分光光度計(jì)計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長的光源,通過系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長的光源,光源透過測試的樣品后,部分光源被吸收,計(jì)算樣品的吸光值,從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
分光光度計(jì)的光譜分布范圍:
包括波長范圍為400~760nm的可見光區(qū)和波長范圍為200~400nm的紫外光區(qū).不同的光源都有其特有的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源.
鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的400~760nm波長的光譜,光通過三棱鏡折射后,可得到由紅,橙,黃,綠,藍(lán),靛,紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見光分光光度計(jì)的光源.
氫燈(或氘燈)的發(fā)射光譜:氫燈能發(fā)出185~400nm波長的光譜,可作為紫外光光度計(jì)的光源.
物質(zhì)的吸收光譜
(1)如果在光源和棱鏡之間放上某種物質(zhì)的溶液,此時(shí)在屏上所顯示的光譜已不再是光源的光譜,它出現(xiàn)了幾條暗線,即光源發(fā)射光譜中某些波長的光因溶液吸收而消失,這種被溶液吸收后的光譜稱為該溶液的吸收光譜.不同物質(zhì)的吸收光譜是不同的.因此根據(jù)吸收光譜,可以鑒別溶液中所含的物質(zhì).物質(zhì)的吸收光譜
?。?)當(dāng)光線通過某種物質(zhì)的溶液時(shí),透過的光的強(qiáng)度減弱.因?yàn)橛幸徊糠止庠谌芤旱谋砻娣瓷浠蚍稚?一部分光被組成此溶液的物質(zhì)所吸收,只有一部分光可透過溶液.入射光=反射光分散光吸收光透過光如果我們用蒸餾水(或組成此溶液的溶劑)作為"空白"去校正反射,分散等因素造成的入射光的損失,則:入射光=吸收光十透過光。
分光光度計(jì)中zui簡單的和應(yīng)用zui普遍的一種。它的特點(diǎn)是只有一條光束。通過交換參比和樣品的位置,使其分別進(jìn)入光路。
在參比(溶劑)進(jìn)入光路時(shí),調(diào)零。然后將樣品進(jìn)入光路的信號(hào)和參比信號(hào)進(jìn)行比較,就可在顯示器上讀出樣品的透過率和吸光度。
分光光度計(jì)的保養(yǎng)方法
1.若大幅度改變測試波長,需稍等片刻,等燈熱平衡后,重新校正“0”和“100%”點(diǎn)。然后再測量。
2.指針式儀器在未接通電源時(shí),電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況,需進(jìn)行機(jī)械調(diào)零。
3.比色皿使用完畢后,請(qǐng)立即用蒸餾水沖洗干凈,并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去,以防止表面光潔度被破壞,影響比色皿的透光率。
4.操作人員不應(yīng)輕易動(dòng)燈泡及反光鏡燈,以免影響光效率。
5.1900型等分光光度計(jì),由于其光電接收裝置為光電倍增管,它本身的特點(diǎn)是放大倍數(shù)大,因而可以用于檢測微弱光電信號(hào),而不能用來檢測強(qiáng)光。
否則容易產(chǎn)生信號(hào)漂移,靈敏度下降。針對(duì)其上述特點(diǎn),在維修、使用此類儀器時(shí)應(yīng)注意不讓光電倍增管長時(shí)間暴露于光下;
因此在預(yù)熱時(shí),應(yīng)打開比色皿蓋或使用擋光桿,避免長時(shí)間照射使其性能漂移而導(dǎo)致工作不穩(wěn)。
6.放大器靈敏度換擋后,必須重新調(diào)零。
7.比色杯的配套性問題。比色杯必須配套使用,否則將使測試結(jié)果失去意義。在進(jìn)行每次測試前均應(yīng)進(jìn)行比較。
具體方法如下;分別向被測的兩只杯子里注入同樣的溶液,把儀器置于某一波長處,石英比色杯;220nm、700nm裝蒸餾水,玻璃比色杯:
700nm處裝蒸餾水,將某一個(gè)池的透射比值調(diào)至100%,測量其他各池的透射比值,記錄其示值之差及通光方向;
如透射比之差在±0.5%的范圍內(nèi)則可以配套使用,若超出此范圍應(yīng)考慮其對(duì)測試結(jié)果的影響。
分光光度計(jì)由于在每個(gè)波長都需要變換參比和樣品的位置,所以只能手動(dòng),不能掃描吸收光譜。
它的結(jié)構(gòu)比較簡單,使用也有一定限制,但如配置程序控制和打印裝置,則對(duì)一些常規(guī)的定量測定還是比較適用的。
關(guān)于可見分光光度計(jì)的使用環(huán)境也有很多說法,當(dāng)然了除了使用環(huán)境之外還有使用時(shí)的注意事項(xiàng)。
那么具體都有哪些呢?下面我們就來一起看看吧。
可見分光光度計(jì)的工作環(huán)境
1、儀器應(yīng)該安放在干燥的房間內(nèi),環(huán)境溫度為5°C~35C, 相對(duì)濕度不超過85%.
2、使用時(shí)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺(tái)上,且避免強(qiáng)烈的震動(dòng)或持續(xù)的震動(dòng)。
3、室內(nèi)照明不易太強(qiáng),且避免直射日光的照射。
4、電扇不易直接向儀器吹風(fēng),以免因氣流影響儀器的正常使用。
5、盡量遠(yuǎn)離高強(qiáng)度的磁場、電廠及發(fā)生高頻波的電器設(shè)備。
6、工作電壓為AC220V土22V,頻率為50Hz土1Hz
7、避免在有硫化氫、亞硫酸氟登腐蝕氣體的場所使用。
可見分光光度計(jì)使用注意事項(xiàng)
1、當(dāng)儀器停止工作時(shí),應(yīng)關(guān)閉儀器電源開關(guān),在切斷電源。
2、為了避免儀器積灰和沾污,在停止工作的時(shí)間里,用防塵罩罩住儀器,同時(shí)在罩子內(nèi)放置數(shù)袋防潮劑,以免燈室受潮、反射鏡鏡面發(fā)霉或沾污,影響儀器日后的工作。
3、儀器工作數(shù)月或搬動(dòng)后,要檢查波長準(zhǔn)確度,以確保儀器的使用和測定精度。
4、每次使用儀器后應(yīng)對(duì)比色架進(jìn)行清潔,防止樣品對(duì)比色皿架的腐蝕。
紫外可見分光光度計(jì)使用環(huán)境溫度盡可能保持在15-30攝氏度,這樣才能保持電器元件穩(wěn)定工作,且不易老化,從而使分光光度計(jì)不易損壞,燈源的使用壽命更久。
如果不具備這樣的室溫條件,即在高溫的情況下,也要盡量縮短分光光度計(jì)開機(jī)時(shí)間,從而高效使用分光光度計(jì),避免電器元件長期在高溫下運(yùn)轉(zhuǎn)。如在低溫下,使預(yù)熱時(shí)間比常溫下的預(yù)熱時(shí)間要長,這樣才能保證在儀器穩(wěn)定的情況下進(jìn)行測試使用;