紫外分光光度法是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜，來研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。紫外分光光度計可以在紫外可見光區(qū)任意選擇不同波長的光。物質(zhì)的吸收光譜就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結(jié)果。
由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會相同，因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量。
紫外分光光度計用途:
1.檢定物質(zhì)
根據(jù)吸收光譜圖上的一些特征吸收，特別是最大吸收波長λ-max和摩爾吸收系數(shù)ε是檢定物質(zhì)的常用物理參數(shù)。這在藥物分析上就有著很廣泛的應(yīng)用。在國內(nèi)外的藥典中，已將眾多的藥物紫外吸收光譜的最大吸收波長和吸收系數(shù)載入其中，為藥物分析提供了很好的手段。
2.與標(biāo)準物及標(biāo)準圖譜對照
將分析樣品和標(biāo)準樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質(zhì)，則兩者的光譜圖應(yīng)完全一致。如果沒有標(biāo)樣，也可以和現(xiàn)成的標(biāo) 準譜圖對照進行比較。這種方法要求儀器準確，精密度高，且測定條件要相同。
3.比較最大吸收波長吸收系數(shù)的一致性
4.純度檢驗
5.推測化合物的分子結(jié)構(gòu)
6.氫鍵強度的測定
實驗證明，不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強度也不同，這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強度，以確定選擇哪一種溶劑。
7.絡(luò)合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測定：
8.反應(yīng)動力學(xué)研究
9.在有機分析中的應(yīng)用
有機分析是一門研究有機化合物的分離、鑒別及組成結(jié)構(gòu)測定的科學(xué)，它是在有機化學(xué)和分析化學(xué)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的綜合性學(xué)科。
紫外分光光度計主要應(yīng)用于對有機物、無機物、蛋白、細菌生長濃度進行定量，被廣泛的應(yīng)用于科研、化工、制藥、環(huán)保、衛(wèi)生、防疫等多個行業(yè)當(dāng)中。我們在選擇紫外分光光度計的時候?qū)τ谒倪x購方法是必須要掌握的，今天小編就來為大家具體介紹一下紫外分光光度計的選擇方法吧。
1、儀器的光度準確度
光度準確度指實際測量的光度讀數(shù)值與真值之差。它是用戶對儀器的關(guān)鍵要求，需要優(yōu)先考慮。
2、儀器的雜散光
它指不應(yīng)該有光的地方有了光。它是光譜測量中誤差的主要來源，一般這個值越小越好。
3、儀器的光譜帶寬
是指從單色器射出的單色光譜線強度輪廓曲線的1/2高度處的譜帶寬度。體現(xiàn)儀器的光譜分辨率。按照比耳定律，一般情況下光譜帶寬應(yīng)該是越小越好，但如果儀器的光源能量弱，光學(xué)傳感器的靈敏度低時，光譜帶寬小了，也得不到理想的測量結(jié)果的。所以，選擇和使用儀器時一定注意多方面考慮。
4、儀器的穩(wěn)定性
穩(wěn)定性是用戶較為關(guān)注的核心指標(biāo)了，性能穩(wěn)定可靠是基本的要求。
5、儀器的噪聲
噪聲也是儀器的重要參數(shù)指標(biāo)，它體現(xiàn)了儀器的做稀溶液的能力。噪音指標(biāo)無疑越小越好。
6、儀器波長的準確度及重復(fù)性
儀器的每個值都是在一定的波長下測得的，如果所示的波長和實際波長偏差過大，那么測出的值和真值的同樣相差很大，就談不上準確了，所以說準確度這個指標(biāo)非常重要。
紫外可見光譜儀涉及的波長范圍在有機化學(xué)研究中得到廣泛的應(yīng)用。通常用作物質(zhì)鑒定、純度檢查，有機分子結(jié)構(gòu)的研究。
在定量方面，可測定結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的化合物和混合物中各組分的含量，也可以測定物質(zhì)的離解常數(shù)，絡(luò)合物的穩(wěn)定常數(shù)，物質(zhì)分子量鑒別和微量滴定中指示終點以及在高效液相色譜中作檢測器等。
基本工作原理：
紫外分光光度計基本工作原理和紅外光譜儀相似，利用一定頻率的紫外可見光照射被分析的有機物質(zhì)，引起分子中價電子的躍遷，它將有選擇地被吸收。
一組吸收隨波長而變化的光譜，反映了試樣的特征。在紫外可見光的范圍內(nèi)，對于一個特定的波長，吸收的程度正比于試樣中該成分的濃度，因此測量光譜可以進行定性分析，而且根據(jù)吸收與已知濃度的標(biāo)樣的比較，還能進行定量分析。
分光光度計的使用方法:
(1)接通電源;(2)使用前預(yù)熱15min;(3)選擇波長;(4)選擇檢測器;(5)如果可能的話,選擇正確的縫寬;
(6)插入適當(dāng)?shù)目瞻讓φ?(7)調(diào)解到0%的透過率;(8)將吸光值調(diào)到零;(9)分析樣品;(10)每測量10個樣品后,用空白對照校驗零刻度;(11)檢測儀器的可重復(fù)性。
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