液相色譜儀的日常維護(hù)與注意事項

    一、日常維護(hù)：

    1.定期清洗單向閥：將單向閥卸下，一般先用純凈水超聲10分鐘，然后用異丙醇超聲，10分鐘；也可直接用異丙醇超聲10分鐘。

    2.定期清洗吸濾頭：將吸濾頭卸下，一般先用純凈水超聲10分鐘，然后用異丙醇超聲10分鐘；也可直接用異丙醇超聲10分鐘。

    3.定期沖洗檢測池：把色譜柱卸下，在流速1.0ml/min的狀態(tài)下先用純凈水沖洗30分鐘，然后再用30%

    磷酸（色譜級）沖洗30分鐘左右，再用超純水沖洗至流出液為中性，最后用甲醇沖洗，待用。

    二、注意事項：

    1.開始進(jìn)樣前30分鐘開氘燈即可，節(jié)約燈的能量和使用時間。

    2.流動相的使用和注意事項：

    ①所用流動相必須預(yù)先濾過和脫氣，流動相一般貯存于玻璃不銹鋼容器內(nèi)。貯存容器一定要蓋嚴(yán)，防止溶劑揮發(fā)引起組成變化。磷酸鹽、乙酸鹽緩沖液很易長霉，應(yīng)盡量新鮮配制使用，不要長期貯存。容器應(yīng)定期清洗，特別是盛水、緩沖液和混合溶液的瓶子，以除去底部的雜質(zhì)沉淀和可能生長的微生物。

    ②配制流動相用水需為娃哈哈牌純凈水或經(jīng)超聲過濾后的純化水，流動相配制好后先用直徑為5cm，孔徑為0.45ｕm的濾膜，通過沙芯過濾器的過濾，然后在超聲儀上超聲。

    ③不得將裝流動相的容器直接放置與超聲儀內(nèi)，需放與篩網(wǎng)上進(jìn)行超聲。

    3.六通閥的使用和維護(hù)注意事項：

    ①樣品溶液進(jìn)樣前必須用濾膜過濾，以減少微粒對進(jìn)樣閥的磨損。

    ②轉(zhuǎn)動閥芯時不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增，甚至超過泵的最大壓力；再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時，過高的壓力將使柱頭損壞。

    ③為防止緩沖鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。通?？捎盟疀_洗，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗。

    4.色譜柱柱壓升高的主要因素：

    ①LC-10AT/20AT/10ATPlus泵的單向閥堵塞。

    ②色譜柱的入口篩板堵塞。

    ③吸濾頭堵塞。

    ④PEEK管接口處堵塞。

    5.色譜柱柱壓不穩(wěn)的因素：

    ①泵內(nèi)有空氣。

    ②泵密封墊損壞。

    ③溶劑中的氣泡。

    ④系統(tǒng)檢漏，找出漏點。

    6.樣品峰保留時間漂移的主要因素：

    ①室內(nèi)溫度變化過大。

    ②流動相成分發(fā)生變化。

    ③色譜柱未平衡好。

    ④泵中有氣泡。

    ⑤該流動相是否適宜此樣品的檢測。

    7.基線漂移的主要因素：

    ①柱溫波動。

    ②流動相不均勻。

    ③流通池被污染或有氣體。

    ④檢測器出口阻塞。

    ⑤流動相配比不當(dāng)或流速變化。

    ⑥流動相污染、變質(zhì)。

    ⑦使用循環(huán)溶劑。

    8.檢測器靈敏度不夠的主要因素：

    ①樣品進(jìn)樣量不足。

    ②波長設(shè)置不正確。

    ③檢測器池窗污染。

    ④檢測池中有氣泡。

    ⑤電壓不穩(wěn)。

    ⑥流動相流速不合適。

    9.色譜柱的使用和維護(hù)注意事項：

    ①避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動。柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩。

    ②應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?/p>

    ③一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。

    ④選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。

    ⑤避免將復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。

    ⑥經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。

    ⑦保存色譜柱時應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置至次日或更長時間。

    ⑧色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是濾片被堵塞，這時應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。

    ⑨以硅膠為基質(zhì)的填料，只能在pH2~9范圍內(nèi)使用。每次分析檢測完成后，可以用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。

    10.樣品必須用直徑為2.5cm，孔徑為0.45ｕm的濾膜針式過濾。如有明確要求需用離心過濾的，經(jīng)離心過濾后取上清液即可。