高效液相色譜法—檢測(cè)黃曲霉毒素殘留
1.原理
樣品經(jīng)有機(jī)溶劑提取、凈化和衍生化反應(yīng)后,濃縮液注人HPLC儀,經(jīng)色譜柱分離,分離出的組分依次進(jìn)人熒光檢測(cè)器(發(fā)射波長(zhǎng)360 nm、激發(fā)波長(zhǎng)245 nm),產(chǎn)生相應(yīng)的電信號(hào),由記錄儀記錄響應(yīng)信號(hào),經(jīng)微處理機(jī)自動(dòng)計(jì)算及打印出樣品中AFT含量(ng)。
2.儀器
HPLC儀(具熒光檢測(cè)器)。
3.試劑
①硅鎂型吸附劑:100-1200目,350℃烘2 h,冷后裝入密閉容器中,用前加水15%減活,平衡48h??烧r續(xù)傅用7天。
②流動(dòng)相:甲醇+0.01mol·L-1 KH2P04(1+1)溶液配制后,經(jīng)0.45 um濾膜抽濾并脫氣。
③層析柱,底層和上層為2.cIn厚的無(wú)水Na2S04,中層為0.4 g硅鎂吸附劑,均以氯仿濕潤(rùn)。
④其他試劑參照薄層層析法。
4.儀器工作條件
①具熒光檢測(cè)器(激發(fā)波長(zhǎng)245 nm、發(fā)射波長(zhǎng)360 nm)。
GAIN置16,Span置Max。
柱:C18 10um(Radial pak cartridges)。
流動(dòng)相:甲醇+0.01tool/L KH2P04(1+1)。
流速:1.3 mL/min。
②進(jìn)樣量:10 uL。
5.檢測(cè)步驟
①樣品提取與凈化:準(zhǔn)確稱取樣品10 g于具塞錐形瓶中,加50 mI。氯仿,振蕩30 min,過濾于層析柱中,用氯仿+正己烷(1+1)8 mI,,氯仿+甲醇(9+1)10 mL,淋洗除雜質(zhì),最后用20 mL丙酮+水(99+1)洗脫黃曲霉毒素,收集于燒杯中,在50℃水浴中揮干溶劑,再用氯仿分次將殘?jiān)慈? mL具塞試管中,并于50℃水浴中通Nz吹干。
②衍生化反應(yīng):向具塞試管中加200uI。正己烷,50uL三氟乙酸,將蓋蓋緊,充分混勻1 min,靜置30 rain后用Nz吹干。加100uL流動(dòng)相,充分混勻,待檢。
③標(biāo)準(zhǔn)液的處理:取適量標(biāo)準(zhǔn)溶液,按樣品處理方法萃取、凈化和衍生化反應(yīng),定容,使AFTBl、AFTMl最后濃度均為0.1 ng·uL-1。
AFT保留時(shí)間及標(biāo)準(zhǔn)色譜圖:保留時(shí)間(min) :AFTM1 3.36,AFTG1 4.72,AFTB1 16.00,F(xiàn)T G2 10.12,AFTB2 14.40。
6.說(shuō)明
①本法應(yīng)在1天內(nèi)完成檢測(cè),否則結(jié)果偏低。
②層析柱中硅鎂吸附劑應(yīng)先用氯仿調(diào)為糊狀加入。
高效液固色譜儀是利用樣品各組分在固定相和流動(dòng)相中吸附-解吸作用的差異,使各組分在作相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩相中反復(fù)多次受到吸附-解吸作用而達(dá)到相互分離?! ≈饕愋停骸 ?i>液固吸附色譜 1.1分離原理液固色譜是基于各組分吸附能力的差異進(jìn)行混合物分離的,其固定相是固體吸附劑。 1.2固定相;吸附色譜固定相可以分為極性和非極性兩大類。 1.3流動(dòng)相;流動(dòng)相要求: 1.3.1選用的溶劑應(yīng)當(dāng)與固定相互不相溶,并能保持色譜柱的穩(wěn)定性 1.3.2選用的溶劑應(yīng)有高純度,以防所含微量雜質(zhì)在柱中積累,引起柱性能的改變。 1.3.3選用的溶劑性能應(yīng)與所使用的檢測(cè)器相匹配,如果使用紫外吸收檢測(cè)器,就不能選用在檢測(cè)波長(zhǎng)下有紫外吸收的溶劑;若使用示差折光檢測(cè)器,就不能用梯度洗脫?! ?.3.4選用的溶劑應(yīng)對(duì)樣品有足夠的溶解能力,以提高測(cè)定的靈敏度?! ?.3.5選用的溶劑應(yīng)具有低的黏度和適當(dāng)?shù)偷姆悬c(diǎn)。 1.3.6應(yīng)盡量避免使用具有顯著毒性的溶劑,以保證工作人員的安全 1.4應(yīng)用:液固色譜是以表面吸附性能力為依據(jù)的,所以它常用于分離極性不同低的化合物,也能分離那些具有相同極性基團(tuán),但數(shù)量不同的樣品?! ?i>液液分配色譜 1.1分離原理;分配色譜法的原理與液液萃取相同,都是分配定律?! ?.2固定相;分配色譜固定相由兩部分組成,一部分是惰性載體,另一部分是涂漬在惰性載體上的固定液。 1.3流動(dòng)相;分內(nèi)色譜中,要求流動(dòng)相盡可能不與固定液互溶 1.4應(yīng)用;既能分離極性化合物,又能分離非極性化合物。由于不同極性鍵合固定相的出現(xiàn),分離的選擇性可得到很好的控制?! ?i>鍵合相色譜 1.1分離原理 1.1.1正鍵合相色譜分離遠(yuǎn)離:使用的是極性鍵和固定性,溶質(zhì)在此類固定相上的分離機(jī)理屬于分配色譜?! ?.1.2反鍵合相色譜分離原理:使用的是極性較小的鍵合固定相,其分離機(jī)理可用疏溶劑作用理論來(lái)解釋?! ?.2固定相;按極性大小可分為非極性、弱極性、極性化學(xué)鍵合固定相三種?! ?.3流動(dòng)相 1.3.1正鍵合相色譜中,采用和反相液液分配色譜相似的流動(dòng)相,流動(dòng)相的主體成分為己烷或庚烷?! ?.3.2反相鍵合相色譜中,流動(dòng)相采用和反相液液分配色譜相似的流動(dòng)相,主題為水?! ?.4應(yīng)用 1.4.1正鍵合相色譜法的應(yīng)用:多用于分離各類極性化合物如染料、炸藥、多巴胺、氨基酸等; 1.4.2反鍵合相色譜法的應(yīng)用:由于操作簡(jiǎn)單,穩(wěn)定性和重復(fù)性好,該方法已成為一種通用型液相色譜分析方法。在生物化學(xué)、醫(yī)藥研究、食品分析和環(huán)境污染分析等多個(gè)領(lǐng)域有了很大的應(yīng)用和發(fā)展?! ?i>凝膠色譜 凝膠色譜又稱分子排阻色譜,它是按照分子尺寸大小順序進(jìn)行分離的一種色譜方法。凝膠色譜法的固定相凝膠是一種多孔性的聚合材料,有一定的形狀和穩(wěn)定性。根據(jù)所用流動(dòng)相的不同,凝膠色譜法可以分為兩類:即用水溶劑做流動(dòng)相的凝膠過濾色譜法(GFC)與用有機(jī)溶劑如四氫呋喃做流動(dòng)相的凝膠滲透色譜法(GPC)。
標(biāo)簽: 高效液相色譜儀 高效液相色譜儀 高效液相色譜儀的主要類型_高效液相色譜儀