液相色譜儀的酸清洗和鈍化方法
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南昌捷島科儀專業(yè)生產(chǎn)銷(xiāo)售捷島牌GC1690系列，GC1620系列氣相色譜儀，并代理銷(xiāo)售、培訓(xùn)、維修上海伍豐、沃特世/Waters、安捷倫、島津、上海儀電上分廠、賽默飛世爾等國(guó)內(nèi)外知名品牌氣相色譜儀、液相色譜儀及其配件耗材，優(yōu)惠價(jià)格、培訓(xùn)、維修請(qǐng)銷(xiāo)售、培訓(xùn)和維修統(tǒng)一客服，：，歡迎經(jīng)銷(xiāo)商和終端用戶在線或與訂購(gòu)，謝謝！
30％磷酸水溶液通過(guò)酸反應(yīng)和強(qiáng)表面活性劑／洗滌劑的共同作用，可以有效地清潔不銹鋼及其它潤(rùn)濕的部件。這一方法比更常用的硝酸“鈍化”更有效、且較少損害(特別是對(duì)日常使用低紫外波長(zhǎng)的應(yīng)用來(lái)說(shuō))。這一磷酸清洗步驟不是起鈍化作用，但它是系統(tǒng)鈍化前清洗的*步。
一般來(lái)說(shuō)，對(duì)于陽(yáng)離子的離子色譜分析或配有氧化方式的電化學(xué)檢測(cè)器以外的應(yīng)用不需要鈍化系統(tǒng)。因?yàn)橛姓婵彰摎鈾C(jī)(每個(gè)通道體積為8m1)，可不必用磷酸；中洗全部通道。如果你計(jì)劃四個(gè)通道都要用，則可用濕灌注的方式以4mL／min流速對(duì)每個(gè)通道清洗8～1 O分鐘來(lái)清洗脫氣機(jī)。這一步完成后你必須徹底淋洗管路，用水淋洗2～3次以便將磷酸從溶劑過(guò)濾頭等部件沖洗凈。
安裝好的HPLC系統(tǒng)的酸清洗和鈍化
HPLC系統(tǒng)內(nèi)部可能的污染物來(lái)自人的觸摸，暴露在實(shí)驗(yàn)室化學(xué)環(huán)境，與零部件制造相關(guān)的殘留物，或來(lái)自先前的流動(dòng)相和樣品的殘余物。
雖然系統(tǒng)自身也會(huì)逐步地被流動(dòng)相清洗，但某些釋放出的雜質(zhì)會(huì)吸附在色譜柱上以及檢測(cè)器潤(rùn)濕的表面上，因而會(huì)降低總的性能。
磷酸清洗：
通常用于從系統(tǒng)中除去有機(jī)雜質(zhì)?？赡苁怯捎谙礈熳饔?，它似乎比強(qiáng)有機(jī)溶劑更好也更快。這一步清洗必須在硝酸鈍化之前完成。
硝酸鈍化：
實(shí)際上是作用于不銹鋼表面，在表面上生成均勻的氧化層。這層氧化膜保護(hù)不銹鋼免受腐蝕(鹵化物，螯合劑，等等)并且盡量減少浸出的金屬離子進(jìn)入流動(dòng)相。
以下應(yīng)用需要在使用前做磷酸清洗和硝酸鈍化，包括：
①所有的氨基酸分析系統(tǒng)；
②所有包含電化學(xué)檢測(cè)器的系統(tǒng)；
③所有要分析無(wú)機(jī)陽(yáng)離子，包括過(guò)渡金屬的系統(tǒng)；
④所有利用柱后添加衍生試劑或絡(luò)合樣品組分的系統(tǒng)。
以下應(yīng)用需要在使用前只做磷酸清洗，包括：
①所有常規(guī)用途的、可能在低pH環(huán)境下在低紫外檢測(cè)波長(zhǎng)下運(yùn)行的HPLC系統(tǒng)；
②所有需要高靈敏度性能的梯度紫外檢測(cè)系統(tǒng)。
系統(tǒng)清洗指南：
注意：在實(shí)行這個(gè)程序時(shí)采用適當(dāng)?shù)陌踩雷o(hù)措施準(zhǔn)備工作：
首先，摘下色譜柱，用兩通或接頭取代色譜柱。在實(shí)行這一清洗步驟時(shí)，如果有可能選擇監(jiān)測(cè)的紫外波長(zhǎng)為：254nm。通過(guò)軟件或移去電纜的方式取消紫外檢測(cè)器的自動(dòng)回零功能。
具體步驟：
1、用甲醇徹底沖洗系統(tǒng)，以等比例方式通過(guò)泵的所有管路。
2、用水徹底沖洗系統(tǒng)，以等比例方式通過(guò)泵的所有管路。
3、以等比例方式通過(guò)泵的所有管路導(dǎo)入～30％v／v磷酸水溶液。以1mL/min流速洗大約一個(gè)小時(shí)。在沖洗期間活動(dòng)所有的閥，包括：參比閥、進(jìn)樣閥及旁路閥等等。
4．用水徹底沖洗所有管路和系統(tǒng)。
必要時(shí)用6N硝酸(HN03)重復(fù)以上步驟。否則，跳到第7步。注意：硝酸是一個(gè)強(qiáng)紫外吸收溶液。除非需要，不要做鈍化程序。
5．以等比例方式通過(guò)泵的所有管路導(dǎo)人6N硝酸水溶液(大約是40％)。以1mL/min流速洗大約一個(gè)小時(shí)。
6．用水徹底沖洗系統(tǒng)，仔細(xì)檢查是否有任何滲漏，在沖洗期間反復(fù)活動(dòng)所有的閥，包括：參比閥、進(jìn)樣閥及旁路閥等等。
注意：如果你要用低于270nm的紫外波長(zhǎng)作檢測(cè)，則需要更大量水的清洗過(guò)程，不斷的換新鮮水并活動(dòng)各個(gè)閥(沖洗進(jìn)樣器，等)以便從系統(tǒng)中除去所有的痕量硝酸根離子。硝酸清洗后經(jīng)常在幾天之內(nèi)都會(huì)觀察到在低紫外波長(zhǎng)下有負(fù)的基線漂移。勤換水和有耐心是盡快消除紫外本底的關(guān)鍵。
7．返回到甲醇洗，然后繼續(xù)用實(shí)驗(yàn)所需的溶劑沖洗。
8．通過(guò)軟件或接上電纜的方式重新使紫外檢測(cè)器的自動(dòng)回零功能恢復(fù).
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1、液相色譜儀整機(jī)保養(yǎng)
?。?）短期停機(jī)
在完成一天工作以后，都要停機(jī)等第二天再繼續(xù)工作，則可按以下步驟停機(jī)。
A）關(guān)閉二次儀表（記錄儀、積分儀或色譜工作站）。
B）關(guān)閉檢測(cè)器電源（同時(shí)切斷柱箱溫度檢測(cè)器的電源）。
C）停止恒流泵工作，然后切斷其電源。
D）用二次蒸餾水沖洗進(jìn)樣閥的進(jìn)樣孔（在“LOAD”和“INJECT”兩個(gè)位置）。
E）切斷實(shí)驗(yàn)室工作電源，加滿盛液瓶中的流動(dòng)相，待第二天使用。
F）將儀器罩上防塵罩。
（2）長(zhǎng)期停機(jī)
液相色譜儀數(shù)周或數(shù)月暫不使用，這時(shí)除按《短期停機(jī)》的A）～D）步驟處理外，還須完成以下步驟：
A）拆下恒流泵的流動(dòng)相盛液瓶，換上色譜柱指定的保護(hù)試劑（例：甲醇、去離子水等），開(kāi)啟泵數(shù)分鐘（流速0.5mL/min~1.5mL/min）后停泵。
B）從系統(tǒng)中拆下色譜柱，用專用的密封螺帽將柱管兩端密封后保存。
C）用普通φ1.6導(dǎo)管替代分離柱聯(lián)結(jié)。
D）用二次蒸餾水或去離子水輸入輸液泵，開(kāi)啟泵，流量1mL/min~2mL/min，沖洗泵體、進(jìn)樣閥、檢測(cè)器流通池?cái)?shù)分鐘，在沖洗過(guò)程切換六通閥數(shù)次，使定量管得到清洗。
E）拆除替代柱的導(dǎo)管、泵輸入端和出口的導(dǎo)管和流通池輸入、輸出口導(dǎo)管，分別用螺帽密封輸液泵出口和流通池輸入、輸出口。
F）撥下總電源接線板的插頭，貯存好專用的流動(dòng)相和樣品，用干布擦洗儀器，罩上防塵罩。
G）檢測(cè)器存放地點(diǎn)應(yīng)干燥
2、液相色譜儀輸液泵的保養(yǎng)
輸液泵是液相色譜儀的心臟部件，品質(zhì)再好的泵，若不注意日常保養(yǎng)，其損壞的幾率是極高的，將大大降低儀器的使用價(jià)值。
a)使用甲醇作流動(dòng)相，請(qǐng)注意自身保護(hù)和環(huán)境保護(hù)，廢液注入空瓶?jī)?nèi)，集中處理，不得倒入下水道內(nèi)。
b)輸液泵使用前，先注意探漏檢查，視各密封點(diǎn)和泵體有否漏液。
c)在無(wú)流動(dòng)相通入的情況下，嚴(yán)禁啟動(dòng)泵體電機(jī)，以免柱塞密封環(huán)磨損。
d)測(cè)試泵流量性能時(shí)，用于收集液體的容器，應(yīng)選用小口瓶頸的容器，防止收集過(guò)程中，溶液蒸發(fā)，影響測(cè)量精度。，必要時(shí)應(yīng)將其密封存放在干燥容器內(nèi)，以預(yù)防光學(xué)系統(tǒng)霉變。
e)金屬泵體的輸液泵，應(yīng)盡量避免使用含有鹵離子（如KCL、NaCL、NH4CL）的流動(dòng)相或能產(chǎn)生鹵離子的流動(dòng)相，若必須使用此類(lèi)流動(dòng)相，建議使用泵體用非金屬材料制造的輸液泵。方則使用后，應(yīng)立即使用去離子水清洗泵體和整個(gè)色譜系統(tǒng)的管路。
f)使用的流動(dòng)相必須是HPLC級(jí)或分析純級(jí)，特別是配置的流動(dòng)相，在使用前，必須過(guò)濾掉其中的顆粒狀雜質(zhì)和其他物質(zhì)（使用0.45μm的濾膜過(guò)濾）
g)長(zhǎng)期不使用輸液泵，應(yīng)在最后分析結(jié)束時(shí)，用注射器吸取去離子水通過(guò)專用的泵頭清洗孔清洗泵體和柱塞桿。以延長(zhǎng)密封圈和寶石柱塞桿的壽命。
h)輸液泵液路在維修或保養(yǎng)時(shí)，應(yīng)切斷儀器電源。非專業(yè)維修人員請(qǐng)不要打開(kāi)機(jī)箱罩。
液相色譜儀的應(yīng)用，可用于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差以及具有生理活性物質(zhì)的分析。一般來(lái)說(shuō)，沸點(diǎn)在450℃以下，相對(duì)分子質(zhì)量小于450的有機(jī)物可用液相色譜儀分析，但這些物質(zhì)只占有機(jī)物的15%～20%，其余的80%～85%有機(jī)物原則上都可采用高效液相色譜儀分析。
色譜柱的使用和維護(hù)，色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。
在色譜操作過(guò)程中，需要注意下列問(wèn)題，以維護(hù)色譜柱。調(diào)節(jié)流速太快，避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過(guò)緩。
反沖色譜柱，一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效，預(yù)柱和保護(hù)柱，選擇使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。
有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)，由輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等組成。
工作原理，利用混合物各組分在固定相和流動(dòng)相中溶解、分配或吸附等化學(xué)作用性能的差異，使各組分在作相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩相中反復(fù)多次受到上述各作用力而達(dá)到相互分離。
從液相色譜儀工作流程中看到，色譜柱是實(shí)現(xiàn)分離的核心部件，要求柱效高、柱容量大和性能穩(wěn)定。柱性能與柱結(jié)構(gòu)、填料特性、填充質(zhì)量和使用條件有關(guān)。
色譜填料：經(jīng)過(guò)制備處理后，用于填充色譜柱的物質(zhì)顆粒，通常是5-10粒徑的球形顆粒。
色譜柱管：內(nèi)部拋光的不銹鋼管。典型的液相色譜分析柱尺寸是內(nèi)徑4.6mm，長(zhǎng)250mm。
色譜柱：也稱固定相，是將色譜填料填充到色譜柱管中所構(gòu)成的，色譜柱的填充，干法填充：在硬臺(tái)面上鋪上軟墊，將空柱管上端打開(kāi)垂直放在軟墊上，用漏斗每次灌入50-100mg填料，然后垂直臺(tái)面墩10-20次。
濕法填充：又稱淤漿填充法，使用專門(mén)的填充裝置。
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