選對(duì)色譜柱，快速開發(fā)方法
色譜分析中色譜柱的選擇是方法開發(fā)過程中重要的一步，對(duì)于分離效率具有重大影響。一旦選錯(cuò)了色譜柱，將會(huì)無謂地延長和消耗方法開發(fā)和優(yōu)化的時(shí)間和精力。許多實(shí)驗(yàn)室常常限制色譜柱的選用，常會(huì)將其方法建立在一種主流的色譜柱化學(xué)（例如慣用的端基封口的C18 色譜柱）上。然而，隨著色譜柱技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)在有了差異性不斷增加的基質(zhì)顆粒和配體化學(xué)可供方法開發(fā)時(shí)篩查選擇性和改善分離之用。
本文通過眾多不同的色譜柱在選擇性上的變化的實(shí)例，概述選擇較優(yōu)色譜柱固定相的重要性。
跨越眾多色譜柱化學(xué)的樣品篩查使用配有色譜柱管理器的ACQUITY UPLC H-Class 系統(tǒng)完成。化合物洗脫次序的變化通過UV和MS檢測(cè)器檢測(cè)。正確選擇色譜柱對(duì)于快速建立有效的方法和最大限度地降低進(jìn)一步方法開發(fā)和優(yōu)化的需求是非常重要的。
儀器和耗材
Ziprasidone（齊拉西酮）堿降解樣品：將氫氧化鈉加入到Ziprasidone 標(biāo)準(zhǔn)溶液中，將反應(yīng)液加熱2 小時(shí)，用酸中和，轉(zhuǎn)移至樣品瓶中供進(jìn)樣用。
總之，Ziprasidone（齊拉西酮）堿降解樣品表明在各種色譜柱顆粒和配體上的非常不同的選擇性。若初始選擇BEH C18或HSS T3 則需要增加方法優(yōu)化步驟以便完全分離各個(gè)組份。相反，通過快速的寬范圍的色譜柱篩查，選擇早已表明良好分離的色譜柱則不必去做進(jìn)一步方法開發(fā)工作。此例中，CSHC18由于其尖銳的峰形和雜質(zhì)與主峰之間優(yōu)良的分離度而被選中。
結(jié)論
通盤考慮適宜的顆粒基質(zhì)和鍵合相化學(xué)選擇色譜柱對(duì)于快速開發(fā)有效的分離方法是一個(gè)重要工具。假如在開發(fā)新方法時(shí)一開始就沒選對(duì)色譜柱將會(huì)導(dǎo)致昂貴的和不必要的后續(xù)優(yōu)化試驗(yàn)。隨著色譜柱技術(shù)的進(jìn)展，有日益增多的不同基質(zhì)顆粒和配體的色譜柱可供選擇，用以優(yōu)化色譜性能。對(duì)于任何基質(zhì)中的組份分離，通過寬范圍的色譜柱化學(xué)篩查樣品的做法值得推崇。
氣相色譜柱是一種常用的色譜柱產(chǎn)品，在石油、化工、生物化學(xué)、醫(yī)藥衛(wèi)生、食品工業(yè)、環(huán)保等方面應(yīng)用很廣。
氣相色譜柱的工作原理
色譜柱利用色譜柱先將混合物分離，然后利用檢測(cè)器依次檢測(cè)已分離出來的組分。色譜柱的直徑為數(shù)毫米，其中填充有固體吸附劑或液體溶劑，所填充的吸附劑或溶劑稱為固定相。與固定相相對(duì)應(yīng)的還有一個(gè)流動(dòng)相。流動(dòng)相是一種與樣品和固定相都不發(fā)生反應(yīng)的氣體，一般為氮或氫氣。 待分析的樣品在色譜柱頂端注入流動(dòng)相，流動(dòng)相帶著樣品進(jìn)入色譜柱，故流動(dòng)相又稱為載氣。載氣在分析過程中是連續(xù)地以一定流速流過色譜柱的;而樣品則只是一次一次地注入，每注入一次得到一次分析結(jié)果。 樣品在色譜柱中得以分離是基于熱力學(xué)性質(zhì)的差異。固定相與樣品中的各組分具有不同的親合力(對(duì)氣固色譜儀是吸附力不同，對(duì)氣液分配色譜儀是溶解度不同)。當(dāng)載氣帶著樣品連續(xù)地通過色譜柱時(shí)，親合力大的組分在色譜柱中移動(dòng)速度慢，因?yàn)橛H合力大意味著固定相拉住它的力量大。親合力小的則移動(dòng)快。
檢測(cè)器對(duì)每個(gè)組分所給出的信號(hào)，在記錄儀上表現(xiàn)為一個(gè)個(gè)的峰，稱為色譜峰。色譜峰上的極大值是定性分析的依據(jù)，而色譜峰所包羅的面積則取決于對(duì)應(yīng)組分的含量，故峰面積是定量分析的依據(jù)。一個(gè)混合物樣品注入后，由記錄儀記錄得到的曲線，稱為色譜圖。分析色譜圖就可以得到定性分析和定量分析結(jié)果。
裝填好的色譜柱連接在高效氣相色譜儀上后，先試壓和試漏，然后在恒溫下用載氣吹洗數(shù)小時(shí)，再進(jìn)行分析，此過程稱為色譜柱老化。
一、色譜柱老化的目的：
1、任何制作好的新柱，在色譜柱涂漬過程中難免柱內(nèi)殘留有機(jī)溶劑，任何固定液都有低沸點(diǎn)的不純物，不經(jīng)老化就用于分析，上述低沸點(diǎn)物質(zhì)大量從柱中流出，會(huì)造成基線不穩(wěn)，有時(shí)還會(huì)污染檢測(cè)器。
2、促使固定液均勻牢固地分布在載體和色譜柱內(nèi)壁，提高柱分離效能，消除不良影響。
3、促使色譜柱內(nèi)固定相排布更加緊湊和均勻，提高柱性能并使其穩(wěn)定。
裝填好的色譜柱經(jīng)過老化后，柱效和性能穩(wěn)定了，才可使用。
二、色譜柱老化注意事項(xiàng)：
1、新制作好的色譜柱老化時(shí)一定不能接檢測(cè)器，否則容易污染檢測(cè)器。
2、老化溫度應(yīng)高于分析使用溫度25℃以上，但不能超過固定液允許的最高使用溫度。
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