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)壓力升高異常時(shí)，要仔細(xì)檢查，段段排除包括保護(hù)柱、混合器、管路或者流通池等。色譜柱的維護(hù)和保養(yǎng)
3)當(dāng)更換色譜柱時(shí)，原來(lái)的實(shí)驗(yàn)情況發(fā)生變化
首先，如果之前開(kāi)發(fā)方法時(shí)色譜柱已經(jīng)做過(guò)別的樣品，那么之前的樣品或使用的流動(dòng)相對(duì)這個(gè)樣品分析可能有干擾，只能重新找條件。建議：開(kāi)發(fā)方法時(shí)使用新的色譜柱。(其次，如果是更換了品牌發(fā)生這樣的情況，可能是由于不同品牌的鍵合技術(shù)不同，造成了選擇性的細(xì)微差異 ，需要調(diào)整條件，并再次確定出峰順序(有些樣品的洗脫順序會(huì)改變)。
再次，如果是更換了同品牌型號(hào)的新的色譜柱發(fā)生這種情況，請(qǐng)檢查之前分離時(shí)目標(biāo)與雜質(zhì)的分離度是否符合要求(Rs大于1.5)，如果一開(kāi)始只是勉強(qiáng)分開(kāi)(Rs小于1.5)，那只能說(shuō)明方法沒(méi)有優(yōu)化好，需要再次進(jìn)行優(yōu)化。色譜柱的維護(hù)和保養(yǎng)
4)樣品及前處理
樣品要盡可能清潔，可選用樣品過(guò)濾器或樣品預(yù)處理柱(SPE)對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理；若樣品不便處理，要使用保護(hù)柱。流動(dòng)相中所使用的各種有機(jī)溶劑要使用色譜純，配流動(dòng)相的水可以是超純水或雙蒸水。如果將所配得流動(dòng)相再經(jīng)過(guò)0.45μm的濾膜過(guò)濾一次則更好，尤其是含鹽的流動(dòng)相。另外，裝流動(dòng)相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線(xiàn)過(guò)濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。
5)色譜柱基線(xiàn)問(wèn)題
通常情況，基線(xiàn)問(wèn)題是由于系統(tǒng)或者流動(dòng)相引起的，和色譜柱關(guān)系不大。
可能導(dǎo)致的原因：
(1)泵頭進(jìn)氣泡
(2)系統(tǒng)污染
(3)流通池漏液
(4)流動(dòng)相使用的某成分易揮發(fā)不穩(wěn)定(檢測(cè)波長(zhǎng)不合適)
(5)檢測(cè)波長(zhǎng)低，水的質(zhì)量不好等等。
6)色譜柱沖洗保養(yǎng)
當(dāng)使用了緩沖液或含鹽的流動(dòng)相，實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用10%的甲醇水溶液沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應(yīng)該在水中加入至少10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。還有就是絕對(duì)不能在這個(gè)工作上面打折扣，否則，一些保留強(qiáng)的雜質(zhì)沒(méi)有洗脫下來(lái)，只能是給后面的工作帶來(lái)更大的麻煩。如色譜柱要長(zhǎng)時(shí)間保存，可以?xún)?chǔ)存于純甲醇或乙腈中，并將購(gòu)買(mǎi)新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲(chǔ)存的溫度可以是室溫。
1、反相柱
分別用甲醇:水=90:10，純甲醇（HPLC級(jí)），異丙醇（HPLC級(jí)），二氯甲烷（HPLC級(jí)）等溶劑作為流動(dòng)相，依次沖洗，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積.然后再以相反的次序沖洗。
2、正相柱
分別用正己烷（HPLC級(jí)），異丙醇（HPLC級(jí)），二氯甲烷（HPLC級(jí)），甲醇（HPLC級(jí)）等溶劑做流動(dòng)相，順次沖洗，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的柱體積(異丙醇粘度大，可降低流速，避免壓力過(guò)高).注意使用溶劑的次序不要顛倒，用甲醇沖洗完后，再以相反的次序沖洗至正己烷，所有的流動(dòng)相必須嚴(yán)格脫水。
3、離子交換柱
長(zhǎng)時(shí)間在緩沖溶液中使用和進(jìn)樣，將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力下降，用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽(yáng)離子柱再生，反之，用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。
另外，還可以選擇能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑為流動(dòng)相做正方向和反方向沖洗。但再生后的色譜柱柱效是不可能恢復(fù)到新柱的水平的.如果柱子裝反了，可以調(diào)回來(lái)，但可能會(huì)造成柱內(nèi)擔(dān)體塌陷.在不得已的情況下盡量不要反裝色譜柱。
通常影響色譜柱使用壽命的主要因素有以下幾點(diǎn)。
?、偕V柱破損
石英毛細(xì)管柱的聚酰亞胺層，如有少許破損就很難再保護(hù)脆弱的石英毛細(xì)管。當(dāng)柱箱連續(xù)地加熱和冷卻、柱箱風(fēng)扇的震動(dòng)和柱架等都會(huì)對(duì)毛細(xì)管造成應(yīng)力，最終在色譜柱有弱點(diǎn)處破裂。大內(nèi)徑柱更容易破裂，也就是說(shuō)，在操作0.45～0.53mm內(nèi)徑柱時(shí)，要比0.18～0.32mm內(nèi)徑柱更要小心。
如果已經(jīng)斷裂的色譜柱，仍在高溫下連續(xù)運(yùn)行或是作多階溫度程序運(yùn)行，很可能損壞色譜柱，因破裂的后半段暴露在高溫的氧氣中，這樣會(huì)很快地破壞固定相；而斷裂的前半段，由于有載氣流過(guò)，氧的影響會(huì)小些。如斷裂的色譜柱沒(méi)有再加熱或只暴露在高溫或空氣中很短時(shí)間，斷裂的后半部分不會(huì)受到明顯損壞，可考慮作為它用。
?、跓釗p傷
超過(guò)色譜柱溫度上限，會(huì)造成色譜柱固定相和管表面加速損壞，色譜柱的過(guò)量流失會(huì)使活性組分拖尾，降低柱效。一般熱損壞是一個(gè)很慢的過(guò)程，但有氧存在時(shí)，會(huì)大大加速熱損壞。另外在有漏氣情況下，色譜柱過(guò)熱也會(huì)加速損壞或永久性損壞色譜柱。
?、垩鯎p傷
氧是毛細(xì)管柱的大敵，在接近室溫下，不會(huì)對(duì)色譜柱有太大損害，柱溫升高時(shí)會(huì)嚴(yán)重?fù)p壞色譜柱。對(duì)于極性固定相，即使溫度和氧濃度很低時(shí)，也會(huì)發(fā)生嚴(yán)重?fù)p壞。雖然，短時(shí)間地暴露在空氣中，如注射空氣或更換隔墊不會(huì)有太大問(wèn)題，但也應(yīng)避免。
在氣路上有漏氣的地方(如氣路、接頭和進(jìn)樣器)，往往是進(jìn)入氧氣的源頭，當(dāng)色譜柱加熱時(shí)，就會(huì)很快地?fù)p壞固定相，會(huì)過(guò)早地引起固定液的過(guò)度流失，至使活性化合物有拖尾，降低柱效。在不太嚴(yán)重的情況下，色譜柱還會(huì)有一定的分離功能，但柱效已經(jīng)下降。在嚴(yán)重的情況下，色譜柱就會(huì)完全失效。
④化學(xué)損傷
有少數(shù)化合物會(huì)使固定相遭到破壞。不揮發(fā)性化合物，進(jìn)入色譜柱常常會(huì)降低色譜柱的性能，但是不會(huì)破壞固定相，有條件時(shí)這些沉積的殘留物可以用溶劑沖洗而除去，能恢復(fù)色譜柱的性能。
要避免進(jìn)入色譜柱的主要化合物是無(wú)機(jī)和礦物堿和酸，這些礦物堿和酸不會(huì)揮發(fā)，通常積累在色譜柱的前端，如果使其停留在那里就會(huì)破壞固定相，使色譜柱過(guò)早的大量流失，使活性化合物拖尾，以及使柱效下降，其征兆和熱損壞及氧損壞類(lèi)似。
由于化學(xué)損壞多發(fā)生在色譜柱的前端，所以可把色譜柱的前端切掉0.5～1m，在比較嚴(yán)重的情況下，可以截去5m或更長(zhǎng)的一段。如果使用保護(hù)柱就會(huì)減小色譜柱被損害的長(zhǎng)度，但是需要經(jīng)常處理或更換保護(hù)柱。酸或堿還常常會(huì)破壞石英管內(nèi)的去活表面，因而會(huì)引起活性化合物的峰形變壞。
?、菸廴?/strong>
氣相色譜中，毛細(xì)管色譜柱被污染是很普遍的問(wèn)題，不幸的是，它和各種各樣常見(jiàn)的故障相似，常常被錯(cuò)誤的判斷為其它的故障，雖然被污染了的色譜柱并沒(méi)有損壞，但已失去效能。通常有兩種基本類(lèi)型的污染物，不揮發(fā)性污染物和半揮發(fā)性污染物。不揮發(fā)性污染殘留物不能從色譜柱里洗脫出來(lái)，而是累計(jì)在色譜柱里，這樣它就成為涂漬了殘留物的色譜柱，因而影響溶質(zhì)的分配。而且殘留物還會(huì)和活性化合物相互作用，甚至造成峰的拖尾，減少峰面積。
活性溶質(zhì)是指那些含有羥基或氨基(一些硫醇基)及醛的物質(zhì)；半揮發(fā)性污染物最后會(huì)洗脫出去，但需要幾個(gè)小時(shí)或幾天時(shí)間，半揮發(fā)性污染物和不揮發(fā)性殘留物一樣，他們也會(huì)引起峰形變壞和峰面積減小。此外，還常常引起基線(xiàn)不穩(wěn)定(漂移、噪音增加)或出鬼峰等。
污染物的來(lái)源有許多，其中進(jìn)樣是最主要的來(lái)源。生物液體和組織、土壤、廢水、地下水和類(lèi)似的含有大量半揮發(fā)的和不揮發(fā)物質(zhì)的基體，甚至使用凈化方法，樣品也會(huì)含有少許這些物質(zhì)并帶到注射樣品中，幾次到幾百次進(jìn)樣就會(huì)造成殘留物的積累故障。柱上進(jìn)樣、不分流進(jìn)樣和大口徑柱直接進(jìn)樣等進(jìn)樣方法常常會(huì)造成上述色譜柱的嚴(yán)重污染。
污染物還會(huì)來(lái)源于氣體管路、凈化器、密封墊、隔墊的碎屑或其他與樣品可能接觸的物質(zhì)，如樣品瓶、溶劑、注射器、移液管等，這些類(lèi)型的污染物可能會(huì)突然性的引起故障。
449717568
