液相色譜儀的原理就是利用待分離的各種物質(zhì)在兩相中的分配系數(shù)、吸附能力等親和能力的不同來進行分離的。使用外力使含有樣品的流動相氣體、液體、通過一固 定于柱中或平板上、與流動相互不相溶的固定相表面。當(dāng)流動相中攜帶的混合物流經(jīng)固定相時，混合物中的各組分與固定相發(fā)生相互作用。
液相色譜儀的保養(yǎng)：
1、至少每天進行一次檢漏。
2、泵正在帶壓工作時，不可拆卸其部件除非有經(jīng)驗的維修人員在進行故障處理、。
3、配制兩種或兩種以上洗脫液時，一定要先脫氣再使用，保證流動相系統(tǒng)中不要形成氣泡。
4、定期檢查泵的潤滑，只使用儀器說明書指定的潤滑油。
5、定期檢查檢測器噪聲、漂移，定期進行檢測器校正。
6、除非實踐證明其它純度級別的溶劑可用，否則使用高效液相色譜流動相專用試劑。
7、更換溶劑時，一定要對系統(tǒng)進行沖洗。如果兩種溶劑互不相溶，則應(yīng)先用與這兩種溶劑都能互溶的溶劑進行沖洗，再用新溶劑進行沖洗。
8、柱子不論何時都不能拆卸下接頭，以免損失柱效，廢掉柱子。
與比重計相關(guān)儀器液相色譜儀是由檢測器、輸液泵、進樣器、柱溫箱、混合器、色譜柱等部分組成。判斷液相色譜儀的指標(biāo)有噪音，漂移，最小檢測濃度，定性定量重復(fù)性等。
1、液相色譜儀噪音是指由液相色譜儀的電器元件、溫度波動、電壓的線性脈沖以及其他液相色譜儀非溶質(zhì)作用產(chǎn)生的高頻噪聲和基線的無規(guī)則波動。噪音的大小直接關(guān)系到液相色譜儀檢測器的檢測靈敏度，噪音越大，檢測的靈敏度就越低。
2、液相色譜儀檢測器最小檢測度(也稱檢測限)是考核液相色譜儀檢測器靈敏度的重要參數(shù)指標(biāo)。CL=2×Nd×C/H(CL：液相色譜儀最小檢測濃度Nd:噪音C：液相色譜儀樣品濃度最小檢測濃度H：樣品峰高)。
3、液相色譜儀檢測器漂移是指儀器穩(wěn)定后一段時間內(nèi)基線漂離液相色譜儀基線原點的距離，通常用來衡量液相色譜儀穩(wěn)定快慢。高品質(zhì)的液相色譜儀能在較短的時間內(nèi)達到穩(wěn)定，從而在一定程度上提高了液相色譜儀分析效率。
4、液相色譜儀定性、定量重復(fù)性主要是研判液相色譜儀穩(wěn)定性的指標(biāo)，這對于分析液相色譜儀樣品來說是非常重要的。好的液相色譜儀其穩(wěn)定性應(yīng)該是十分優(yōu)秀的，這就要求多次液相色譜儀進樣保留時間及含量的一致性，這樣做出來的液相色譜儀檢測結(jié)果才能準(zhǔn)確使人信服。
5、液相色譜儀操作方便性無論是對新手還是成熟的用戶都是很重要的。色譜儀自動化程度越高操作越簡單，越有利于提高液相色譜儀分析效率，同時也為以后液相色譜儀分析方法的拓展提供有力。
色譜柱是高效液相色譜的心臟，在高效液相色譜儀的使用中，保持色譜柱的柱效、容量和滲透性，延長柱子的使用壽命非常重要。色譜柱壓升高一般是由于柱床內(nèi)產(chǎn)生了雜質(zhì)，造成流體阻力加大所致。這兩個原因，大致又可以分為以下幾方面：
1、流動相的前處理
雜質(zhì)堵塞色譜柱進口濾片，導(dǎo)致壓力升高。這是由于流動相可能沒有過濾，或過
濾不徹底，使固體雜質(zhì)滯留于濾板上所致。
2、樣品的沉淀
當(dāng)溶解樣品的溶劑與流動相不一致時，樣品進入色譜柱時，可能因溶解度降低而沉淀出來，
造成壓力升高。
3、晶體的析出
使用含有緩沖液的流動相時，緩沖液中的無機鹽可能會殘留在體系之中，它們會因在新流動
相中的溶解度降低而析出，造成流體阻力加大、壓力升高。
4、細菌或霉菌孳生
霉菌在流動相中、管路中或柱子進口處繁殖、生長堵塞濾板，導(dǎo)致壓力升高。所以在使用磷
酸鹽緩沖液時一般要現(xiàn)配現(xiàn)用。
5、溶質(zhì)吸附
當(dāng)溶質(zhì)在柱子上有較強的吸附，且所用的流動相難以將它們洗脫時，累積的未洗脫溶質(zhì)也會
造成阻力增大和壓力升高。
6、流動相更換過度較快
當(dāng)改變流動相體系時，不徹底的更換使不同性質(zhì)、互不混溶的流動相存在于同一個體系之中，也會造成壓力升高。
7、壓力脈沖
運行過程中，有時會產(chǎn)生系統(tǒng)內(nèi)壓力的突然升降。如此所形成的壓力脈沖會造成多孔填料的
崩壞和柱床結(jié)構(gòu)的微小變化，填料微屑的長期積累也可能會使柱床阻力增大，造成壓力升高。
處理對于緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內(nèi)的情況先用40～50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓逐漸下降后,相應(yīng)提高流速沖洗,柱壓大幅度下降后,用常溫純水沖洗,之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘;
對于樣品污染沉積的情況,由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再用換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。
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