分光光度計(jì)屬于精密儀器，應(yīng)當(dāng)妥善保管和精心維護(hù)，這樣才能保證分光光度計(jì)長期使用、長期的穩(wěn)定可靠、測量精度高。
分光光度計(jì)的工作原理
光是一種電磁波,具有一定的波長和頻率。可見光的波長范圍在400~760nm，紫外光為200~400nm，紅外光為760~500000nm?？梢姽庖虿ㄩL不同呈現(xiàn)不同顏色，這些波長在一定范圍內(nèi)呈現(xiàn)不同顏色的光稱單色光。太陽或鎢絲等發(fā)出的白光是復(fù)合光，是各種單色光的混合光。利用棱鏡可將白光分成按波長順序排列的各種單色光，即紅、橙、黃、綠、青、藍(lán)、紫等，這就是光譜。有色物質(zhì)溶液可選擇性地吸收一部分可見光的能量而呈現(xiàn)不同顏色，而某些無色物質(zhì)能特征性地選擇紫外光或紅外光的能量。物質(zhì)吸收由光源發(fā)出的某些波長的光可形成吸收光譜，由于物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)不同，對(duì)光的吸收能力不同，因此每種物質(zhì)都有特定的吸收光譜，而且在一定條件下其吸收程度與該物質(zhì)的濃度成正比，分光光度法就是利用物質(zhì)的這種吸收特征對(duì)不同物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析的方法。
在比色分析中，有色物質(zhì)溶液顏色的深度決定于入射光的強(qiáng)度、有色物質(zhì)溶液的濃度及液層的厚度。當(dāng)一束單色光照射溶液時(shí)，入射光強(qiáng)度愈強(qiáng)，溶液濃度愈大，液層厚度愈厚，溶液對(duì)光的吸收愈多，它們之間的關(guān)系，符合物質(zhì)對(duì)光吸收的定量定律，即Lambert-Bear 定律。這就是分光光度法用于物質(zhì)定量分析的理論依據(jù)。
分光光度計(jì)的使用方法：
(1)儀器預(yù)熱。打開樣品室蓋(光門自動(dòng)關(guān)閉)。開啟電源，指示燈亮，儀器預(yù)熱20 min。選擇開關(guān)置于“T”旋鈕，使數(shù)字顯示為“00.0”。
(2)旋動(dòng)波長手輪，把所需波長對(duì)準(zhǔn)刻度線。
(3)將裝有溶液的比色皿放置比色架中，令參比溶液置于光路。
(4)蓋上樣品室蓋，調(diào)節(jié)透光率“100%T”旋鈕，使數(shù)字顯示為“100.0T”。(如顯示不到100%T，則可加按一次。
(5)吸光度A的測量：儀器調(diào)T為0和100%后，將選擇開關(guān)轉(zhuǎn)換至A調(diào)零旋鈕，數(shù)字顯示應(yīng)為“.000”。然后拉出拉桿，使被測溶液置入光路，數(shù)字顯示值即為試樣的吸光度A。
(6)測定完畢后，先打開樣品室蓋，再斷電源。比色杯應(yīng)清洗干凈后，再貯放保存。
分光光度計(jì)的注意事項(xiàng)
1、該儀器應(yīng)放在干燥的房間內(nèi)，使用時(shí)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺(tái)上，室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)。熱天時(shí)不能用電扇直接向儀器吹風(fēng)，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。
2、使用本儀器前，使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理，以及各個(gè)操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前，應(yīng)該對(duì)儀器的安全性能進(jìn)行檢查，電源接線應(yīng)牢固，通電也要良好，各個(gè)調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再按通電源開關(guān)。
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