高效液相色譜儀的幾個使用問題
1. 色譜柱中的流動相會排干嗎？ 不少做色譜分離試驗的人遇到過這樣的情形：不慎未及時補充流動相，泵將溶劑瓶中的流動相吸干了，HPLC系統(tǒng)由此而停止工作了。如此情況是否會損壞色譜柱？泵是否已將色譜柱中所有流動相都排干了？色譜柱還能使用嗎？事實上，如果泵將溶劑瓶中的流動相吸干，并不會造成色譜柱的損壞。即使泵中充滿了空氣，泵也不會將空氣排入色譜柱。因為泵只能輸送液體，而不能輸送空氣。相比之下，另一個更可能發(fā)生的情況是忘記蓋上色譜柱兩端的密封蓋或蓋子太松而使色譜柱變干。同樣，整個色譜柱干涸的情況不太容易發(fā)生，多半可能只是色譜柱兩端的幾個毫米變干了，因揮發(fā)掉所有溶劑是色譜柱變干需要相當長的時間。即使色譜柱真的變干了，也不一定就不可救藥了?？梢試L試用一種完全脫氣的、表面張力低的溶劑（如經(jīng)氦氣脫氣的甲醇）沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力有助于浸潤填料表面；已脫氣的溶劑應(yīng)該能夠溶解并去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要（以1mL/min的流速）沖一個小時或更多的時間被徹底浸潤，恢復(fù)到正常狀態(tài)。
2. 使用PEEK（polyetheretherketone）管路和接頭需要注意什么問題？
如果經(jīng)常需要改變流路或更換不同品牌的色譜柱，使用PEEK材料制成的管路和接頭會非常方便。PEEK管路容易連接；PEEK接頭不僅無需工具，手擰即可固定，而且容易調(diào)節(jié)錐箍之外的管路長度，方便與不同品牌或規(guī)格的色譜柱相連接。 使用此類材料的管路需要注意的
是：PEEK對鹵代烷烴和四氫呋喃的兼容性不好。雖然未觀察到上述溶劑溶解PEEK材料的明顯跡象，但PEEK遇到上述溶劑會變脆。另一個西藥考慮的因素是壓力限。不銹鋼管可耐受6000psi的壓力，但PEEK管只能耐受近4000psi（但多數(shù)HPLC應(yīng)用系統(tǒng)壓力不會超過3000psi）。 使用PEEK接頭時則無需擔(dān)心接頭耐溶劑性能，因為接頭幾乎或很少與溶劑直接接觸。但手擰固定的PEEK接頭壓力限低于不銹鋼管，因而壓力太高時，可能會使接頭在管路上滑動而產(chǎn)生死體積或漏液。
3. 如何預(yù)防液相泵的故障:
要保持泵的良好操作性能,必須維護系統(tǒng)的清潔,保證溶劑和試劑的質(zhì)量,對流動相進行過濾和脫氣.下面列出預(yù)防泵故障的幾項措施:
1).用高質(zhì)量試劑和HPLC級溶劑；
2）、過濾流動相和溶劑；
3）、脫氣；
4）、每天開始使用時放空排氣，工作結(jié)束后從泵中洗去緩沖液； 5）、不讓水或腐蝕性溶劑滯留泵中；
6）、定期更換墊圈；
7）、需要時加潤滑油； 8）、查閱有關(guān)泵操作手冊中的其它建議。
處于良好操作狀態(tài)的泵，應(yīng)該能使色譜圖上的基線平穩(wěn)；保留時間的重復(fù)性好。在等度洗脫時壓力波動小于2%。梯度洗脫時壓力變化應(yīng)是緩慢和平穩(wěn)的。
為了使故障發(fā)生后盡快排除，平時應(yīng)常備密封、單向閥（入口與出口）、泵頭裝置、各式接頭、保險絲等部件，以及更換工具
、準備好工具和所需部件。工具包括扳手、超聲清洗器、密封圈安靜工具、新密封圈。用水-甲醇沖洗泵，拆開進出口管道，在泵頭和單向閥上標出液流方向。
第二、將柱塞桿縮至小，松開泵頭的收緊螺釘，小心托住泵頭。操作時要注意處處以平衡的動作慢慢退出泵頭，切不可搖動或上下左右擺動泵頭。
第三、從密封圈孔中輕輕拔出舊密封圈，注意不要化泵頭內(nèi)壁，要毫不猶豫地隨即扔掉舊密封圈。
第四、將泵頭和新密封圈分別放入甲醇中超聲清洗，同時用無纖維紙擦洗柱塞桿。察看柱塞桿上有無劃痕，如有劃痕應(yīng)換新柱塞桿然后再安裝密封圈，
第五、安裝新密封圈。這一步要用專門的安裝工具，切不可粗心大意，避免損壞密封圈。
第六、重新裝上泵頭。先在柱塞桿上滴幾滴甲醇以濕潤，滑動泵頭到位。千萬不能搖動或擺動，以防柱塞桿在這一步操作時折斷。平衡地上緊固定螺絲，接上進液管道。
后、打脫氣甲醇到泵腔中，不斷用紙巾從泵出口處吸去流出的液體，等到無氣泡一處再接上輸出管道，打開放空閥，繼續(xù)抽20mL甲醇趕走氣泡后，換成需要使用的流動相。
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