由于分光光度計是一種常用的實驗室分析儀器,款式和價格都是多樣化的,因此如何選擇一款合適的分光光度計就顯得尤為重要了。盡管分光光度計種類繁多,但不外乎:簡易型、中檔型和高檔型三大類。
一、簡易型儀器及其特點:
結(jié)構(gòu):這種類型的儀器多為單光束型,即只有一束光照射到樣品室內(nèi);光源一般僅有鎢燈;樣品支架一般為推拉式四聯(lián)池架;波長選擇多為手動查找,重復(fù)性差;狹縫為一個固定寬度模式;光學(xué)性能指標(biāo)較低;檢測器多為光敏二極管;顯示器多為機械表頭或數(shù)碼管顯示器,數(shù)據(jù)處理器一般沒有。此類儀器生產(chǎn)以國內(nèi)廠家居多。
測量模式:多為定點(固定波長)吸光度或透過率測量方式,基本不能進行波長掃描測量。
適應(yīng)范圍:小型實驗室及示范教學(xué),分析樣品相對簡單,測試結(jié)果精度要求不高。
二、中檔型儀器及其特點:
結(jié)構(gòu):此類儀器多為雙光束型或準(zhǔn)雙光束型,但也有單光束儀器型;光源有鎢燈和氘燈;樣品池支架為兩個固定式,分別是樣品通道和參比通道;波長按照設(shè)定模式自動查找或掃描;狹縫多數(shù)仍為2nm固定寬度模式,也有1.5nm狹縫寬度的;檢測器多數(shù)是硅光二極管,但也有少數(shù)用光電倍增管的;光學(xué)性能相對較高,其中光柵的技術(shù)指標(biāo)尤為重要,較佳的光柵為凹面型,為此無論在分辨率還是在雜散光方面指標(biāo)要優(yōu)于簡易型儀器;顯示器為液晶式或連接電腦,數(shù)據(jù)處理可由儀器自身具有的或外接計算機處理。并有一定的測量附件。
測量模式:透過率、吸光度、濃度直讀、單光束;單點及掃描均可。
適應(yīng)范圍:此類儀器基本可滿足大多實驗室分析需要。
三、高檔型儀器及特點:
除了中檔儀器的特點外,主要是光學(xué)系統(tǒng)的設(shè)計和制造工藝水平更高了,比如使用了大尺寸的凹面光柵,并且光柵刻槽數(shù)大于1800條/mm;波長檢測范圍有的儀器在近紅外區(qū)已經(jīng)超過1100nm,可達到2600nm;狹縫均為連續(xù)可調(diào)型,以適應(yīng)高分辨率的需要,波長掃描速度的檔位也增加了,檢測器均使用高靈敏度的光電倍增管和紅外檢測器;數(shù)據(jù)處理目前基本是電腦來執(zhí)行;衡量一臺儀器的另外一個指標(biāo)是看此儀器是否具有豐富的附屬測量器件,如偏振附件、積分球附件、反射附件、自動進樣器附件、色度分析軟件、薄膜附件等等。
測量模式:透過率、吸光度、濃度直讀、反射方式、能量方式,單點、掃描均可;
適應(yīng)范圍:科研、光學(xué)產(chǎn)品的檢測、生化樣品檢測、復(fù)雜樣品檢測等。不但可以測液態(tài)樣品,也可測固態(tài)樣品。
故障一:數(shù)顯不穩(wěn)
原因:①環(huán)境振動過大、光源附近空氣流速大、外界強光照射等。應(yīng)改善工作環(huán)境。
?、陬A(yù)熱時間不夠。應(yīng)延長預(yù)熱時間至30分鐘左右。
?、酃怆姽軆?nèi)的干燥劑失效,使微電流放大器受潮。應(yīng)烘烤電路,并更換或烘烤干燥劑。
故障二:儀器不能調(diào)零
原因:①透過率“100%”旋到底了。應(yīng)重新調(diào)整“100%”旋鈕。
?、趦x器嚴重受潮。應(yīng)打開光電管暗盒,用電吹風(fēng)吹上一會兒使其干燥,并更換干燥劑。
故障三:儀器不能調(diào)“100%”
原因:①光能量不夠。應(yīng)增加靈敏度倍率檔位,或更換光源燈(盡管燈還亮)②光電轉(zhuǎn)換部分老化。應(yīng)更換部件。③比色皿架未落位。應(yīng)調(diào)整比色皿架使其落位。
以上是分光光度計的常見故障及處理方法,希望能夠?qū)δ兴鶐椭?/p>
雙光束紫外-可見分光光度計(以下簡稱儀器),系指從單色器發(fā)出的單色光經(jīng)光束開關(guān)(斬光器)分成為樣品和參比兩條光束結(jié)構(gòu)的儀器。
它能消除光源不穩(wěn)和放大器增益變化的影響,并能自動記錄和掃描物質(zhì)的吸收光譜圖。
儀器在開機后通常會做一些自檢,但仍應(yīng)按本規(guī)程進行檢定。儀器的波長范圍包括195~800nm,狹縫為0.1~5nm可調(diào)。
工作原理
紫外可見分光光度法是利用物質(zhì)分子對紫外可見光譜區(qū)的輻射的吸收來進行分析的一種儀器分析方法。
這種分子吸收光譜產(chǎn)生于價電子能級的躍遷,它廣泛用于無機和有機物質(zhì)的定性和定量分析。
朗伯一一比耳定律(Lambet-Beer)是光吸收的基本定律,俗稱光吸收定律,是分光光度法定量分析的依據(jù)和基礎(chǔ)。
當(dāng)入射光波長一定時,溶液的吸光度是吸光物質(zhì)的濃度c及吸收介質(zhì)厚度(吸收光程)的函數(shù)。
其常用表達式如下(式中ε為系數(shù)):
A=ε·c·l
紫外見分光光度計是基于紫外可見分光光度法的原理工作的常規(guī)分析儀器。根據(jù)光路設(shè)計的不同,紫外可見分光光度計可以分為單光束分光光度計、雙光束分光光度計和雙波長分光光度計。
制定依據(jù)
本規(guī)程主要參照國家計量檢定規(guī)程《JJG178-2007紫外、可見、近紅外分光光度計》、《JJF1641-2017紫外可見分光光度計型式評價大綱》及《中國藥典》2015年版四部指導(dǎo)通則“0401紫外-可見分光光度法”擬定。
項目及技術(shù)要求
波長準(zhǔn)確度≤±1.0nm(紫外光區(qū)),≤±2.0nm(500nm附近);
波長重復(fù)性≤0.5nm。
基線平直度≤0.01吸光度。
0%線噪聲≤0.1%,100%線噪聲≤0.5%.
吸光度準(zhǔn)確度應(yīng)符合規(guī)定。
雜散光<0.8%。
光譜帶寬≤標(biāo)示帶寬±20%。
吸收池配對誤差≤0.5%。
檢測結(jié)果處理
自檢結(jié)果全部符合技術(shù)要求者,即為合格,可以使用。若檢測結(jié)果不符合規(guī)定,應(yīng)重新調(diào)試儀器再進行自檢,符合規(guī)定后方可使用。