液相色譜儀是一種常見(jiàn)的色譜分析方法，與氣相色譜相比液相色譜可以在常溫中操作，且不受樣品揮發(fā)度和熱穩(wěn)定性的限制。這使得液相色譜非常適合相對(duì)分子量較大，難汽化，不易揮發(fā)或?qū)崦舾械奈镔|(zhì)、離子型化合物和高聚物的分離分析。
然而要選購(gòu)一臺(tái)品質(zhì)優(yōu)良的液相色譜并不容易。液相色譜儀的指標(biāo)很多，有關(guān)于泵的、關(guān)于檢測(cè)器的、關(guān)于色譜柱的……不過(guò)，從選購(gòu)角度考慮，可以?xún)?yōu)先考慮噪音、漂移、最小檢測(cè)濃度、定性定量重復(fù)性等主要技術(shù)指標(biāo)。當(dāng)然，這些指標(biāo)都要放在系統(tǒng)、回路里去看去比較。
1.噪音
噪音指由儀器的電器元件、溫度波動(dòng)、電壓的線(xiàn)性脈沖以及其他非溶質(zhì)作用產(chǎn)生的高頻噪聲和基線(xiàn)的無(wú)規(guī)則波動(dòng)產(chǎn)生的聲音。噪音的大小直接關(guān)系到儀器的檢測(cè)靈敏度，噪音越大檢測(cè)的靈敏度就越低。對(duì)于檢測(cè)低含量的樣品就要求儀器的噪音越小越好，否則噪音過(guò)大將會(huì)導(dǎo)致基線(xiàn)不穩(wěn)，甚至影響分析結(jié)果；
2.最小檢測(cè)濃度(最小檢測(cè)限)
最小檢測(cè)濃度是反映儀器靈敏度的重要參數(shù)。根據(jù)公式CL=2×Nd×C/H(CL：最小檢測(cè)濃度 Nd：噪音 C：樣品濃度最小檢測(cè)濃度 H：樣品峰高)，最小檢測(cè)濃度是和噪音成正比的，噪音越大，最小檢測(cè)濃度就越大，靈敏度就越低。如果選購(gòu)的儀器回避了這個(gè)指標(biāo)，說(shuō)明他們不愿在最小檢測(cè)濃度的基礎(chǔ)上去比較噪音；
3.漂移
漂移是指儀器穩(wěn)定后一段時(shí)間內(nèi)基線(xiàn)漂離原點(diǎn)的距離，通常用來(lái)衡量?jī)x器穩(wěn)定快慢。高品質(zhì)的儀器能在較短的時(shí)間內(nèi)達(dá)到穩(wěn)定，從而在一定程度上提高分析效率；
4.定性定量重復(fù)性
主要是考核儀器穩(wěn)定性的指標(biāo)，這對(duì)于分析樣品來(lái)說(shuō)是非常重要的。好的儀器其穩(wěn)定性應(yīng)該是十分不錯(cuò)的，這就要求多次進(jìn)樣保留時(shí)間及含量的一致性，這樣做出來(lái)的結(jié)果才能使人信服。雖然這些指標(biāo)都屬于檢測(cè)器，但是就像前面所說(shuō)的，條件是要放在整個(gè)回路和系統(tǒng)里去看去比較。
例如：泵的脈動(dòng)會(huì)直接影響噪音指標(biāo)、泵的流量準(zhǔn)確度指標(biāo)，以及密封性不好也會(huì)影響相關(guān)指標(biāo)。所以要系統(tǒng)地看指標(biāo)才可以反應(yīng)出儀器的一些真實(shí)水平。
在選擇儀器的時(shí)候需要充分考慮到儀器的方方面面才能拿到自己滿(mǎn)意的機(jī)器。
首先從常規(guī)的幾個(gè)部件做個(gè)簡(jiǎn)單的分析。
（一）輸液泵應(yīng)具備如下性能：
① RSD（流量穩(wěn)定性）<0.3%;
② 流量范圍寬， 0.1～5.0ml/min內(nèi)連續(xù)可調(diào)，有的實(shí)驗(yàn)則需要更大流量;
③ 輸出壓一般應(yīng)能達(dá)到150~400 kg/cm2,流量越大,最高壓力越低;
④ 液缸容積小,有助于減少流動(dòng)相死體積，利于清洗。
⑤ 密封性能好，耐腐蝕。
（二）檢測(cè)器
①紫外檢測(cè)器，分為可變單波長(zhǎng)檢測(cè)器VWD和二極管陣列檢測(cè)器DAD，可以檢測(cè)有紫外吸收的物質(zhì)
②熒光檢測(cè)器，檢測(cè)有熒光的物質(zhì)
③視差折光檢測(cè)器，通用型檢測(cè)器，但對(duì)環(huán)境要求極為苛刻，而且靈敏度低
④ELSD，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器
⑤MSD，質(zhì)譜檢測(cè)器
常用的是紫外檢測(cè)，然后是MSD和ELSD
（三）色譜柱
要求柱效高、選擇性好，分析速度快等。目前市場(chǎng)上銷(xiāo)售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、有機(jī)聚合物微球(包括離子交換樹(shù)脂)、氧化鋁、多孔碳等，其粒度一般為3,5,7,10μm等，柱效理論值可達(dá)5~16萬(wàn)/米。
一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效;同系物分析500即可;難分離物則可用2萬(wàn)的柱子。
因此一般10~30cm左右的柱長(zhǎng)基本能滿(mǎn)足復(fù)雜混合物分析的需要。所以要根據(jù)自己實(shí)際情況來(lái)選擇合適的柱子。
柱效受柱內(nèi)外因素影響，為使色譜柱達(dá)到較佳效率，除柱外死體積要小外，還要有合理的柱結(jié)構(gòu)(盡可能減少填充床以外的死體積)及裝填技術(shù)。即使可以的裝填技術(shù)，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的，靠近管壁的部位比較疏松，易產(chǎn)生溝流，流速較快，影響沖洗劑的流形，使譜帶加寬，這就是管壁效應(yīng)。這種管壁區(qū)大約是從管壁向內(nèi)算起30倍粒徑的厚度。在一般的液相色譜系統(tǒng)中，柱外效應(yīng)對(duì)柱效的影響遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于管壁效應(yīng)。
此外，溫度在色譜分析中是個(gè)不容忽視的環(huán)境條件，環(huán)境溫度對(duì)溶劑的溶解能力、色譜柱的性能、流動(dòng)相的粘度都有影響。而且不同的檢測(cè)器對(duì)溫度的敏感度不一樣。保持恒定的溫度對(duì)實(shí)驗(yàn)而言是個(gè)絕對(duì)不容忽視的條件，因此也要留意注溫箱的選擇。以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
（四）進(jìn)樣器
進(jìn)樣裝置要求：密封性好，重復(fù)性好，死體積小，保證中心進(jìn)樣，進(jìn)樣時(shí)對(duì)色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小。而且進(jìn)樣方式多種多樣，可分為隔膜進(jìn)樣、停流進(jìn)樣、閥進(jìn)樣、自動(dòng)進(jìn)樣。自動(dòng)進(jìn)樣器則是市場(chǎng)發(fā)展的趨勢(shì)。
（五）數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)
一般專(zhuān)業(yè)的液相色譜儀生產(chǎn)廠(chǎng)家都有自己配套的液相色譜儀控制軟件。但有不少液相色譜儀可以使用通用型的色譜數(shù)據(jù)工作站進(jìn)行數(shù)據(jù)計(jì)算處理。進(jìn)口軟件價(jià)格比較高，這個(gè)自己得根據(jù)資金選擇了。
二元泵和四元泵的區(qū)別二元有兩個(gè)泵，泵后混合，氣體的溶解度隨壓力的增大而增大，所以二元高壓混合不會(huì)產(chǎn)生氣泡。四元只一個(gè)泵（另外一個(gè)是輔泵），是泵前混合，在常壓下進(jìn)行的，兩種液體混合時(shí)，會(huì)降低氣體在混合溶液中的溶解度，通常會(huì)有氣泡產(chǎn)生，所以四元低壓梯度系統(tǒng)一定要配在線(xiàn)真空脫氣機(jī)
高效液相色譜儀分析中進(jìn)樣基線(xiàn)很好，保留時(shí)間能鎖定，壓力也穩(wěn)定，但是峰面積差別很大，大概有2倍的差別，這種情況出現(xiàn)的原因可能是多方面的，建議采用以下方法解決：
1、調(diào)換一根新色譜柱，如果情況一樣，則排除柱子的原因。
2、將在線(xiàn)過(guò)濾器拆下，用超聲波清洗，如果結(jié)果一樣，說(shuō)明與在線(xiàn)過(guò)濾器無(wú)關(guān)。
3、考慮是不是進(jìn)樣閥有問(wèn)題或者定量環(huán)堵。建議多進(jìn)幾針樣品，看是否有規(guī)律，如果沒(méi)有規(guī)律，應(yīng)檢查一下進(jìn)樣器的其他部位，如果是進(jìn)樣器系統(tǒng)出現(xiàn)問(wèn)題，應(yīng)盡快解決之。
4、對(duì)進(jìn)樣器清洗一下，清洗干凈后先進(jìn)一針空白，再進(jìn)樣，看看結(jié)果如何，如果有明顯減少，那可能是進(jìn)樣器污染，有樣品殘留在進(jìn)樣閥體內(nèi)，在切換的過(guò)程中被流動(dòng)相帶入色譜柱。
5、考慮樣品溶液是否均勻。建議同一個(gè)濃度連續(xù)進(jìn)樣5次，看一下結(jié)果如何變化，有沒(méi)有規(guī)律；如果是樣品溶液不均勻，可以再攪拌一下。
6、考慮光源是不是正常。
7、考慮濃度是否在線(xiàn)性范圍內(nèi)。有時(shí)候定量時(shí)濃度太高或太低都會(huì)產(chǎn)生較大的分析誤差。
8、考慮取樣方式是否正確，每次取樣后是否對(duì)針頭外面的附著液進(jìn)行清除。
9、高效液相色譜儀的計(jì)算機(jī)軟件編制可能存在問(wèn)題。對(duì)比可以適當(dāng)改變軟件。
高效液相色譜儀是實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)的儀器之一，色譜柱的靈敏度是確保實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性的重要原因，那么當(dāng)色譜柱的靈敏度不夠時(shí)，我們?cè)撊绾稳ソ鉀Q呢？應(yīng)該從以下幾個(gè)方面去分析：
1、樣品量不足：解決辦法為增加樣品量
2、樣品未從色譜柱中流出：可根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子
3、樣品與檢測(cè)器不匹配：根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長(zhǎng)或改換檢測(cè)器
4、檢測(cè)器衰減太多：調(diào)整衰減即可。
5、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大：解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)
6、檢測(cè)器池窗污染：解決辦法為清洗池窗。
7、檢測(cè)池中有氣泡：解決辦法為排氣。
8、記錄儀測(cè)壓范圍不當(dāng)：調(diào)整電壓范圍即可。
9、流動(dòng)相流量不合適：調(diào)整流速即可。
10、檢測(cè)器與記錄儀超出校正曲線(xiàn)：解決辦法為檢查記錄儀與檢測(cè)器，重作校正曲線(xiàn)。
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