紫外分光光度計是我們實驗室常用的定性、定量儀器，是我們檢測及科研必不可少的設(shè)備，用了這么多年的老搭檔你了解它嗎？
一、儀器的預(yù)熱問題
在一般分光光度計的使用說明書上，要求儀器預(yù)熱時間約20分鐘;若是帶微處理器的分光光度計，開機(jī)后儀器自動進(jìn)入自檢(初始化)狀態(tài)，約需10分鐘左右。
在分光光度計預(yù)熱這個環(huán)節(jié)上，很多使用者或多或少存在問題，如開機(jī)只預(yù)熱電路系統(tǒng)(不調(diào)節(jié)波長、打開吸收池暗箱蓋預(yù)熱等)或認(rèn)為初始化過程就是預(yù)熱等。
對帶微處理器有自檢功能的分光光度計，開機(jī)后儀器自檢(初始化)結(jié)束后，在測定窗口上，設(shè)置所需波長值，用一個吸收池裝上純凈水置于光路上，調(diào)“0000A”后，預(yù)熱儀器，當(dāng)儀器顯示讀數(shù)不再變化后即可進(jìn)行測定。
對于紫外可見分光光度計，由于有雙光源(鎢燈與氘燈)，為了延長燈的使用壽命，開機(jī)自檢完成后可以關(guān)掉測定時不用的光源燈。
二、吸光度測定重復(fù)性的問題
分光光度計在測定過程中，發(fā)現(xiàn)同一個溶液在不同時間里其測定結(jié)果不同，即重復(fù)性不好，其原因是什么？排除測定錯誤因素外，可能原因有：
① 儀器預(yù)熱時間不夠或預(yù)熱方法不對所造成，應(yīng)延長預(yù)熱時間或采用正確的預(yù)熱方法。
② 光電轉(zhuǎn)換器(如光電管)因長時間使用其光電轉(zhuǎn)換效率發(fā)生了變化導(dǎo)致。這時標(biāo)準(zhǔn)溶液與待測溶液的吸光度都同樣變低，在相對定量時對結(jié)果影響很小。但是對這類儀器，一般建議連續(xù)使用時間不應(yīng)超過3h，若需長時間使用，最好間歇30min。
三、使用注意事項
1、使用的吸收池必須潔凈，并注意配對使用。量瓶、移液吸管均應(yīng)校正、洗凈后使用。
2、取吸收池時，手指應(yīng)拿毛玻璃面的兩側(cè)，裝盛樣品以池體的4/5為度，使用揮發(fā)性溶液時應(yīng)加蓋，透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈，檢視應(yīng)無溶劑殘留。吸收池放入樣品室時應(yīng)注意方向相同。用后用溶劑或水沖洗干凈，晾干防塵保存。
3、供試品溶液濃度除各該品種已有注明外，其吸收度以在0.3～0.7之間為宜。
4、測定時除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對照，采用25px石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰±2nm以內(nèi)，測幾個點的吸收度或由儀器在規(guī)定的波長附近自動掃描測定，以核對供試品的吸收峰位置是否正確，并以吸收度最大的波長作為測定波長，除另有規(guī)定外吸收度最大波長應(yīng)在該品種項下規(guī)定的測定波長±2nm以內(nèi)。
5、供試品應(yīng)取2份，如為對照品比較法，對照品一般也應(yīng)取2份。并進(jìn)行平行操作，每份結(jié)果與平均值的偏差應(yīng)在±0.5%以內(nèi)。
6、選用儀器的狹縫寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則測得的吸收度值會偏低，狹縫寬度的選擇應(yīng)以減少狹縫寬度時供試品的吸收度不再增加為準(zhǔn)，對于大部分被測品種，可以使用2nm縫寬。
四、日常維護(hù)及保養(yǎng)
1、若實驗中需大幅度改變測試波長，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正“0”和“100%”點。然后再測量。
2、指針式儀器在未接通電源時，電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況，需進(jìn)行機(jī)械調(diào)零。
3、比色皿使用完畢后，請立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。
4、操作人員不應(yīng)輕易動燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。
5、一般的分光光度計，由于其光電接收裝置為光電倍增管，它本身的特點是放大倍數(shù)大，因而可以用于檢測微弱光電信號，而不能用來檢測強(qiáng)光。否則容易產(chǎn)生信號漂移，靈敏度下降。針對其上述特點，在維修、使用此類儀器時應(yīng)注意不讓光電倍增管長時間暴露于光下，因此在預(yù)熱時，應(yīng)打開比色皿蓋或使用擋光桿，避免長時間照射使其性能漂移而導(dǎo)致工作不穩(wěn)。
6、放大器靈敏度換擋后，必須重新調(diào)零。
7、比色杯必須配套使用，否則將使測試結(jié)果失去意義。在進(jìn)行每次測試前均應(yīng)進(jìn)行比較。具體方法如下：
分別向被測的兩只杯子里注入同樣的溶液，把儀器置于某一波長處。將某一個池的透射比值調(diào)至100%，測量其它各池的透射比值，記錄其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范圍內(nèi)則可以配套使用，若超出此范圍應(yīng)考慮其對測試結(jié)果的影響。
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