前    言

糖類分析的主要目的有兩類：即單糖、寡糖的組成和多糖的分子量及其發(fā)布。糖類物質(zhì)的分離主要通過HPLC在色譜柱中實(shí)現(xiàn)，日本昭和電工長期致力于色譜柱研發(fā)生產(chǎn)，產(chǎn)品多種多樣，無論您的課題是涉及有機(jī)聚合物、蛋白質(zhì)及肽、糖類、有機(jī)酸、藥物或無機(jī)離子，您都可以找到一款合適的Shodex HPLC色譜柱。它性能優(yōu)異，主要體現(xiàn)在：高效；柱壽命長；優(yōu)良的機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)穩(wěn)定性。有關(guān)糖類分析用色譜柱詳見以下各章節(jié)。

絕大多數(shù)的糖類物質(zhì)無紫外吸收，所以不能很好地使用UV檢測(cè)器測(cè)定。其檢測(cè)手段目前常見的主要有以下三種。

1．示差折光檢測(cè)器RI

RI是一種通用型檢測(cè)器，具有廣泛的使用范圍，它對(duì)沒有紫外吸收的物質(zhì)，如高分子化合物、糖類、脂肪烷烴等都能夠檢測(cè)。RI還適用于流動(dòng)相紫外吸收本底大，不適于紫外吸收檢測(cè)的體系。在凝膠色譜中RI是必不可少的，尤其是對(duì)聚合物分子量分布的測(cè)定。利用GPC+RI+標(biāo)準(zhǔn)品，我們可以得到被測(cè)物質(zhì)的相對(duì)分子量。

日本Shodex公司的SHODEX® RI-101檢測(cè)器是一種新概念示差折光檢測(cè)器， 它使用微處理器，使得從溶液置換到基線穩(wěn)定核查能夠自動(dòng)進(jìn)行，穩(wěn)定快速。Shodex®RI-101與以往不同的高效液相色譜用示差折光檢測(cè)器相比，具有以下的特長：

優(yōu)越的操作性：獨(dú)特的快速平衡功能，在30分鐘內(nèi)自動(dòng)平衡基線。檢測(cè)器配備彩色液晶顯示器， 易于分析人員一眼就看到操作狀態(tài)和基線傾向；自動(dòng)啟動(dòng)功能，使之可自動(dòng)進(jìn)行從參比池的溶液置換到基線穩(wěn)定性核查的復(fù)雜操作；用幫助功能，很容易確定和校對(duì)裝置。

出眾的穩(wěn)定性：通過溫度調(diào)節(jié)方式的比較優(yōu)化，電源打開后穩(wěn)定化時(shí)間縮短，并可獲得出眾的基線穩(wěn)定性。

安全措施：檢測(cè)器配備泄漏感應(yīng)器，萬一溶劑泄漏，泵可以自動(dòng)停止。

多種自動(dòng)功能：檢測(cè)器設(shè)有外部輸入輸出端子以及RS232C通道端口，把檢測(cè)器與各種液相色譜組合能實(shí)現(xiàn)高度自動(dòng)化。

由于快速自動(dòng)啟動(dòng)功能，達(dá)到穩(wěn)定時(shí)間被減半。檢測(cè)器穩(wěn)定可在彩色顯示器上自動(dòng)測(cè)定核查。

2.粘度檢測(cè)器

高聚物溶液中的[η]與分子量之間存在著以下定量關(guān)系：

3．光散射檢測(cè)器（LS）

光散射技術(shù)測(cè)定高聚物的重均分子量（按分子重量統(tǒng)計(jì)平均得到的分子量），是當(dāng)前應(yīng)用較為廣泛的一種方法。凝膠色譜分離－光散射檢測(cè)器的結(jié)合不但可以直接測(cè)量大分子的絕對(duì)分子量及分布，還可以得到分子形狀、動(dòng)力學(xué)半徑、枝化度等信息。

美國PD公司的PD2000系列的光散射完全與70年代的小角光散射和80年代的多角光散射不同。小角光散射是忽略角度，只進(jìn)行濃度外推。多角光散射是忽略濃度。PD的光散射利用得拜公式，用角度和濃度同時(shí)參與計(jì)算。PD2000家族的儀器提供溶液中的聚合物和生物高分子新的精確的數(shù)據(jù)——絕對(duì)分子量、尺寸、形態(tài)和其他的特征參數(shù)。它具有以下優(yōu)點(diǎn)：①高靈敏度；②極好的重復(fù)性；③高精度；④易于操作；⑤快速從復(fù)以前的試驗(yàn)結(jié)果；⑥易于拆卸清洗；⑦長期穩(wěn)定工作；⑧較小的池體積（10微升），與RI聯(lián)用引起峰加寬效應(yīng)小；⑨采用聚焦光路，可以將散射體積見到最小，得到很高的信噪比。其適用范圍涉及：1)仿生學(xué)和醫(yī)藥；2)塑料和其他的聚合物；3)蛋白質(zhì)和多糖類；4)油漆和涂料；5)石油化學(xué)制品；6)潤滑油；7)添加物 ；8)食品生產(chǎn)；9)環(huán)保等，政府，并且其他實(shí)驗(yàn)室。

較新分離測(cè)試技術(shù)

除了常見的HPLC分離模式之外，現(xiàn)在又新興起了場(chǎng)流分離色譜（FFF），也可以用來進(jìn)行多糖的分離。非對(duì)稱場(chǎng)流分離色譜（AF4）屬于FFF家族的一員，是一個(gè)新的、有效快速分離和準(zhǔn)確描述不同的粒子和大分子的方法。它比較早在幾年前在文獻(xiàn)上有報(bào)道，是一個(gè)新的與色譜類似的分離技術(shù)，分離范圍用來從103到1012道爾頓。

德國POSTNOVA公司HRFFF 10.000系列非對(duì)稱場(chǎng)流分離色譜是以非對(duì)稱場(chǎng)流分析原理為基礎(chǔ)來工作的，是一項(xiàng)用來分離和表征流體中粒子和大分子的新穎和有效率的分離方法，它是世界上比較早的全自動(dòng)化AF4系統(tǒng)。該系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)的配置包括不同的泵、檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器等。10.000系列系統(tǒng)能通過樣品分子尺寸大小的差異來實(shí)現(xiàn)分離并檢測(cè)分子量、Rg、Rh等。其應(yīng)用范圍包括生物技術(shù)、多糖、藥物、蛋白質(zhì)、抗體、環(huán)境科學(xué)、材料科學(xué)等。

HRFFF 10.000優(yōu)勢(shì)包括：

l      不使用固定相，分離迅速準(zhǔn)確

l      直接進(jìn)樣，沒有必要的樣品預(yù)處理步驟

l      適用于不同的分離條件水相和有機(jī)溶劑，分子量和尺寸測(cè)定范圍大且容易得到

l      快速分離復(fù)雜的聚合物、粒子和膠體體系

l      分離中小的作用力能保護(hù)樣品的生物活性

 

更詳細(xì)的資料請(qǐng)查閱www.longzida.com網(wǎng)站，或來電來函向我們索取。



通過分離模式進(jìn)行色譜柱的選擇

凝膠滲透色譜（GFC）柱主要使用來分析淀粉等糖類物質(zhì)。但是在分析小分子量范圍且彼此之間分子量相近的糖時(shí)，僅僅憑借GFC模式就達(dá)不到一個(gè)令人滿意的結(jié)果了。Shodex 糖類分析用色譜柱由配位交換、離子交換、離子排阻、正/反相和凝膠過濾等多種模式組成，這些色譜柱適合于分析不同種類的糖。




通過樣品種類選擇色譜柱


色譜柱 Selection: by Elution Volume
在下表中給出了Shodex SUGAR系列色譜柱KS-802，SC1011，SP0810，SC1211和SZ5532保留體積范圍。


色譜柱的選擇：通過糖的自然狀態(tài)


如下表所示，我們可以根據(jù)糖類的自然狀態(tài)來選擇色譜柱，像單糖、雙糖、寡糖、多糖、糖醇、有機(jī)酸、食物纖維。根據(jù)分析條件選擇色譜柱
如下表所示，可以根據(jù)分析條件進(jìn)行色譜柱的選擇。


根據(jù)糖類化合物進(jìn)行色譜柱的選擇下表中根據(jù)糖類化合物進(jìn)行色譜住的選擇。 

Ara: 樹膠醛糖 Cel: 細(xì)胞乙糖 Fru: 果糖 G3: 麥芽三糖 G4: 麥芽四糖 Gal: 半乳糖 Glc: 葡萄糖 Gly: 甘油（丙三醇） Lac: 乳糖 Mal: 麥芽糖 Man: 甘露糖 Raf: 棉籽糖 Sta: 水蘇（四）糖 Suc: 蔗糖 Xyl: 木糖（戊醛糖）

    隨著彈性石英交聯(lián)毛細(xì)管柱技術(shù)的日益成熟和性能的不斷完善，已成為分離復(fù)雜多組分混合物、及多項(xiàng)目分析的主要手段，在各領(lǐng)域應(yīng)用中大有取代填充柱的趨勢(shì)。氣相色譜柱因其高分離能力、高靈敏度、高分析速度等獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)而得到迅速發(fā)展。現(xiàn)在新型氣相色譜儀、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀基本上都是采用毛細(xì)管色譜柱進(jìn)行分離分析。

    色譜柱都有一定的壽命，它與所分析的樣品狀況和維護(hù)情況有直接關(guān)系。柱壽命完結(jié)的主要標(biāo)志是固定液流失太多而失去了分離能力，柱管堵塞或斷裂也是導(dǎo)致柱失效的原因。有時(shí)只是因?yàn)橐恍└叻悬c(diǎn)的極性化合物的吸附而使色譜柱喪失分離能力，這時(shí)可對(duì)其進(jìn)行清洗和修理。

    1、在高溫下老化柱子，用載氣將污染物沖洗出來；若柱性能仍不能恢復(fù)，就從儀器上卸下柱子，將柱頭截去10cm或更長(柱頭是最容易被污染的)，再安裝上測(cè)試。這是常用的柱性能恢復(fù)措施。

    2、如果還不起作用，可再反復(fù)注射溶劑進(jìn)行清洗，常用的溶劑依次為丙酮、甲苯、乙醇、氯仿和二氯甲烷。每次可進(jìn)樣5-10μl，這一辦法常常能奏效。

    3、如果色譜柱性能還不好，就只有卸下柱子，用二氯甲烷或氯仿沖洗?？捎贸檎婵盏霓k法將溶劑從另一端吸入，也可用對(duì)溶劑瓶加壓的方法將溶劑壓入。溶劑用量依柱子的污染程度而定，一般20ml左右。如果這一方法仍不起作用，說明色譜柱應(yīng)該報(bào)廢了。需要說明，只有固定液交聯(lián)的色譜柱才可用此法清洗，否則會(huì)將固定液全部洗掉。  

色譜柱使用維護(hù)

　　1、色譜柱的使用說明：

　?。?）色譜柱使用前注意事項(xiàng)：色譜柱的儲(chǔ)存液無特殊說明，均為評(píng)價(jià)報(bào)告所示的流動(dòng)相。在使用前，一定要注意色譜柱的儲(chǔ)存液與要分析樣品的流動(dòng)相是否互溶。在反相色譜中，如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑，應(yīng)先用10％左右的低濃度的有機(jī)相洗脫劑過渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出，堵塞色譜柱。

　?。?）流動(dòng)相：流動(dòng)相中所使用的各種有機(jī)溶劑要盡可能使用色譜純，配流動(dòng)相的水可以是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動(dòng)相再經(jīng)過0.45μm的濾膜過濾一次則更好，尤其是含鹽的流動(dòng)相。另外，裝流動(dòng)相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。

　　以常規(guī)硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的PH值適用范圍是2.0-8.0，BDSC18適合于堿性化合物，PH值適用范圍為2.0-10.0。當(dāng)必須要在PH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時(shí)，每次使用結(jié)束后立即用適合于色譜柱儲(chǔ)存并與所使用的流動(dòng)相互溶的溶劑清洗，并完全置換掉原來所使用的流動(dòng)相。

　　（3）樣品：樣品也要盡可能清潔，可選用樣品過濾器或樣品預(yù)處理柱（SPE）對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理；若樣品不便處理，要使用保護(hù)柱。在用正相色譜法分析樣品時(shí)，所有的溶劑和樣品應(yīng)嚴(yán)格脫水。

　　2、色譜柱的保存：

　?。?）反相色譜柱每天實(shí)驗(yàn)后的保養(yǎng)：使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相，實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應(yīng)該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。

　?。?）長期保存色譜柱：如色譜柱要長時(shí)間保存，必須存于合適的溶劑下。對(duì)于反相柱可以儲(chǔ)存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲(chǔ)存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲(chǔ)存于水（含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞）中，并將購買新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲(chǔ)存的溫度可以是室溫。

　　3、色譜柱的再生：

　　因?yàn)樯V柱是消耗品，隨著使用時(shí)間或進(jìn)樣次數(shù)的增加，會(huì)出現(xiàn)色譜峰高降低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象，一般來說可能是柱效下降。

　?。?）反相柱的再生：依次采用20-30倍的色譜柱體積的甲醇：水=10：90（V/V），乙腈，異丙醇作為流動(dòng)相沖洗色譜柱，完成后再以相反順序沖洗色譜柱。

　　（2）正相柱的再生：依次以20-30倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動(dòng)相沖洗色譜柱，然后再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必須嚴(yán)格脫水。

　　4、色譜柱在使用過程中易出現(xiàn)的問題和解決辦法：

　　色譜柱在使用中較為常見的問題就是柱壓升高，如果柱壓是在長時(shí)間使用過程中緩慢增加，屬于正?，F(xiàn)象。但柱壓在使用過程中突然升高（系統(tǒng)管路堵塞及壓力傳感器故障除外），以下列舉了部分常見原因及解決辦法：

　?。?）色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染；

　　解決方法：如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸下色譜柱頭，將其放在10％的稀硝酸內(nèi)超聲清洗10分鐘，后再用純水超聲10分鐘，重新裝入色譜柱。

　?。?）色譜柱頭的填料被樣品污染；

　　解決方法：如確定色譜柱頭的填料被污染，將柱頭螺絲卸下，挖出柱內(nèi)前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔細(xì)修復(fù)后，重新安裝上柱頭螺絲。

　　（3）色譜柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機(jī)溶劑，形成結(jié)晶析出；解決方法：如確定定是鹽結(jié)晶，用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內(nèi)鹽全部溶解，再換高濃度甲醇。

　?。?）流動(dòng)相PH值過大或過小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解。解決方法：如果因PH值使用不當(dāng)，很難恢復(fù)

標(biāo)簽: 色譜柱 色譜柱 色譜柱使用維護(hù)_色譜柱

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