1、液相色譜儀整機保養(yǎng)
?。?）短期停機
在完成一天工作以后，都要停機等第二天再繼續(xù)工作，則可按以下步驟停機。
A）關閉二次儀表（記錄儀、積分儀或色譜工作站）。
B）關閉檢測器電源（同時切斷柱箱溫度檢測器的電源）。
C）停止恒流泵工作，然后切斷其電源。
D）用二次蒸餾水沖洗進樣閥的進樣孔（在“LOAD”和“INJECT”兩個位置）。
E）切斷實驗室工作電源，加滿盛液瓶中的流動相，待第二天使用。
F）將儀器罩上防塵罩。
?。?）長期停機
液相色譜儀數(shù)周或數(shù)月暫不使用，這時除按《短期停機》的A）～D）步驟處理外，還須完成以下步驟：
A）拆下恒流泵的流動相盛液瓶，換上色譜柱指定的保護試劑（例：甲醇、去離子水等），開啟泵數(shù)分鐘（流速0.5mL/min~1.5mL/min）后停泵。
B）從系統(tǒng)中拆下色譜柱，用專用的密封螺帽將柱管兩端密封后保存。
C）用普通φ1.6導管替代分離柱聯(lián)結。
D）用二次蒸餾水或去離子水輸入輸液泵，開啟泵，流量1mL/min~2mL/min，沖洗泵體、進樣閥、檢測器流通池數(shù)分鐘，在沖洗過程切換六通閥數(shù)次，使定量管得到清洗。
E）拆除替代柱的導管、泵輸入端和出口的導管和流通池輸入、輸出口導管，分別用螺帽密封輸液泵出口和流通池輸入、輸出口。
F）撥下總電源接線板的插頭，貯存好專用的流動相和樣品，用干布擦洗儀器，罩上防塵罩。
G）檢測器存放地點應干燥
2、液相色譜儀輸液泵的保養(yǎng)
輸液泵是液相色譜儀的心臟部件，品質再好的泵，若不注意日常保養(yǎng)，其損壞的幾率是極高的，將大大降低儀器的使用價值。
a)使用甲醇作流動相，請注意自身保護和環(huán)境保護，廢液注入空瓶內，集中處理，不得倒入下水道內。
b)輸液泵使用前，先注意探漏檢查，視各密封點和泵體有否漏液。
c)在無流動相通入的情況下，嚴禁啟動泵體電機，以免柱塞密封環(huán)磨損。
d)測試泵流量性能時，用于收集液體的容器，應選用小口瓶頸的容器，防止收集過程中，溶液蒸發(fā)，影響測量精度。，必要時應將其密封存放在干燥容器內，以預防光學系統(tǒng)霉變。
e)金屬泵體的輸液泵，應盡量避免使用含有鹵離子（如KCL、NaCL、NH4CL）的流動相或能產生鹵離子的流動相，若必須使用此類流動相，建議使用泵體用非金屬材料制造的輸液泵。方則使用后，應立即使用去離子水清洗泵體和整個色譜系統(tǒng)的管路。
f)使用的流動相必須是HPLC級或分析純級，特別是配置的流動相，在使用前，必須過濾掉其中的顆粒狀雜質和其他物質（使用0.45μm的濾膜過濾）
g)長期不使用輸液泵，應在最后分析結束時，用注射器吸取去離子水通過專用的泵頭清洗孔清洗泵體和柱塞桿。以延長密封圈和寶石柱塞桿的壽命。
h)輸液泵液路在維修或保養(yǎng)時，應切斷儀器電源。非專業(yè)維修人員請不要打開機箱罩。
液相色譜儀的應用，可用于高沸點、熱穩(wěn)定性差以及具有生理活性物質的分析。一般來說，沸點在450℃以下，相對分子質量小于450的有機物可用液相色譜儀分析，但這些物質只占有機物的15%～20%，其余的80%～85%有機物原則上都可采用高效液相色譜儀分析。
色譜柱的使用和維護，色譜柱的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。
在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。調節(jié)流速太快，避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內填料，因此在調節(jié)流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩。
反沖色譜柱，一般說來色譜柱不能反沖，只有生產者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速降低柱效，預柱和保護柱，選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。
有時可以在進樣器前面連接一預柱，分析柱是鍵合硅膠時，預柱為硅膠，可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質被溶解。
避免將基質復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內，需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經常更換。
液相色譜儀的基本結構，由輸液系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等組成。
工作原理，利用混合物各組分在固定相和流動相中溶解、分配或吸附等化學作用性能的差異，使各組分在作相對運動的兩相中反復多次受到上述各作用力而達到相互分離。
從液相色譜儀工作流程中看到，色譜柱是實現(xiàn)分離的核心部件，要求柱效高、柱容量大和性能穩(wěn)定。柱性能與柱結構、填料特性、填充質量和使用條件有關。
色譜填料：經過制備處理后，用于填充色譜柱的物質顆粒，通常是5-10粒徑的球形顆粒。
色譜柱管：內部拋光的不銹鋼管。典型的液相色譜分析柱尺寸是內徑4.6mm，長250mm。
色譜柱：也稱固定相，是將色譜填料填充到色譜柱管中所構成的，色譜柱的填充，干法填充：在硬臺面上鋪上軟墊，將空柱管上端打開垂直放在軟墊上，用漏斗每次灌入50-100mg填料，然后垂直臺面墩10-20次。
濕法填充：又稱淤漿填充法，使用專門的填充裝置。
氣相色譜儀或液相色譜儀操作中，當儀器的操作條件保持不變時，任一物質的色譜峰總是在色譜圖上固定的位置出現(xiàn)，即有一定的保留值。又包含：死時間，保留時間，校下保留時間，保留體積等等。
在液相色譜儀中保留值定性的方法主要是用直接與已知標準物對照的方法。當未知峰的保留值（t'R或V'R）與某一已知標準物完全相同時，則未知峰可能與此已知標準物是同一物質，特別是在改變色譜柱或改變洗脫液的組成時，未知峰的保留值與已知標準物的保留值仍能完全相同，則可以基本上認定未知峰與標準物是同一物質。
在利用保留值數(shù)據(jù)進行比對和定性分析時要特別注意到：由于液相色譜柱的填柱技術較復雜，液相色譜儀所使用的色譜柱的重現(xiàn)性目前還很不理想，即使是同一批號的柱子，重現(xiàn)性也不一致，這就使得使用保留值數(shù)據(jù)進行分析受到限制。因此，目前保留值數(shù)據(jù)只能作為定性分析的參考?？梢愿鶕?jù)這些數(shù)據(jù)和對樣品的了解來選用已知標準物，再用這些已知標準物與未知物在同一色譜條件下直接進行對比。
簡單的保留值定性方法是將已知標準物質加到樣品中去，若使某一峰增高，而且在改變色譜柱或洗脫液的組成后，仍能使這個峰增高，則可基本認定這個峰所代表的組分與已知標準物質為同一物質。
目前一些液相色譜儀儀器配備了三維圖譜檢測器，如二極管陣列檢測器，在進行未知組分與已知標準物質比對時，除了比較保留時間外，還可以比較兩個峰的立體圖形。如在使用二極管陣列檢測器時，除了比較未知組分與已知標準物質的保留時間外，還可比較兩者的紫外光譜圖，如果保留時間一樣，兩者的紫外光譜圖也完全一樣，則可基本上認定兩者是同一物質；若保留時間雖一樣，但兩者的紫外光譜圖有較大差別，則兩者不是同一物質。這種利用三維圖譜比較對照的方法大大提高了保留值比較定性方法的準確性。美國Bio-Rad公司的血藥分析儀（Remeeli）就是依靠三維圖譜的綜合數(shù)據(jù)的分析來鑒別未知藥物的。
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