高效液相色譜儀的工作過程：
儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相) 內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。以下是總結(jié)高效液相色譜儀的的應(yīng)用：
1、在食品分析中的應(yīng)用
食品營養(yǎng)成分分析：蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、色素、維生素、香料、有機(jī)酸（鄰苯二甲酸、檸檬酸、蘋果酸等）、有機(jī)胺、礦物質(zhì)等；
食品添加劑分析：甜味劑、防腐劑、著色劑（合成色素如檸檬黃、莧菜紅、靛藍(lán)、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)等）、抗氧化劑等；
食品污染物分析：霉菌毒素（黃曲霉毒素、黃桿菌毒素、大腸桿菌毒素等）、微量元素、多環(huán)芳烴等。
2、在環(huán)境分析中的應(yīng)用
多環(huán)芳烴（特別是稠環(huán)芳烴）、農(nóng)藥（如氨基甲酸脂類，反相色譜）殘留等。
3、在生命科學(xué)中的應(yīng)用
HPLC技術(shù)目前已成為生物化學(xué)家和醫(yī)學(xué)家在分子水平上研究生命科學(xué)、遺傳工程、臨床化學(xué)、分子生物學(xué)等必不可少的工具。其在生化領(lǐng)域的應(yīng)用主要集中于兩個(gè)方面：
低分子量物質(zhì)，如氨基酸、有機(jī)酸、有機(jī)胺、類固醇、卟啉、糖類、維生素等的分離和測(cè)定。
高分子量物質(zhì)，如多肽、核糖核酸、蛋白質(zhì)和酶（各種胰島素、激素、細(xì)胞色素、干擾素等）的純化、分離和測(cè)定。
4、在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用
體液中代謝物測(cè)定；藥代動(dòng)力學(xué)研究；臨床藥物監(jiān)測(cè)：
合成藥物：抗生素、抗憂郁藥物（冬眠靈、氯丙咪嗪、安定、利眠寧、苯巴比妥等）、黃胺類藥等。
天然藥物生物堿（吲哚堿、顛茄堿、鴉片堿、強(qiáng)心甙）等
液相色譜儀的日常維護(hù)與注意事項(xiàng)
一、日常維護(hù)：
1.定期清洗單向閥：將單向閥卸下，一般先用純凈水超聲10分鐘，然后用異丙醇超聲，10分鐘；也可直接用異丙醇超聲10分鐘。
2.定期清洗吸濾頭：將吸濾頭卸下，一般先用純凈水超聲10分鐘，然后用異丙醇超聲10分鐘；也可直接用異丙醇超聲10分鐘。
3.定期沖洗檢測(cè)池：把色譜柱卸下，在流速1.0ml/min的狀態(tài)下先用純凈水沖洗30分鐘，然后再用30%
磷酸（色譜級(jí)）沖洗30分鐘左右，再用超純水沖洗至流出液為中性，最后用甲醇沖洗，待用。
二、注意事項(xiàng)：
1.開始進(jìn)樣前30分鐘開氘燈即可，節(jié)約燈的能量和使用時(shí)間。
2.流動(dòng)相的使用和注意事項(xiàng)：
?、偎昧鲃?dòng)相必須預(yù)先濾過和脫氣，流動(dòng)相一般貯存于玻璃不銹鋼容器內(nèi)。貯存容器一定要蓋嚴(yán)，防止溶劑揮發(fā)引起組成變化。磷酸鹽、乙酸鹽緩沖液很易長(zhǎng)霉，應(yīng)盡量新鮮配制使用，不要長(zhǎng)期貯存。容器應(yīng)定期清洗，特別是盛水、緩沖液和混合溶液的瓶子，以除去底部的雜質(zhì)沉淀和可能生長(zhǎng)的微生物。
?、谂渲屏鲃?dòng)相用水需為娃哈哈牌純凈水或經(jīng)超聲過濾后的純化水，流動(dòng)相配制好后先用直徑為5cm，孔徑為0.45ｕm的濾膜，通過沙芯過濾器的過濾，然后在超聲儀上超聲。
?、鄄坏脤⒀b流動(dòng)相的容器直接放置與超聲儀內(nèi)，需放與篩網(wǎng)上進(jìn)行超聲。
3.六通閥的使用和維護(hù)注意事項(xiàng)：
?、贅悠啡芤哼M(jìn)樣前必須用濾膜過濾，以減少微粒對(duì)進(jìn)樣閥的磨損。
②轉(zhuǎn)動(dòng)閥芯時(shí)不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動(dòng)相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增，甚至超過泵的最大壓力；再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時(shí)，過高的壓力將使柱頭損壞。
③為防止緩沖鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。通?？捎盟疀_洗，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗。
4.色譜柱柱壓升高的主要因素：
?、貺C-10AT/20AT/10ATPlus泵的單向閥堵塞。
?、谏V柱的入口篩板堵塞。
③吸濾頭堵塞。
?、躊EEK管接口處堵塞。
5.色譜柱柱壓不穩(wěn)的因素：
?、俦脙?nèi)有空氣。
?、诒?span title="密封墊" target="_blank">密封墊損壞。
?、廴軇┲械臍馀?。
?、芟到y(tǒng)檢漏，找出漏點(diǎn)。
6.樣品峰保留時(shí)間漂移的主要因素：
①室內(nèi)溫度變化過大。
?、诹鲃?dòng)相成分發(fā)生變化。
?、凵V柱未平衡好。
④泵中有氣泡。
⑤該流動(dòng)相是否適宜此樣品的檢測(cè)。
7.基線漂移的主要因素：
?、僦鶞夭▌?dòng)。
②流動(dòng)相不均勻。
?、哿魍ǔ乇晃廴净蛴袣怏w。
?、軝z測(cè)器出口阻塞。
?、萘鲃?dòng)相配比不當(dāng)或流速變化。
?、蘖鲃?dòng)相污染、變質(zhì)。
⑦使用循環(huán)溶劑。
8.檢測(cè)器靈敏度不夠的主要因素：
?、贅悠愤M(jìn)樣量不足。
?、诓ㄩL(zhǎng)設(shè)置不正確。
?、蹤z測(cè)器池窗污染。
④檢測(cè)池中有氣泡。
⑤電壓不穩(wěn)。
⑥流動(dòng)相流速不合適。
9.色譜柱的使用和維護(hù)注意事項(xiàng)：
?、俦苊鈮毫蜏囟鹊募眲∽兓叭魏螜C(jī)械震動(dòng)。柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過緩。
?、趹?yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?/p>
?、垡话阏f來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。
?、苓x擇使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。
?、荼苊鈱?fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。
⑥經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。
?、弑４嫔V柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對(duì)禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置至次日或更長(zhǎng)時(shí)間。
?、嗌V柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是濾片被堵塞，這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。
?、嵋怨枘z為基質(zhì)的填料，只能在pH2~9范圍內(nèi)使用。每次分析檢測(cè)完成后，可以用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。
10.樣品必須用直徑為2.5cm，孔徑為0.45ｕm的濾膜針式過濾。如有明確要求需用離心過濾的，經(jīng)離心過濾后取上清液即可。
449717568
