液相色譜儀的日常操作條件:溫度:10-40℃;相對濕度<80%;可以是恒溫、恒濕,遠離高電干擾、高振動設備,使用后液相色譜儀檢測器的保養(yǎng)對液相色譜儀的使用壽命影響至關重要。
微小的顆粒雜質或薄膜沉積在流通池里,會導致基線噪聲的增加或降低靈敏度。此時必須進行清洗處理。一般常規(guī)清洗不必拆下流通池,可直接在流通池入口處(即檢測器輸入端),接上一個專用的注射器接頭,依次用去離子水、酒精和3MHNO3沖洗流通池,最后用去離子水反復沖洗數(shù)次。檢測器出口用玻璃瓶盛接流出的廢液。
若檢測器已長期使用或受到高濃度樣品的污染,經上述方法還不能除去污垢,就得取下流通池,液相色譜儀檢測器的保養(yǎng)按以下步驟拆開進行清洗:
1)卸下紫外檢測器側面遮蓋流通池的蓋板,松開固定流通池支架的螺釘,小心地取出流通池支架。
2)拆下連接流通池輸入、輸出端的不銹鋼導管(或PEEK導管),卸下流通池體。仔細擰下石英窗和透鏡的護圈。小心取下墊圈、石英窗、透鏡、護圈,放在一個盛有乙醇的燒杯內,用超聲波清洗機處理5min~10min。
3)用蒸餾水、乙醇沖洗流通池,并用超聲波清洗,最后用去離子水沖洗數(shù)次,除去池內雜物。
4)烘干各部件(注意:避免用手直接接觸透鏡及石英窗)。
5)重新裝配流通池體。
6)按原樣裝在流通池支架上,并接好導管,并進行試漏。(方法:池體輸入端與恒流泵連接,開啟恒流泵(流動相用蒸餾水),視各密封點及石英窗口是否有漏液溢出。
7)裝入紫外檢測器機箱內,蓋上蓋板,并用原螺釘、螺帽固定。
注:上述液相色譜儀檢測器的保養(yǎng)拆洗應有經培訓過的專業(yè)維修人員進行。
在高效液相色譜儀分析過程中,緩沖液是不可或缺的,因為要用它來調節(jié)流動相的pH值,緩沖鹽使用不當,后果可是吃不了兜著走。比如說,液相色譜儀的色譜柱壓升高、柱效下降、保留時間異常等等不良影響:
1、柱壓升高;
原因:緩沖鹽使用不當導致緩沖鹽析出,堵塞塞板和鍵合相顆粒之間的孔隙,阻礙流動相傳質,引起柱壓升高。
2、相同化合物的保留時間發(fā)生變化;
原因:如果沒有沖洗干凈就進行進樣,色譜柱內含有的鹽會使化合物的保留時間發(fā)生變化.
3、柱效下降;
原因:
i、有些緩沖鹽會滲入到鍵合相的深處,損害硅膠基體,導致色譜柱鍵合相流失,柱床變松,柱效下降;
ii、凝結在鍵合相表面,使C18碳鏈難以舒展,對物質的保留能力下降,導致柱效下降。因此液相色譜儀用過緩沖鹽后需要對色譜柱進行沖洗,水中緩沖鹽濃度較大時應特別引起注意。
高效液相色譜儀是實驗中常見的儀器之一,色譜柱的靈敏度是確保實驗準確性的重要原因,那么當色譜柱的靈敏度不夠時,我們該如何去解決呢?應該從以下幾個方面去分析:
1、樣品量不足:解決辦法為增加樣品量
2、樣品未從色譜柱中流出:可根據(jù)樣品的化學性質改變流動相或柱子
3、樣品與檢測器不匹配:根據(jù)樣品化學性質調整波長或改換檢測器
4、檢測器衰減太多:調整衰減即可。
5、檢測器時間常數(shù)太大:解決辦法為降低時間參數(shù)
6、檢測器池窗污染:解決辦法為清洗池窗。
7、檢測池中有氣泡:解決辦法為排氣。
8、記錄儀測壓范圍不當:調整電壓范圍即可。
9、流動相流量不合適:調整流速即可。
10、檢測器與記錄儀超出校正曲線:解決辦法為檢查記錄儀與檢測器,重作校正曲線。
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