替米考星含量測定高效液相色譜法
文摘：
建立了替米考星含量測定的HPLC方法，同事測定了復方替米考星顆粒中替米考星、黃安二甲氧嘧啶及甲氧芐啶的含量。采用Vertex C18色譜柱（5μm，4．6mm×250mm），
流動相為磷酸二丁胺緩沖液+乙腈+四氫呋喃+水（25:115:55:805），流速1．0mL/min，檢測波長280mn。出峰順序為甲氧芐啶、磺胺二甲氧嘧啶、替米考星反式結(jié)構(gòu)、替米考星順式結(jié)構(gòu)，理論塔板數(shù)分別為7963、15714、3282、8701。兩峰之間的分離度分別為24 29、3 92、2 91；拖尾因子分別為0.92、0.90、0.97、0.94。替米考星、磺胺二甲氧嘧啶、甲氧嘧啶的濃度線性范圍分別是6.25~125ug/ml（RE²=0.996），3.125~62.5ug/ml（R²=0.996），0.625~12.5ug/ml（R²=0.999）；平均回收率分別為99.17%/99.06%和99.39%；RSD分別為0.8%、0.9%和0.9%。該法快速、靈敏、準確，適用于同時測定復方替米考星顆粒中三種成分的含量。
關(guān)鍵詞：替米考星；黃安二甲氧嘧啶；甲氧芐啶；高效液相色譜法；含量 替米考星檢測液相色譜儀
復方替米考星顆粒系用替米考星、黃安二甲氧嘧啶、甲氧芐啶按一定比例配置而成的新型制劑。它客服了替米考星單方抗菌譜窄，不合適我國養(yǎng)殖業(yè)以混合感染為主的疫病防治的要求等缺點，利用協(xié)同抗菌增效機理，將新一代抗生素替米考星與黃安二甲氧嘧啶和抗菌增效劑甲氧芐啶按較佳配比進行復方。臨床主要用于革蘭氏陰陽性敏感菌引起的感染，如呼吸道、消化道、泌尿道感染。該制劑具有抗菌譜廣、抗菌效力強等優(yōu)點。但目前尚無同時測定替米考星、磺胺二甲氧嘧啶及甲氧嘧啶含量方法的報道。本實驗旨在建立高興液相色譜法同時檢測上述三種成份含量的方法。
1 實驗材料
1.1儀器STI501高效液相色譜儀，配UV501檢測器，；N2010色譜工作站；K型超聲波清洗器，昆明市超聲波儀器有限公司；DELTA320酸度計，BP-602N梅特勒電子天平；BP-211D電子天平，北京賽多利斯天平。
1．2藥品及試劑 替米考星對照品，批號K0310711，含量91.0%，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；黃安二甲氧嘧啶對照品，批號46H1351，含量99.0%,SIGMA公司；甲氧芐啶對照品，批號H016704，含量100.0%，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。公試品為實驗室自制小樣。替米考星，含量86.0%，山西奧信動物藥業(yè)有限公司提供；黃安二甲氧嘧啶原料，含量98.0%，市場購入；甲氧嘧啶原料含量100%，市場購入。乙腈為色譜純；水為超純水；其余試劑均為分析純。
2 方法與結(jié)果
2.1色譜條件
以Eclipse XCN-C18(250nm×4.6nm，粒徑5um)色譜柱，Vertex C18色譜柱，以磷酸二丁胺緩沖液-乙腈-四氫呋喃-水（25:115:55:805）為流動相，檢測波長280nm，進樣量10ul，流速1.0ml/min，柱溫30℃。出峰順序為甲氧芐啶、黃安二甲氧嘧啶、替米考星順式結(jié)構(gòu)。理論塔板數(shù)大于3000，分離度大于1.5，拖尾因子均再0.90-1.10。2.2 溶液的配置
2.2磷酸二丁胺緩沖液的配置
取二丁胺16.8ml，加磷酸溶液（1-10）70ml，邊加邊攪拌，放置冷卻后，用磷酸調(diào)節(jié)PH值至（2.5±0.1），加水至100ml，搖勻，即得。
稀釋液配置 取水900ml，加入磷酸5.71g用12.5mlo/l氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至（2.5±0.1）
0.5mg/ml甲氧芐啶對照液的配制 精密稱取甲氧芐啶對照品25mg置50ml容量瓶中，加乙腈10ml使溶解，用稀釋液稀釋至刻度，搖勻。
復方替米考星對照液的配置 精密稱取替米考星對照品25mg、黃安二甲氧嘧啶對照品12.5mg精密加入2.22項下0.5mg/ml甲氧芐啶對照液5ml，置同一50ml容量瓶中，加乙腈10ml超聲使溶解，用稀釋液稀釋至刻度，搖勻。
2.3 系統(tǒng)適應性試驗 取供試品溶液，按2.1項下色譜條件，進樣10ul，系統(tǒng)適應性結(jié)果見表1和圖1-4 結(jié)果顯示，替米考星反式、順勢峰、黃安二甲氧嘧啶以及甲氧芐啶的理論塔板數(shù)均再3000以上，拖尾因子在0.90-1.10，分離度均大于1.5，說明該方法系統(tǒng)適應性良好。
2.4 線性關(guān)系考察 分別精密量取2.24項下復方替米考星對照液2.5、1.25、0.1、0.075、0.05、0.025、0.0125ml置10ml容量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，搖勻。精密吸取10ul，注入液相色譜儀，按2.1項下色譜條件分析，測定各自峰面積，以濃度為橫坐標（X,ug/ml）,以峰面積為縱坐標（y），進行線性回歸
參考文獻：作者：閆春芝 林東下 趙紅彥 秦朝英 機 構(gòu)：中華人民共和國農(nóng)業(yè)部.獸藥質(zhì)量標準【S】.2010版.57-59刊 名：中國獸藥雜志, 2006(8): 26-27
關(guān)鍵詞：替米考星 磺胺二甲嘧啶 甲氧芐啶 含量 高效液相色譜法（HPLC） STI501液相色譜儀測定 替米考星檢測液相色譜儀
液相色譜儀常見四種故障處理方法1、出峰不佳，峰分叉 （1）色譜柱被污染?！ 。?）柱頭填料塌陷。處理對于第一種情況，先用純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇+異丙醇（4+6）沖洗柱子（沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定），再換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳，則考慮第二種情況。對于第二種情況，擰開柱頭，檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分（污染的填料），裝入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊，再填平，滴甲醇，再壓緊反復幾次，直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈，擦凈柱外壁的填料，擰緊柱頭，用純甲醇沖洗30分鐘以上?！ ?i>2、柱壓高原因 ?。?）緩沖液鹽分如（乙酸銨等）沉積于柱內(nèi)?！ 。?）樣品污染沉積。處理對于第一種情況先用40～50℃的純水，低速正向沖洗柱子，待柱壓逐漸下降后，相應提高流速沖洗，柱壓大幅度下降后，用常溫純水沖洗，之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘；對于第二種情況，由樣品的沉積引起污染的C18柱，和純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇+異丙醇（4+6）沖洗柱子（沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定），再用換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。 3、壓力波動大，流量不穩(wěn)定 原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物，使得兩者不能密封。處理工作中注意觀察流動相的量，保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底，避免吸入空氣，流動相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物，拆下單向閥，放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。 4、既無壓力指示，又無液體流過 ?。?）泵密封墊圈磨損。 ?。?）大量氣泡進入泵體。處理對于第一種情況，更換密封墊圈；對于第二種情況，在泵作用的同時，用一個50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。
標簽: 液相色譜儀 液相色譜儀 液相色譜儀常見四種故障處理方法_液相色譜儀 選購優(yōu)良液相色譜儀應該考慮的地方選購一臺品質(zhì)優(yōu)良的液相色譜儀應從以下幾個方面考慮：
首先是如何看指標。液相色譜儀的指標很多，有泵的、檢測器的、色譜柱等等。我們認為要看主要技術(shù)指標，根據(jù)國家標準，儀器的主要指標有噪音，漂移，最小檢測濃 度，定性定量重復性等。這些指標都要放在系統(tǒng)，回路里去看，去比較。就是需要把各單元裝置都要聯(lián)接好，如接好色譜柱，進樣閥，并且要通上流動相。因為您在 分析中也都是聯(lián)接好以后才可以進行分析的，而不是單單用個檢測器或是泵的。
然后在這個基礎(chǔ)上，我們再去比較這些主要指標。
1.噪音
是指由儀器的電器元件、溫度波動、電壓的線性脈沖以及其他非溶質(zhì)作用產(chǎn)生的高頻噪聲和基線的無規(guī)則波動。噪音的大小直接關(guān)系到儀器的檢測靈敏度，噪音越 大，檢測的靈敏度就越低。對于檢測低含量的樣品就要求儀器的噪音越小越好，否則噪音過大將會導致基線不穩(wěn)，甚至影響分析結(jié)果。
2.漂移
是指儀器穩(wěn)定后一段時間內(nèi)基線漂離原點的距離，通常用來衡量儀器穩(wěn)定快慢。高品質(zhì)的儀器能在較短的時間內(nèi)達到穩(wěn)定，從而在一定程度上提高了分析效率。
3.定性定量重復性
主要是考核儀器穩(wěn)定性的指標，這對于分析樣品來說是非常重要的。好的儀器其穩(wěn)定性應該是十分優(yōu)秀的，這就要求多次進樣保留時間及含量的一致性，這樣做出來的結(jié)果才能使人信服。
4.最小檢測濃度(最小檢測限)
最小檢測限是反映儀器靈敏度的重要參數(shù)。CL=2NdC/H(CL ：最小檢測濃度 Nd:噪音 C：樣品濃度最小檢測濃度 H：樣品峰高)由上式可見，最小檢測濃度是和噪音成正比的，噪音越大，最小檢測濃度就越大，靈敏度就越低。某些廠家回避了這個指標，說明他們不愿在最小檢 測濃度的基礎(chǔ)上去比較噪音。
標簽: 液相色譜儀 液相色譜儀標簽： 選購優(yōu)良液相色譜儀應該考慮的地方_液相色譜儀組合標題：
449717568
