1.適用范圍
適用于島津LC-10AD型液相色譜儀的檢定。
2.職責
檢驗員：嚴格按照檢定規(guī)程進行周期檢定。
QC主管：監(jiān)督檢查檢定規(guī)程執(zhí)行情況。
3.檢定項目和技術要求
3.1.輸液系統(tǒng)
3.1.1.泵流量設定值誤差：Ss＜±2%；流量穩(wěn)定性誤差：＜±2%
3.1.2.定性測量重復性誤差（5次定量管進樣）：RSD≤1.5%
3.1.3.定量測量重復性誤差（5次定量管進樣）：RSD≤1.5%
3.2.紫外檢測器性能
3.2.1.可調波長紫外—可見光檢測器波長示值誤差：＜±2nm；重復性誤差：＜±1nm
3.2.2.基線漂移：≤5×10-3（AU/h）；基線噪聲：≤5×10-4(AU)
3.2.3.zui小檢定濃度（靜態(tài)）：4×10-8g/ml（萘的甲醇溶液）
4.檢定條件
| 流量設定值（ml/min） | 0.5 | 1.0 | 1.5 | |
| 測量次數(shù) | 3 | 3 | 3 | |
| 收集流動相時間（min） | 25 | 15 | 10 | |
| 允許 誤差 | Ss | 3% | 2% | 2% |
| SR | 3% | 2% | 2% | |
4.1.環(huán)境溫度為10～30℃，8小時內溫度波動不超過±3℃，相對濕度低于65%。
4.2.電源電壓：220±22V，電源頻率：50±0.5Hz。
4.3.檢定設備
4.3.1.秒表：分度值小于0.1s。
4.3.2.分析天平：zui大稱量200g，zui小分度值0.1mg。
4.3.3.容量瓶
4.3.4.微量注射器
4.3.5.標準物質和試劑
5.檢定方法
5.1.泵流量設定值誤差Ss、流量穩(wěn)定性誤差SR的檢定。
將儀器的輸液系統(tǒng)、進樣器、色譜柱和檢測器聯(lián)接好，以甲醇為液動相，按表1設定流量，待流速穩(wěn)定后，在流動相排出口用事先清洗稱重過的容量瓶收集流動相，同時用秒表計時，準確地收集10～25分鐘，稱重，按下式計算Ss和SR。
Ss=（Fm—Fs）/Fs×100%
SR=（Fmax—Fmin）/F×100%
式中Ss為流量設定值誤差（%）；
Fm=（W2—W1）ρt·t為流量實測值；
W2：容量瓶+流動相的重量（g）；
W1：容量瓶的重量（g）；
Fs：流量設定值（ml/min）；
ρt：實驗溫度下流動相的密度（g/cm3）；
t：收集流動相的時間（min）；
SR：流量穩(wěn)定性誤差（%）；
Fmax：同一組測量中流量zui大值（ml/min）；
Fmin：同一組測量中流量zui小值（ml/min）；
F：同一組測量中的算術平均值（ml/min）。
5.2.定性、定量測量重復性的檢定
將儀器聯(lián)接好，使之處于正常工作狀態(tài)，用進樣閥的定量管注入適當?shù)臉藴嗜芤海ㄝ粱蚵?lián)苯）或穩(wěn)定的待分析樣品溶液，記錄保留時間和峰面積，連續(xù)測量5次，按下式計算相對標準偏差RSD。
5.3.紫外檢測器性能
5.3.1.可調波長紫外-可見光檢測器波長示值誤差和重復性誤差的檢定
將檢測器與記錄儀聯(lián)好，接通電源穩(wěn)定后，先將檢測波長調至235nm，用甲醇用流動相，流速1.0ml/min，用進樣器注入重鉻酸鉀的硫酸溶液（取120℃干燥至恒重的基準重鉻酸鉀約60mg，精密稱定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀釋至1000ml，搖勻，即得）20ul，待出峰時立即停泵，改用波長掃描方式，得到重鉻酸鉀在紫外-可見光區(qū)的吸收曲線，記錄其在235nm、257nm、313nm、350nm附近波長處的zui大或zui小吸收波長，分別找出各點zui大或zui小波長與標準波長之差即為波長示值誤差；重復測定3次，各點zui小與zui大值之差即為波長重復性誤差。
5.3.2.基線漂移和基線噪聲的檢定
將儀器各部分聯(lián)接好，紫外檢測器波長調到254nm，流動相為100%甲醇，流速為1.0ml/min，吸收度范圍選擇zui靈敏檔，開機，待基線穩(wěn)定后，記錄基線30-40分鐘，計算基線漂移和噪聲。
5.3.3.zui小檢測濃度
在靜態(tài)條件下，用進樣器注入4×10-8g/ml萘的甲醇溶液，樣品峰高應大于或等于兩倍基
線噪聲峰高，按下式計算zui小檢測濃度。
Cl=2×HN×C /H
式中，Cl：zui小檢測濃度（g/ml）；
HN：噪聲峰高（記錄儀器數(shù)或實測高度cm）；
C：樣品濃度（g/ml）；
H：樣品峰高（記錄儀器數(shù)或實測高度cm）。
6.檢定結果處理和檢定周期
6.1.檢定結果全部項目均符合技術要求者，判為合格，方可使用。若個別部件、某一指標達不到要求，確難以維修而又不影響定性、定量結果準確性者，可作為準用品。
6.2.液相色譜儀的檢定周期為兩年，若更換部件或對儀器性能有懷疑時，應隨時檢定，并記錄檢定結果。
高效液相色譜儀的工作過程：
儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相) 內，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對運動時，經過反復多次的吸附- 解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。以下是總結高效液相色譜儀的的應用：
1、在食品分析中的應用
食品營養(yǎng)成分分析：蛋白質、氨基酸、糖類、色素、維生素、香料、有機酸（鄰苯二甲酸、檸檬酸、蘋果酸等）、有機胺、礦物質等；
食品添加劑分析：甜味劑、防腐劑、著色劑（合成色素如檸檬黃、莧菜紅、靛藍、胭脂紅、日落黃、亮藍等）、抗氧化劑等；
食品污染物分析：霉菌毒素（黃曲霉毒素、黃桿菌毒素、大腸桿菌毒素等）、微量元素、多環(huán)芳烴等。
2、在環(huán)境分析中的應用
多環(huán)芳烴（特別是稠環(huán)芳烴）、農藥（如氨基甲酸脂類，反相色譜）殘留等。
3、在生命科學中的應用
HPLC技術目前已成為生物化學家和醫(yī)學家在分子水平上研究生命科學、遺傳工程、臨床化學、分子生物學等必不可少的工具。其在生化領域的應用主要集中于兩個方面：
低分子量物質，如氨基酸、有機酸、有機胺、類固醇、卟啉、糖類、維生素等的分離和測定。
高分子量物質，如多肽、核糖核酸、蛋白質和酶（各種胰島素、激素、細胞色素、干擾素等）的純化、分離和測定。
4、在醫(yī)學檢驗中的應用
體液中代謝物測定；藥代動力學研究；臨床藥物監(jiān)測：
合成藥物：抗生素、抗憂郁藥物（冬眠靈、氯丙咪嗪、安定、利眠寧、苯巴比妥等）、黃胺類藥等。
天然藥物生物堿（吲哚堿、顛茄堿、鴉片堿、強心甙）等
高效液相色譜儀可以完成二元高壓梯度洗脫，也可以拓展為制備系統(tǒng)，采用高壓混合器連接兩個高壓恒流泵，利用RS232通訊，即可實現(xiàn)梯度分析；
便于用戶自由選擇與搭配，混合器材主要由不銹鋼、生物惰性PEEK等構成，用途廣泛；
可廣泛應用于研究開發(fā)、醫(yī)藥檢驗、食品檢測、化工分析、環(huán)境監(jiān)測等眾多分析領域。
高效液相色譜儀分離原理：液-液分配(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化學鍵合相色譜(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流動相和固定相都是液體。
流動相與固定相之間應互不相溶（極性不同，避免固定液流失），有一個明顯的分界面。
當試樣進入色譜柱，溶質在兩相間進行分配。達到平衡時，高效液相色譜儀報價，服從于高效液相色譜計算公式；
6種定量計算方法：歸一法、修正歸一法、帶比例因子的修正歸一法、內標法、外標法，高效液相色譜儀適用范圍，以及指數(shù)計算法。
高效液相色譜儀特點：
1、梯度洗脫內部軟件可自控制，編輯、存貯60個梯度方法，運行復雜的梯度程序；
2、泵形式：串聯(lián)雙柱塞 浮動式密封圈；泵頭自沖洗功能，泵無須手動排空即可輸液“自吸式單向閥”技術，可延長密封圈使用壽命；
3、光路系統(tǒng)采用精密定位結構和獨特的散熱技術，高效的光學系統(tǒng)和數(shù)字過濾；
4、程序化的溶劑類和壓縮因子，可自動補償；完整的預清洗功能，更于快速溶劑更換；
5、波長調節(jié)功能：既可由鍵盤面板控制也可由程序軟件設定，全封閉集成型光電檢測元件，無需任何機械部分調整即可選擇或改變波長；
6、光源運行時間在線監(jiān)測并顯示，方便用戶確定光源壽命；
7、三條流量校正曲線以及特有的多點參數(shù)校正，保障了極高的流量準確性；
8、梯度：高壓2-3元；梯度方式：高壓，梯度洗脫內部軟件可自控制，可通過PC機及泵控制；
9、實時顯示樣品池和參比池能量，方便判斷光源和流通池狀態(tài)；
10、紫外檢測器具有自動波長定位調整，自動調零，多量程輸出選擇；
11、智能化高，可實現(xiàn)網(wǎng)絡化平臺監(jiān)控，提高了你的QC效益；
12、自動化，讓你從繁鎖的分析操作中解放出更多的時間。
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