液相色譜儀根據(jù)固定相是液體或是固體，又分為液-液色譜及液-固色譜。現(xiàn)代液相色譜儀由高壓輸液泵、進(jìn)樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測(cè)器、信號(hào)記錄系統(tǒng)等部分組成。與經(jīng)典液相柱色譜裝置比較，具有高效、快速、靈敏等特點(diǎn)。
1、 泵。
泵是液相色譜儀的心臟。處于良好工作狀態(tài)的泵，基線平穩(wěn)，保留時(shí)間重現(xiàn)性好，梯度洗脫時(shí)壓力變化緩慢而且平穩(wěn)。
1)選擇優(yōu)質(zhì)的溶劑和試劑，在進(jìn)入儀器前用 0.45um 膜過(guò)濾，并進(jìn)行脫氣處理。
2)泵開始使用時(shí)，一定要用合適的流動(dòng)相徹底清洗干凈。
3)定期檢查并更換在線過(guò)濾片及有關(guān)的墊圈，經(jīng)常清洗進(jìn)液處的微孔濾頭。
4)改變流動(dòng)相時(shí)，應(yīng)注意沉淀的產(chǎn)生，以防止泵堵塞。
2、色譜柱。
色譜柱是化合物分離的關(guān)鍵。保養(yǎng)良好的色譜柱具有很高的塔板數(shù)，基線平穩(wěn)。
1)色譜柱比較嬌氣不能夠碰撞、彎曲或強(qiáng)烈震蕩;安裝時(shí)要保證閥件或管路的清潔。
2)流動(dòng)相在使用前必須進(jìn)行脫氣處理，盡量不使用或少使用高粘度的流動(dòng)相。
3)在滿足靈敏度的前提下，盡可能的使用小進(jìn)樣量。如果樣品比較臟，要進(jìn)行凈化或提純處理。
4)分析結(jié)束后要清洗掉進(jìn)樣閥中殘留的樣品，并用流動(dòng)相或適當(dāng)?shù)娜軇┣逑瓷V柱。
5)如長(zhǎng)期不用，用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑保存并封閉或定期補(bǔ)充合適的流動(dòng)相。
3 、檢測(cè)器
分析完成后，馬上關(guān)閉檢測(cè)器。
4 、進(jìn)樣器
分析結(jié)束后反復(fù)沖洗進(jìn)樣口，防止樣品的交叉污染或堵塞。
色譜柱在色譜儀分析系統(tǒng)中起著分離作用，是色譜分析的核心部件。正確使用和維護(hù)色譜柱尤為重要，使用不當(dāng)就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。以下從幾個(gè)方面簡(jiǎn)單介紹液相色譜柱在使用過(guò)程中應(yīng)當(dāng)著重注意的問(wèn)題。
一、避免壓力和溫度的急劇變化
溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，以保持色譜柱內(nèi)填料的穩(wěn)定性。
二、避免直接改變?nèi)軇┑慕M成
在需要改變檢測(cè)樣品溶液組成是，應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然。且在使用次洗脫能力?qiáng)的洗脫液沖洗色譜柱時(shí)，對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過(guò)渡，每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50~75ml。
三、避免色譜柱反沖
一般來(lái)說(shuō)色譜柱不能反沖，只有色譜柱使用說(shuō)明書上標(biāo)明該柱可反沖才可以反沖除去留在柱頭上的雜質(zhì)。否則，反沖色譜柱的影響是迅速降低柱效。
四、避免流動(dòng)相使用不當(dāng)而破壞固定相
選擇使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一段預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠"飽和"，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
五、禁止樣品未經(jīng)處理直接進(jìn)入色譜柱
避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
六、禁止將緩沖溶液長(zhǎng)時(shí)間存放在色譜柱內(nèi)
保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過(guò)夜或更長(zhǎng)時(shí)間。
七、禁止色譜柱未經(jīng)處理直接封存
色譜柱使用完成之后須使用相宜溶劑進(jìn)行清潔處理，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡；當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí)，使用完后應(yīng)用無(wú)鹽流動(dòng)相沖洗；含鹵族元素（氟、氯、溴）的化合物可能會(huì)腐蝕不銹鋼管道，不宜長(zhǎng)期與之接觸；裝在液相色譜儀上的色譜柱如不經(jīng)常使用，應(yīng)每隔4-5天開機(jī)沖洗15分鐘。
高效液相色譜儀是什么呢?高效液相色譜儀是一種常用的色譜分析儀器，通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。
高效液相色譜儀是近幾十年發(fā)展起來(lái)的一種高效、快速的分離分析技術(shù)，是現(xiàn)代分離檢測(cè)的重要工具。高效液相色譜儀是以經(jīng)典液相色譜儀為基礎(chǔ)，引入氣相色譜儀的理論和實(shí)驗(yàn)方法，將流動(dòng)相改為高壓輸送，采用高效固定相和在線檢測(cè)等手段，發(fā)展而成的分離分析技術(shù)。
一、基本結(jié)構(gòu)：
由輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等組成。
二、工作原理：
利用混合物各組分在固定相和流動(dòng)相中溶解、分配或吸附等化學(xué)作用性能的差異，使各組分在作相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩相中反復(fù)多次受到上述各作用力而達(dá)到相互分離。
三、類型：
1、液液分配色譜儀。
2、液固吸附色譜儀。
3、離子色譜儀。
4、凝膠色譜儀。
5、親和色譜儀。
四、特點(diǎn)：
具有高壓、高速、高效、高靈敏度、高選擇性和應(yīng)用范圍廣等特點(diǎn)。
五、應(yīng)用：
可用于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差以及具有生理活性物質(zhì)的分析。一般來(lái)說(shuō)，沸點(diǎn)在450℃以下，相對(duì)分子質(zhì)量小于450的有機(jī)物可用氣相色譜儀分析，但這些物質(zhì)只占有機(jī)物的15%～20%，其余的80%～85%有機(jī)物原則上都可采用高效液相色譜儀分析。
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