避免這個(gè)問(wèn)題就能提高高效液相色譜柱其使用壽命
色譜柱用久后常出現(xiàn)柱壓升高,柱效降低,峰形畸變, 保留時(shí)間改變等變化,如不采取適當(dāng)措施,色譜柱將無(wú)法再使用,縮短色譜柱的使用壽命。在高效液相色譜儀的使用中,保持高效液相色譜柱的柱效、容量和滲透特性,延長(zhǎng)柱子的使用壽命非常重要。
1.流動(dòng)相對(duì)色譜柱的損害因素
顆粒雜質(zhì):目前廣泛使用的柱填料直徑多在10um以下,微小的顆粒雜質(zhì)很容易使柱子發(fā)生堵塞,因此使用的溶劑應(yīng)當(dāng)過(guò)濾,柱子上端接頭應(yīng)當(dāng)裝微孔過(guò)濾片以阻擋顆粒物進(jìn)入柱中。
水溶液中的微生物:以水溶液為流動(dòng)相時(shí),應(yīng)防止細(xì)菌的生長(zhǎng),五氯酚、疊氮化鈉、辛酸等能防止細(xì)菌生長(zhǎng)。當(dāng)用水溶液或有機(jī)酸緩沖液保護(hù)柱子時(shí),一些厭氧霉菌可能在色譜柱中滋生,堵塞固定相顆粒間的空隙。
pH值:對(duì)硅膠基鍵合相填料,水溶液pH值不可超過(guò)2-7.5這一范圍,當(dāng)pH>8時(shí),硅膠會(huì)釋出
生成絮狀物堵塞柱子,且難以復(fù)原,柱效很快降低,甚至完全失效。
鹽類析出:當(dāng)在流動(dòng)相緩沖液中加入和水混溶的有機(jī)溶劑時(shí),其中的鹽類溶解度下降,可析出鹽類沉淀,堵塞柱子;加入粘度不同的樣品溶液也可能發(fā)生類似現(xiàn)象。所以緩沖液中鹽的濃度宜低,樣品提取液的組成應(yīng)和流動(dòng)相匹配。
2.樣品對(duì)色譜柱的損害因素
雜質(zhì)堵塞:樣品中的微粒同樣會(huì)使柱子堵塞,樣品也應(yīng)進(jìn)行過(guò)濾處理。
樣品組分的不可逆吸附:通常被吸附的組分有蛋白質(zhì)、醣等,可以采取加裝保護(hù)柱,或使用適應(yīng)的溶劑反沖來(lái)處理。常用溶劑有四氫呋喃(適用于溶解有機(jī)高聚物和工業(yè)樣品中的焦油)、高濃度的脲或鹽酸胍溶液(使蛋白質(zhì)改性而洗脫)、高離子強(qiáng)度的磷酸鹽緩沖液(pH=7,適合反相柱和離子交換柱,可除去蛋白質(zhì)和醣等)。
樣品組分與固定相反應(yīng):這種反應(yīng)對(duì)NH2柱的影響較嚴(yán)重,NH2易和酐、酮形成希夫(Schiff)縮合而減少活性點(diǎn),使保留時(shí)間縮短,因此羰基化合物樣品和流動(dòng)相(如丙酮、乙酸乙酯等)不宜使用NH2柱。
活性點(diǎn)被覆蓋:由于固定相吸附樣品中的組成或雜質(zhì)而使活性點(diǎn)被覆蓋,在柱壓升高的同時(shí)保留時(shí)間減少,將樣品過(guò)濾或使用萃取分離柱(對(duì)大分子有機(jī)物如蛋白質(zhì)、白細(xì)胞等)效果較好。
3.色譜柱固定相的化學(xué)變化
色譜柱固定相分解、活性基團(tuán)變性以及鍵合相基團(tuán)脫落會(huì)使保留時(shí)間顯著變化。
1)鍵合相基團(tuán)脫落
絕大多數(shù)鍵合相都是通過(guò)硅氧硅鍵(Si-O-Si)連接在硅基質(zhì)上,形成帶有機(jī)基團(tuán)的固定相Si-O-Si-R(R為 G18H37、C8H17、CnH2n+1)。硅氧硅鍵可在水溶液中水解而斷裂,使鍵合相基團(tuán)脫落,對(duì)C2和NH2柱鍵合相基團(tuán)脫落不可忽視。為減少或防止基團(tuán)脫落,可增加流動(dòng)相的有機(jī)溶劑量,降低離子強(qiáng)度和pH值,對(duì)基團(tuán)已脫落的固定相,可用合適的硅烷試劑再生。
2)固定相分解或活性基團(tuán)變性
例如氰基柱的保留時(shí)間顯著縮短,但鍵合相中C、H、N的百分含量并無(wú)大變化,證明未發(fā)生—CN水解成-COOH反應(yīng),而是形成了衍生物。在硅上增加烷基可減少水解。
4.高效液相色譜柱的保養(yǎng)
色譜柱在使用一段時(shí)間后,常遇到柱子受污染,柱效下降的問(wèn)題,采用適當(dāng)?shù)姆椒▽?duì)色譜加以保護(hù)和再生,能夠延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。
液相色譜柱是實(shí)驗(yàn)室一種常用的色譜配件，也是液相色譜儀的必不可缺的一部分，那么，我們?cè)谧鰳悠贩治龅臅r(shí)候，如果色譜柱出現(xiàn)柱子柱流失怎么辦呢？下面為大家講講。
首先明白液相色譜柱柱流失是不可避免的。柱流失程度與什么因素有關(guān)?
1、柱流失程度與固定相種類和色譜柱規(guī)格有關(guān)，一般固定相的量越多，柱流失則相對(duì)較高。
2、柱流失與柱溫以及載氣中氧氣的濃度有關(guān)。高溫下，固定相的分解會(huì)加快，因此，高溫時(shí)的流失會(huì)比低溫時(shí)高。氧氣是許多固定相分解的催化劑，特別是在高溫時(shí)段，強(qiáng)調(diào)載氣的純度和液相色譜柱安裝的氣密性，一方面就是出于氧氣會(huì)加劇柱流失的考慮。
3、此外，液相色譜柱隨著使用次數(shù)和時(shí)間的增加，固定相的穩(wěn)定性最終也會(huì)發(fā)生不可逆的變化，導(dǎo)致柱流失的增加。液相色譜柱柱流失嚴(yán)重情況多出現(xiàn)在進(jìn)樣的溶液類型，5MS的柱子是非極性的，當(dāng)使用極性溶劑時(shí)，就會(huì)發(fā)生反應(yīng)而導(dǎo)致大量柱流失，在做測(cè)試時(shí)一定要留意樣品的性質(zhì)。
1.漂移
漂移是指儀器穩(wěn)定后一段時(shí)間內(nèi)基線漂離原點(diǎn)的距離，通常用來(lái)衡量?jī)x器穩(wěn)定快慢。高品質(zhì)的儀器能在較短的時(shí)間內(nèi)達(dá)到穩(wěn)定，從而在一定程度上提高了分析效率。
2.系統(tǒng)的，整體開(kāi)發(fā)
這里指的是儀器的整體開(kāi)發(fā)，是一個(gè)完整的系統(tǒng)。目前市場(chǎng)上有這個(gè)現(xiàn)象，說(shuō)我的泵是進(jìn)口的，或者是檢測(cè)器怎么好，用了什么很多的進(jìn)口件組裝等等。其實(shí)這是個(gè)誤區(qū)。液相色譜是個(gè)復(fù)雜的系統(tǒng)，不是整體開(kāi)發(fā)的，各項(xiàng)指標(biāo)之間、軟件和硬件、硬件和硬件等都不匹配，整體水平不會(huì)高到哪里去，而且在售后服務(wù)方面對(duì)用戶也是不負(fù)責(zé)任的。
整體開(kāi)發(fā)的主要優(yōu)點(diǎn)有：各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)統(tǒng)一、儀器各單元的通信協(xié)調(diào)、能夠建立一個(gè)整體的數(shù)字化評(píng)價(jià)系統(tǒng)、體現(xiàn)了企業(yè)的科技及開(kāi)發(fā)實(shí)力。
3.操作方便
操作方便性無(wú)論是對(duì)新手還是成熟的用戶都是很重要的。液相色譜儀的操作越簡(jiǎn)單，有利于提高分析效率，也為以后分析方法的拓展提供有力的幫助。上海伍豐科學(xué)儀器有限公司的WS-100工作站軟件實(shí)現(xiàn)了真正的智能化操作。它摒棄了以往工作站軟件只能起到數(shù)據(jù)處理的理念，率先在國(guó)內(nèi)推出了集控制與后處理于一身的軟件，在操作使用上給用戶帶來(lái)了極大的方便。是反映儀器靈敏度的重要參數(shù)。CL=2×Nd×C/H(CL ：最小檢測(cè)濃度 Nd:噪音 C：樣品濃度最小檢測(cè)濃度 H：樣品峰高)由上式可見(jiàn)，最小檢測(cè)濃度是和噪音成正比的，噪音越大，最小檢測(cè)濃度就越大，靈敏度就越低。某些山東液相色譜儀廠家回避了這個(gè)指標(biāo)，說(shuō)明他們不愿在最小檢測(cè)濃度的基礎(chǔ)上去比較噪音.
4.噪音
噪音是指由儀器的電器元件、溫度波動(dòng)、電壓的線性脈沖以及其他非溶質(zhì)作用產(chǎn)生的高頻噪聲和基線的無(wú)規(guī)則波動(dòng)。噪音的大小直接關(guān)系到儀器的檢測(cè)靈敏度，噪音越大，檢測(cè)的靈敏度就越低。對(duì)于檢測(cè)低含量的樣品就要求儀器的噪音越小越好，否則噪音過(guò)大將會(huì)導(dǎo)致基線不穩(wěn)，甚至影響分析結(jié)果。
5.定性定量重復(fù)性
國(guó)產(chǎn)液相色譜儀廠家認(rèn)為主要是考核儀器穩(wěn)定性的指標(biāo)，這對(duì)于分析樣品來(lái)說(shuō)是非常重要的。好的儀器其穩(wěn)定性應(yīng)該是十分優(yōu)秀的，這就要求多次進(jìn)樣保留時(shí)間及含量的一致性，這樣做出來(lái)的結(jié)果才能使人信服。
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