高效液相色譜儀由高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)、記錄系統(tǒng)等五大部分組成。分析前，選擇適當(dāng)?shù)?font color="#0268CA">色譜柱和流動(dòng)相，開泵，沖洗柱子，待柱子達(dá)到平衡而且基線平直后，用微量注射器把樣品注入進(jìn)樣口，流動(dòng)相把試樣帶入色譜柱進(jìn)行分離，分離后的組分依次流入檢測(cè)器的流通池，最后和洗脫液一起排入流出物收集器。當(dāng)有樣品組分流過(guò)流通池時(shí)，檢測(cè)器把組分濃度轉(zhuǎn)變成電信號(hào)，經(jīng)過(guò)放大，用記錄器記錄下來(lái)就得到色譜圖。色譜圖是定性、定量和評(píng)價(jià)柱效高低的依據(jù)。
高壓輸液系統(tǒng)
高壓輸液系統(tǒng)由溶劑貯存器、高壓泵、梯度洗脫裝置和壓力表等組成。
(1)溶劑貯存器。溶劑貯存器一般由玻璃、不銹鋼或氟塑料制成，容量為1～2L，用來(lái)貯存足夠數(shù)量、符合要求的流動(dòng)相。
(2)高壓輸液泵。高壓輸液泵是高效液相色譜儀中關(guān)鍵部件之一，其功能是將溶劑貯存器中的流動(dòng)相以高壓形式連續(xù)不斷地送入液路系統(tǒng)，使樣品在色譜柱中完成分離過(guò)程。
由于液相色譜儀所用色譜柱徑較細(xì)，所填固定相粒度很小，因此，對(duì)流動(dòng)相的阻力較大，為了使流動(dòng)相能較快地流過(guò)色譜柱，就需要高壓泵注入流動(dòng)相。對(duì)泵的要求：輸出壓力高、流量范圍大、流量恒定、無(wú)脈動(dòng)，流量精度和重復(fù)性為0.5%左右。此外，還應(yīng)耐腐蝕，密封性好。高壓輸液泵，按其性質(zhì)可分為恒壓泵和恒流泵兩大類。恒流泵是能給出恒定流量的泵，其流量與流動(dòng)相粘度和柱滲透無(wú)關(guān)。恒壓泵是保持輸出壓力恒定，而流量隨外界阻力變化而變化，如果系統(tǒng)阻力不發(fā)生變化，恒壓泵就能提供恒定的流量。
色譜柱是化學(xué)實(shí)驗(yàn)中常見、常用的化工儀器之一，正確而有效的使用方法，不僅能夠延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，也能確保試驗(yàn)的準(zhǔn)確性。
1、“保護(hù)柱”的使用
保護(hù)柱是很短的色譜柱，填裝和液相色譜柱相同的填料。正確使用”保護(hù)柱”，可以起到阻攔一些容易損壞液相色譜柱的物質(zhì)的作用。從而達(dá)到延長(zhǎng)柱子壽命的效果。相反，如果使用”保護(hù)柱”不當(dāng)，可能會(huì)縮短色譜柱的使用壽命。例如，在保護(hù)柱使用過(guò)程中，如果污染達(dá)到一定程度而沒有及時(shí)更換，累積的雜物很可能會(huì)沖入色譜柱中，反而會(huì)造成色譜柱損壞。因此，在使用”保護(hù)柱”時(shí)，重要的是要知道什幺時(shí)候該換保護(hù)柱。該換的時(shí)候就必須要立即更換。
2、選擇高品質(zhì)的柱子
一般認(rèn)為同一廠牌、同一型號(hào)的柱子之間的品質(zhì)都相同，對(duì)品質(zhì)管理很嚴(yán)格的廠家而言，這說(shuō)法是成立的。但如果廠家品質(zhì)管理不夠嚴(yán)格，即使是同一批號(hào)的新柱子之間的品質(zhì)也有差異。所以，選用柱子時(shí)必須選擇管理嚴(yán)格的高品質(zhì)柱子，我們知道，任何柱子使用過(guò)后都會(huì)產(chǎn)生變化。尤其如在強(qiáng)酸或強(qiáng)堿條件下使用，柱子更易產(chǎn)生變化。因此，應(yīng)盡量選用pH適用范圍大的柱子。在開發(fā)新分析方法時(shí)，許多專家建議不要使用舊柱子。因柱子一經(jīng)使用。柱性會(huì)改變；如此一來(lái)，使用舊柱子開發(fā)出來(lái)的新分析方法，很可能在再使用同廠牌的新柱子分析時(shí)。發(fā)生無(wú)法達(dá)到預(yù)定效果的情況?？偟恼f(shuō)。開發(fā)新分析方法時(shí)要使用品質(zhì)好的新柱子；并且一支柱子可以使用在一種分析方法上；則柱子壽命可以延長(zhǎng)。
3、定期沖洗色譜柱
一般柱子使用一段時(shí)間后總會(huì)有一些雜質(zhì)累積在柱內(nèi)，而且這些雜質(zhì)不會(huì)隨著流動(dòng)相出來(lái)，會(huì)逐漸影響柱子的品質(zhì)。這些雜質(zhì)在后來(lái)的分析譜圖上出現(xiàn)。從而造成出現(xiàn)怪峰、基線不平等現(xiàn)象。簡(jiǎn)單的解決方法是用較強(qiáng)的流動(dòng)相沖洗。而且每次分析某一產(chǎn)品完成后沖洗。如果分析時(shí)使用緩沖劑﹐可以用水來(lái)取代緩沖劑。先使用有機(jī)和水的混合溶液為流動(dòng)相沖洗緩沖劑。接著再用100%有機(jī)溶劑沖洗。如果直接用100%有機(jī)溶劑沖洗的話，緩沖劑很可能會(huì)沉淀出來(lái)，而損壞柱子的品質(zhì)。使用10-20倍柱體積的量來(lái)沖洗基本就足夠了。可以將100%有機(jī)溶劑沖洗的條件加在分析實(shí)驗(yàn)程序完畢后，如此一來(lái)每天在開機(jī)前都會(huì)用100%機(jī)溶劑沖洗。一般硅膠柱可以反沖洗處理﹐即是在將沖洗前將柱子倒反接后再?zèng)_洗。打算使用反沖洗處理前，可以先參考柱子的保養(yǎng)說(shuō)明書。所以要真正保護(hù)柱子，使柱子的壽命延長(zhǎng)，可以是使用”保護(hù)柱”和定期沖洗柱子。
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