高效液相色譜柱使用注意事項(xiàng)
1、 使用前仔細(xì)閱讀色譜柱附帶的說明書,注意適用范圍,如pH值范圍、流動(dòng)相類型等;
2、 使用符合要求的流動(dòng)相;
3、 使用保護(hù)柱;
4、 如所用流動(dòng)相為含鹽流動(dòng)相,反相色譜柱使用后,先用水或低濃度甲醇水(如5%甲醇水溶液),再用甲醇沖洗。
5、 色譜柱在不使用時(shí),應(yīng)用甲醇沖洗,取下后緊密封閉兩端保存;
6、 不要高壓沖洗柱子;
7、 不要在高溫下長(zhǎng)時(shí)間使用硅膠鍵合相色譜柱;
三,流動(dòng)相操作:
1、 流動(dòng)相應(yīng)選用色譜純?cè)噭?、高純水或雙蒸水,酸堿液及緩沖液需經(jīng)過濾后使用,過濾時(shí)注意區(qū)分水系膜和油系膜的使用范圍;
2、 水相流動(dòng)相需經(jīng)常更換(一般不超過2天),防止長(zhǎng)菌變質(zhì);
3、 使用雙泵時(shí),A、B、C、D四相中,若所用流動(dòng)相中有含鹽流動(dòng)相,則A、D(進(jìn)液口位于混合器下方)放置含鹽流動(dòng)相,B、C(進(jìn)液口位于混合器上方)放置不含鹽流動(dòng)相;
A、B、C、D四個(gè)儲(chǔ)液器中其中一個(gè)為棕色瓶,用于存放水相流動(dòng)相。
液相色譜儀的應(yīng)用,可用于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差以及具有生理活性物質(zhì)的分析。一般來說,沸點(diǎn)在450℃以下,相對(duì)分子質(zhì)量小于450的有機(jī)物可用液相色譜儀分析,但這些物質(zhì)只占有機(jī)物的15%~20%,其余的80%~85%有機(jī)物原則上都可采用高效液相色譜儀分析。
色譜柱的使用和維護(hù),色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要,稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。
在色譜操作過程中,需要注意下列問題,以維護(hù)色譜柱。調(diào)節(jié)流速太快,避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料,因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行,在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過緩。
反沖色譜柱,一般說來色譜柱不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí),才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效,預(yù)柱和保護(hù)柱,選擇使用適宜的流動(dòng)相(尤其是pH),以避免固定相被破壞。
有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱,分析柱是鍵合硅膠時(shí),預(yù)柱為硅膠,可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”,避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi),需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu),由輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等組成。
工作原理,利用混合物各組分在固定相和流動(dòng)相中溶解、分配或吸附等化學(xué)作用性能的差異,使各組分在作相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩相中反復(fù)多次受到上述各作用力而達(dá)到相互分離。
從液相色譜儀工作流程中看到,色譜柱是實(shí)現(xiàn)分離的核心部件,要求柱效高、柱容量大和性能穩(wěn)定。柱性能與柱結(jié)構(gòu)、填料特性、填充質(zhì)量和使用條件有關(guān)。
色譜填料:經(jīng)過制備處理后,用于填充色譜柱的物質(zhì)顆粒,通常是5-10粒徑的球形顆粒。
色譜柱管:內(nèi)部拋光的不銹鋼管。典型的液相色譜分析柱尺寸是內(nèi)徑4.6mm,長(zhǎng)250mm。
色譜柱:也稱固定相,是將色譜填料填充到色譜柱管中所構(gòu)成的,色譜柱的填充,干法填充:在硬臺(tái)面上鋪上軟墊,將空柱管上端打開垂直放在軟墊上,用漏斗每次灌入50-100mg填料,然后垂直臺(tái)面墩10-20次。
濕法填充:又稱淤漿填充法,使用專門的填充裝置。
色譜柱是液相色譜中重要的一個(gè)組成部分。眾所周知,色譜是一種分離、分析手段,分離是其核心,而色譜柱擔(dān)負(fù)的就是其分離作用,可以說,色譜柱就是液相色譜儀的心臟。保護(hù)柱則是為了降低分析柱受污染程度,延長(zhǎng)分析柱使用壽命的重要組成部分。
如何使用保護(hù)柱
1、專柱專用,避免保護(hù)柱成為不同項(xiàng)目間的交叉污染源。
2、及時(shí)更換保護(hù)柱。當(dāng)峰的理論塔板數(shù)下降15%,或是柱壓上升15%,或是關(guān)鍵分離度下降15%時(shí),都應(yīng)該及時(shí)更換保護(hù)柱。
3、不慎發(fā)生強(qiáng)污染時(shí),可以將分析柱卸下,單獨(dú)沖洗保護(hù)柱,可以使污染物更快的從保護(hù)柱中流出。但是不可以超聲清洗保護(hù)柱,以免損傷柱芯。
保護(hù)柱使用注意事項(xiàng):
1、獨(dú)立式保護(hù)柱與分析柱連接時(shí),連接管路盡可能短,且接口切面平滑,盡量減少死體積以降低柱外展寬效應(yīng)。
2、卡套式保護(hù)柱一般未標(biāo)注液流方向,使用時(shí)應(yīng)自行標(biāo)注,并按照標(biāo)注方向來使用,以免正反向使用后,截留的雜質(zhì)污染分析柱。
3、直接填裝的短柱型保護(hù)柱,出現(xiàn)柱壓升高或峰型變差時(shí),可不接分析柱進(jìn)行反向清洗,清洗溶劑可參考分析柱清洗溶劑。
4、卡套式保護(hù)柱,柱芯替換時(shí),注意柱芯與柱套是否存在方向上的匹配,同時(shí)不易旋擰過緊,以防滑絲。
5、保護(hù)柱或柱芯一般不建議超聲清洗,因可能對(duì)填料表面修飾有影響。
6、如同一保護(hù)柱配不同的分析柱使用,每次使用前,保護(hù)柱需先清洗并用流動(dòng)相平衡保護(hù)柱一段時(shí)間后,再接分析柱使用。
使用保護(hù)柱的目的在于延長(zhǎng)分析柱的使用壽命,但選擇合適的保護(hù)柱更加重要,選擇或使用不當(dāng)也可能帶來截然相反的效果